phVEGF_(165)原位转染缺血肌肉后hVEGF及其蛋白的表达

目的探讨慢性下肢动脉缺血的基因治疗。 方法选用血管内皮生长因子 (VEGF)作为治疗基因 ,通过建立实验兔慢性下肢动脉缺血模型 ,将构建的人VEGF1 6 5cDNA真核表达载体phVEGF1 6 5注入缺血肌肉内 ,采用RT -PCR和原位杂交法测定肌肉内hVEGF1 6 5基因表达 ,采用免疫组化和Western印迹法测定其蛋白产物的表达。 结果骨骼肌细胞外源性hVEGF1 6 5基因表达量于注射后 1周达到高峰 ,持续 2 ～3周。蛋白表达于注射后 2周达到高峰 ,维持至注射后 4周。 结论骨骼肌细胞能摄取并表达外源性hVEGF1 6 5基因 ,并能进一步合成分泌hVEGF1 6 5蛋白。phVEGF1 6 5肌肉直接注射的作用时间有限、范围局限 。

α-MSH基因转染的小鼠同种异体移植心脏存活期延长

目的观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)基因原位转染供者小鼠心脏对小鼠同种异体心脏移植排斥反应的影响。方法将携带α-MSH基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV-α-MSH)和单纯携带GFP的重组腺相关病毒(rAAV-GFP)分别经主动脉灌注原位转染供者小鼠心脏,再行同种异体心脏移植,观察心脏移植物的存活时间,测定移植心脏的C-MSH表达情况,并于术后7d测定移植心脏的细胞因子及趋化因子水平。结果腺相关病毒载体能有效地将α-MSH基因导入小鼠心脏,与rAAV-GFP空载体组[(7.0±0.33)d]和PBS组[(7.0±2.23)d]相比,rAAV-α-MSH原位转染组[(16.3±2.21)d]的心脏移植物存活时间延长。术后7d,rAAV-α-MSH原位转染组心脏移植物的Th1细胞因子(IL-2、IFN-α)水平较其它两组减低,而Th2细胞因子(IL-4、IL-10)水平升高,趋化因子MCP-1、RANTES水平下降。结论携带α-MSH基因的rAAV载体经原位转染供者小鼠心脏,能促进移植心脏局部的细胞因子格局由Th1型向Th2型偏移,降低趋化因子水平,从而延长同种异基因移植心脏的存活时间。

非病毒型DNA纳米微球层层组装构建多层膜用于原位基因传递

高效安全的基因传递体系是基因技术发展的关键问题.基于聚阳离子的基因纳米微球是一种典型的非病毒型基因载体,能够在体内外有效转染细胞.本文通过层层组装方法构建装载基因纳米微球的可降解多层膜,这种固相基因传递体系能实现材料表面的贴壁细胞的原位转染.与装载裸DNA的多层膜相比,基因纳米微球多层膜能更有效地原位转染贴壁细胞,这主要是因为DNA在此多层膜中仍处于与聚阳离子缔合的状态.构建于聚乳酸三维支架表面的基因纳米微球多层膜亦能实现支架表面贴壁细胞的原位转染.这种结构可控、易制备的基因纳米微球多层膜为精确控制基因纳米微球传递提供了一种新方法,也为基因治疗进一步应用于组织工程、介入治疗和医用植入体提供了一种可能的技术手段.