原位聚合酶链式反应

原位聚合酶链式反应黄建生，王昌才（第一军医大学分子生物学研究所，广州５１０５１５）关键词原位ＰＣＲ原位聚合酶链式反应（ＩｎＳｉｔｕＰＣＲ，ＩＳＰＣＲ）是由Ｈａａｓｅ等于１９９０年首创，当时称为“细胞内ＰＣＲ”（ＩｎＣｅｌｌＰＣＲ）。顾名思义，该方法就...

原位聚合酶链反应检测在B细胞系非霍奇金病中的作用

目的 探讨用原位聚合酶链反应 (PCR)检测B细胞系非霍奇金病的意义。方法 用免疫球蛋白重链 (IgH)第三互补决定区引物 ,生物素标记扩增产物直接原位PCR扩增 15例非霍奇金病患儿外周血淋巴细胞。结果 15例非霍奇金病中 ,12例检测到特异性基因重排 ,4例呈现淋巴瘤性白血病 ,治疗后骨髓完全缓解 ,2例间期细胞原位PCR仍显示有IgH基因重排 ,分别于 3个月及 6个月复发。 结论 原位聚合酶链反应检测非霍奇金病不失为一种简单、快速、灵敏的方法 ,并能帮助预测复发。

原位聚合酶链反应检测肝细胞内乙型肝炎病毒共价闭合环状的DNA表达

目的探讨乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV-cccDNA)在慢性乙肝患者肝细胞中的表达及意义。方法选取活动性乙型肝炎及乙型肝炎后肝硬化患者肝穿或重症乙肝患者尸检肝组织标本50例,经10%甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,用0.05%多聚赖氨酸处理后使用。分别设立无引物、无地高辛标记引物、无TaqDNA聚合酶PCR反应体系及非乙肝患者肝组织共10例作为阴性对照。采用原位PCR技术进行HBV-cccDNA检测。结果HBV-cccDNA在乙肝患者肝细胞中阳性表达以核型为主,呈蓝紫色,在肝细胞中总阳性表达率为60%～85%;偶见于细胞浆中,对照组均为阴性。结论原位PCR可以在肝细胞原位检测出HBV-cccDNA,阳性信号以核型为主,提示HBV-cccDNA主要存在于细胞核中,为乙肝病毒持续感染及复制的根源。

原位聚合酶链反应检测结核分枝杆菌L型的初步研究

目的 :建立一种不需提取DNA的检测分枝结核杆菌L型的分子生物学方法。方法 :采用原位聚合酶链反应 (原位PCR)技术 ,扩增结核杆菌L型及其感染的人和小鼠血标本中的结核杆菌IS 6 110基因 ,再用免疫组化技术显色。结果 :结核杆菌L型菌株中的DNA被扩增 ,血标本中 ,可见到红细胞和淋巴细胞周围粘附大量结核杆菌DNA阳性颗粒。结论 :红细胞和淋巴细胞具有免疫粘附功能 ;原位PCR快速、简便 ,可用于检测稳定和不稳定分枝杆菌L型。

应用聚合酶链式反应和原位杂交方法检测胎儿组织中人微小病毒B19核酸序列

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测了７例胎儿的１２份组织标本，在４份脑组织和１份脾组织中扩增出７００ｂｐ片段，经酶切鉴定证明其为特异性片段。用地高辛标记的人微小病毒Ｂ１９（ＰＶＢ１９）ＤＮＡ探针对ＰＣＲ检测阳性标本进行原位杂交，在２份脑组织和１份脾组织中检出了ＰＶＢ１９ＤＮＡ阳性颗粒，ＰＣＲ和原位杂交方法结合应用可为胎儿ＰＶＢ１９感染的病原学诊断和致病机理的研究提供一套持异、敏感和准确的实验方法。

原位聚合酶链反应技术的发展和应用

原位聚合酶链反应（ｉｎｓｉｔｕＰＣＲ）是一项高新生物技术，它不仅可以检测在细胞中微量的ＤＮＡ或者ＲＮＡ，而且可以精确定位，因此在分子病理学、分子生物学、分子遗传学和微生物学等领域都有重要的应用价值。本文根据最新的研究资料，介绍了这项技术的基本原理、分类、主要实验步骤和注意事项，并建议在间接原位聚合酶链反应（ｉｎｄｉｒｅｃｔｉｎｓｉｔｕＰＣＲ）中用引物原位标记（ＰＲＩＮＳ）技术代替荧光标记原位杂交（ＦＩＳＨ）检测信号。

用原位聚合酶链反应检测肝癌石蜡包埋组织中的HBV—DNA

为研究乙型肝炎病毒(HBV)感染和肝细胞癌(HCC)之间的关系,我们建立了原位聚合酶链反应(ISPCR)并检测26例HCC石蜡包埋组织中的HBV—DNA。结果显示,HBV DNA在肝癌组织和癌旁肝组织的阳性率分别为84.6％(22/26)、91.3％(21/23)。ISPCR技术既显示了PCR技术的高敏性和特异性,又能在细胞内定位,是研究HBV与HCC关系的一项有价值的技术。

石蜡包埋组织中目的基因原位逆转录-聚合酶链反应检测

目的探讨原位逆转录 -聚合酶链反应技术 (ISRT -PCR)在普通制作石蜡包埋组织中的应用及价值。方法应用直接法ISRT -PCR方法对普通制作、石蜡包埋淋巴瘤组织中的丙型肝炎病毒 (HCV)基因组序列进行检测。结果从存档多年的福尔马林固定、普通制作石蜡包埋淋巴瘤组织中检测到HCVRNA序列。结论ISRT -PCR可用于福尔马林固定。

