应用原位逆转录PCR技术检测Captopril对动脉粥样斑块中c-myc和c-fos mRNA表达的影响

目的 了解卡托普利对动脉粥样斑块中原癌基因 c- m yc和 c- fos m RNA表达的影响及原位逆转录 - PCR(IS-RT- PCR)技术在检测中的应用效果。方法 将 40只雄性日本大耳白兔随机分为对照组、胆固醇组及用药组 ,采用ISRT- PCR技术观察三组原癌基因 c- myc和 c- fos m RNA的表达及分布。结果 (1)胆固醇组的 c- m yc和 c- fosm RNA阳性率明显高于对照组 ,用药组则显著低于胆固醇组 ;(2 )主动脉粥样斑块中 c- m yc、c- fos m RNA呈强阳性反应 ,广泛分布于内膜层 ,阳性信号为核阳性 ;而用药组呈弱阳性反应 ,散在性分布。结论 提示卡托普利能显著抑制 AS斑块中原癌基因 c- m yc和 c- fos m RNA的表达 ,同时亦体现了 ISRT-

逆转录PCR及原位杂交检测人IgA肾病肾脏中TGF-β mRNA

为研究转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）在ＩｇＡ肾病病理机制中的作用，本文用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法及原位杂交法检测ＩｇＡ肾病患者肾活检组织中的ＴＧＦ－βｍＲＮＡ。结果证实：在人正常肾和ＩｇＡ肾病肾组织中均可检测到ＴＧＦ－βｍＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物；ＴＧＦ－βｍＲＮＡ原位杂交的阳性信号主要分布于肾小管和集合管上皮细胞内，肾小球内的阳性信号较弱，且强度与系膜的增生程度有关。

逆转录原位PCR检测博尔纳病病毒感染

目的:建立逆转录原位PCR检测博尔纳病病毒(BDV)的方法,并与其它检测方法进行比较.方法:构建包含BDV GFP-P24质粒的模拟BDV感染的OL细胞模型,检测其核酸的表达.对构建的OL细胞模型和各种阴性对照进行逆转录原位PCR的检测.使用逆转录原位PCR、荧光定量PCR和ELISA对BDV阳性的人和动物样本及阴性对照进行检测,并比较检测结果.结果:成功构建了含BDV-GFP-P24质粒模拟BDV感染的OL细胞.建立了逆转录原位PCR检测BDV的方法;对荧光定量PCR和ELISA的检测呈阳性的4个病例和检测呈阴性的10个病例,使用原位PCR检测可以得到基本一致的结果.结论:逆转录原位PCR原位可以用于检测人和动物的BDV感染和BDV感染机制研究.

原位逆转录PCR检测干细胞因子mRNA在白血病细胞的表达

目的探索应用原位逆转录PCR(RT-PCR)检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性。方法在普通的PE480型PCR仪进行原位RT-PCR,检测干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达。结果直接法和间接法原位RT-PCR均可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达,而常规的原位杂交则为阴性。结论(1)干细胞因子在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达,但是表达量较低,应用原位RT-PCR可进行检测;(2)在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR。

原位逆转录PCR检测ppGalNAcT-2在胃癌细胞株SGC-7901的表达

目的 探索建立原位逆转录聚合酶链式反应方法以用于检测 ppGalNAcT 2在细胞株中的表达。 方法 采用原位逆转录聚合酶链式反应检测胃癌细胞株SGC 790 1中 ppGalNAcT 2的表达。 结果 胃癌细胞株SGC 790 1中 ppGalNAcT 2表达有差异 ,在细胞株中约有 30 %的细胞表达。 结论 原位逆转录PCR技术用于探索ppGalNAcT 2 在肿瘤细胞中的表达是可行的 ,它有助于对ppGalNAcT 2功能的进一步了解。

应用定量PCR技术检测HIV-1逆转录环节的方法的建立

HIV—1的逆转录作用是其正链RNA在逆转录酶催化下生成双链DNA的过程，是HIV-1复制的重要环节，现已成为抗HIV-1药物研究的重要靶点。本研究应用SYBRGreenI荧光定量PCR技术建立了检测HIV-1逆转录环节的评价方法，

原位逆转录PCR检测胃癌及癌前组织中端粒酶RNA及其临床意义

目的 研究胃癌及癌前病变胃粘膜端粒酶RNA的检测及其临床意义。方法 选取经病理组织学证实的胃粘膜活检标本 15 0例 ,包括慢性浅表性胃炎 3 2例、肠上皮化生 3 6例、不典型增生 3 4例、胃癌 48例 ,采用原位逆转录PCR、端粒重复序列扩增 (TRAP)法检测上述胃粘膜端粒酶RNA与端粒酶活性。结果 原位逆转录PCR技术检测胃粘膜活检标本端粒酶RNA阳性率为 5 5 .3 % (83 / 15 0 ) ,显著高于TRAP法检测端粒酶活性阳性率 (4 0 .0 % ,60 / 15 0 ) ,P <0 .0 5。端粒酶RNA在胃癌及癌前病变 (包括肠上皮化生与异型增生 )中检出率显著高于浅表性胃炎 (P <0 .0 5 ) ,胃癌中端粒酶RNA检出率亦显著高于肠上皮化生及不典型增生 (P <0 .0 5 ) ,但后两者比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。端粒酶RNA主要分布于胃粘膜癌细胞及癌前病变上皮细胞的胞核内。结论 端粒酶RNA与胃癌的发生密切相关。原位逆转录PCR技术检测胃粘膜端粒酶RNA对胃粘膜癌变的早期诊断和预测有重要价值 。

逆转录-实时定量PCR检测胃癌和肠癌病人CEA基因的表达

目的:通过检测胃癌和肠癌病人外周血中肿瘤细胞的CEAmRNA拷贝数,以实现对其肿瘤血运转移的定量监测。方法:采用逆转录-实时定量PCR技术检测65例正常人外周血和48例胃癌和肠癌病人外周血及肿瘤组织中CEAmRNA的拷贝数。结果:65例正常人外周血中无一检测到CEA基因转录本。经组织病理学诊断为恶性肿瘤的组织中CEA表达率为100％,CEAmRNA拷贝数在105～107/mg。48例肿瘤病人外周血CEA表达率为33.3％,CEAmRNA拷贝数范围在（101～103.2）/ml。结论:逆转录-实时定量PCR技术能特异、灵敏地检测胃癌和肠癌病人外周血中CEAmRNA,能早期客观地反映病人体内微转移的状况。

差异显示逆转录PCR技术及其应用和进展

差异显示逆转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）技术是一种筛选和克隆差异表达基因的新方法。该方法利用ｃＤＮＡ逆转录技术、ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）的高效扩增和凝胶电泳分离技术，能同时显示多种来自相关细胞的ｍＲＮＡ样品。可用于多种研究目的，如鉴别和观察基因表达的改变；差异表达基因的迅速测序并与基因库比较；单个的差异表达基因片段能迅速克隆并制成探针从ｃＤＮＡ文库或基因组文库中分离基因等。ＤＤＲＴ－ＰＣＲ技术具有迅速、简便、灵敏和高效等优点，已被广泛地应用于癌症、心脏疾病、细胞分化、衰老及其它领域的研究中，并且在应用中被不断地改进和发展而更趋合理和完善。

原位PCR技术检测肾组织乙肝病毒DNA的临床价值

目的 :探讨原位PCR技术检测肾组织乙肝病毒DNA的可靠性。方法 :将肾活检确诊为乙肝病毒相关性肾炎患者 5 9例与血清单纯HBsAb阳性且肾组织未查到HBsAg病人 15 2例的肾组织PCR检查结果 ,按照诊断试验的研究方法进行比较。结果 :PCR检测肾组织HBVDNA的假阳性率 5 3 2 9% ,假阴性率 49 15 % ,诊断符合率47 87%。结论 :原位PCR检测肾组织中HBVDNA有较高的假阳性率和假阴性率 。

端粒酶逆转录酶基因在口腔癌前病变及鳞癌的表达

目的 观察端粒酶催化蛋白基因 (h TRT)在口腔癌前病变及鳞癌中的表达 ,探讨其与口腔鳞癌(OSCC)发生发展及临床病理特征之间的关系。 方法 用原位杂交技术检测 5 4例标本 ,其中正常口腔粘膜 6例、上皮非典型增生 15例、口腔粘膜鳞癌 33例。 结果 正常口腔粘膜组织中 h TRT的 m RNA表达较弱 ,阳性信号仅局限于上皮基底层及副基底层间 ,阳性率 16 .6 7% (1/ 6 ) ;上皮非典型增生中 h TRT的 m RNA阳性表达见于多层上皮细胞 ,并随细胞异形性增高而表达增强 ,阳性率 6 0 % (9/ 15 ) ;口腔粘膜鳞癌组织中 h TRT的 m RNA有较强阳性表达 ,阳性率 87.88% (2 9/ 33) ;OSCC组织中 h TRT m RNA的表达与肿瘤临床病理分化无关 ,与淋巴结转移密切相关。 结论 端粒酶 h TRT基因的表达在

原位PCR技术及其应用

目的阐述原位PCR技术的基本原理、进展、应用及存在问题。方法通过检索国内、外相关文献,归纳整理;结合实践操作经验,展开分析。结果原位PCR技术是一种特异性、敏感性较高的靶序列检测定位技术,作为研究基因信息和细胞、染色体等的形态信息的有力工具,尤其是专用原位PCR仪在医学研究(医学检验、病理学领域)上的广泛应用。结论原位PCR技术的应用推广及研究深入,也存在其技术应用不完善之处。

可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA 技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度. 结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系. 结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

用原位PCR技术检测乙型肝炎病毒相关性肾炎活检组织之中的HBV—DNA

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染在乙肝相关性肾炎的发病机理。方法：应用原位PCR技术检测21例临床诊断为HBV相关性肾炎患者的肾活检组织。结果：21例肾活检组织中HBVDNA阳性15例（71%），HBV-DNA主要存在于肾脏的肾小球毛细血管袢，肾小管，以近曲小管为著。细胞内主要以浆核型为主。结论：乙型肝炎病毒肝相关性肾炎肾组织中有HBV-DNA的存在，推测HBV感染可能直接引起肾脏的免疫反应。

原位PCR技术在兽医分子生物技术中的应用

本文阐述了原位PCR技术的原理、操作步骤及注意事项,原位PCR中非特异性问题及主要技术难点,原位PCR结果对照实验的目的和设计方法,不同原位检测技术的应用比较及其在兽医分子生物技术的应用和前景。对临床兽医分子水平的研究和诊断具有一定的指导作用,是兽医分子生物技术的重要研究内容。

原位PCR技术研究鼻咽癌组织中bcl-2/JH融合基因

为研究 bcl- 2 / JH融合基因与鼻咽癌发生的关系 ,应用半套式原位 PCR技术对 41例石蜡包埋鼻咽癌组织中 bcl- 2 /JH融合基因进行检测。结果发现 41例癌组织中 bcl- 2 / JH融合基因阳性 6例 ,阳性率为 1 4 .6 % ,bcl- 2基因的两个热点断裂区 mbr和 m cr与免疫球蛋白重链 JH形成的融合基因 m br- JH和 m cr- JH各占 5 0 %。 bcl- 2 / JH融合基因形成与癌组织学分级和转移间无明显关系 (P>0 .0 5 )。本文表明 bcl- 2 / JH融合基因与鼻咽癌发生可能有一定关系 ,其中 m br- JH和 m cr- JH同为bcl- 2基因在鼻咽癌的两个重要基因异常改变形式。