聚合酶链反应(PCR)技术的新发展——原位PCR

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术诞生于1985年,它是根据生物体内DNA复制过程而设计的在体外对特定基因序列进行快速扩增的一项新技术。它以待扩增的DNA为模板,由一对人工合成的寡核苷酸介导,通过DNA聚合酶的酶促反应,快速体外扩增特异的DNA序列。

细菌培养与聚合酶链反应(PCR)检测在细菌性痢疾检测中的应用分析

探究细菌培养与聚合酶链反应(PCR)检测在细菌性痢疾检测中的应用价值。方法 选取我院就诊的800例腹泻患者作为检验样本(2021.11~2023.11期间),使用细菌培养方法,聚合酶链反应(PCR)检测方法,探讨不同年龄段患者的细菌性痢疾检出率。结果 聚合酶链反应(PCR)检测检出率:(75.00%),(33.33%),(50.00%),(41.67%),(40.00%),(27.14%),(33.33%),(60.00%),(50.00%),(55.25%)优于细菌培养阳性检出率:(2.78%),(2.22%),(3.33%),(5.00%),(2.00%),(4.29%),(3.33%),(6.67%),(5.00%),(3.25%),(p值小于0.05)。结论 细菌培养与聚合酶链反应(PCR)检测在细菌性痢疾检测中,聚合酶链反应(PCR)检测方法,应用价值更为理想,可准确的评估患者是否存在细菌性痢疾疾病,有助于临床医师结合检测数据,为患者后期治疗提供理论借鉴依据,进一步改善患者的治疗效果,有临床推广及借鉴意义。

原位聚合酶链反应在皮肤性病学及某些医学领域中的应用

本文简述了原位聚合酶链反应的原理、分类和基本操作程序,着重从四个方面介绍了该技术在皮肤性病学及某些医学领域中的应用即:外源性感染基因的检测、外源性导入基因的检测、内源性异常或变异基因的检测和内源性固有基因的检测。

原位聚合酶链反应及其在眼科的应用

原位ＰＣＲ是一种能在组织细胞原位对目的基因进行扩增，用原位杂交技术进行定性、定量和定位研究的技术。它是ＰＣＲ和原位杂交结合的产物，具有高度敏感性、特异性，并能在细胞形态学上准确定位的特点。

原位多聚酶链式反应（InSituPCR）技术的应用和发展

原位ＰＣＲ是一项新的分子技术，它结合了原位杂交技术和ＰＣＲ技术的优点，具有高度的敏感性、特异性，并能进行精确的定位，在研究工作和临床诊断上有广阔的应用前景。本文论述了原位ＰＣＲ的原理、方法、应用、技术要点及常见错误的赝象的排除，以期对原位ＰＣＲ的应用提供一点参考。

原位聚合酶链反应技术及其在消化道肿瘤相关病毒基因检测中的应用

为克服核酸原位杂交技术(ISH)和聚合酶链反应(PCR)的不足,我们应用分子病理学原理建立了原位PCR(PCRIS)、反转录原位PCR(RT—PCRIS)技术,对27例原发性肝癌(HCC)组织中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)、54例胃癌(GC)组织中EPstein—Barr病毒脱氧核糖核酸(EBV DNA)及20例食道癌(EC)组织中人乳头状瘤病毒DNA(HPV DNA)进行原位分析。结果显示HCV RNA、EBVDNA及HPV DNA阳性率分别为78％、29％及25％,明显高于ISH检测结果(P<0.05)。提示本研究建立的PCRIS、RT—PCRIS技术特异、灵敏、定性、定位;HCV、EBV、HPV感染分别与HCC、GC及EC发生、发展密切相关。

透明导电玻璃(ITO)基材自加热传感静态芯片聚合酶链反应(PCR)

利用商品化ITO玻璃导电层的温阻效应,无需任何微加工手段,实现了自加热和传感的芯片温度自动程序控制,最大程度地减小了传感滞后对温度控制稳定性的影响,温度控制的稳定性达到了0.2℃,升温速度最快可达20℃/s以上,在冷却风扇辅助下降温速度最快达到了8℃/s.芯片温控单元的引线从传统的两对(一对用于传感,一对用于加热)减少为一对.通过在该芯片上直接构建多个开放微池反应器的方法成功地实现了λDNA 157 bp片段的并行扩增.将该芯片置于倒置荧光显微镜样品台上,以蓝色(575 nm)发光二极管为光源,以光电倍增管为检测手段检测了dsDNA和SYBR GreenⅠ嵌合物的荧光强度随温度的实时变化曲线.

应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测野猪的氟烷基因

猪应激综合征(ProcineStressSyndrome,PSS)是指猪在应激因子的作用下发生恶性高热综合症(MalignantHyper thermiaSyndrome, MHS)。试验随机选取18头纯种野猪提取基因组DNA进行聚合酶链式反应,扩增得到RYR1 基因特异片段,经过HhaⅠ酶切阳性鉴定可断定这18头猪的RYR1 基因都没有发生突变,因此不存在猪应激综合征问题。

用聚合酶链反应(PCR)检测对虾杆状病毒

用聚合酶苗反应（PCR），对36份养殖中国对虾，13份海水、虾池底泥、饵料生物及其它养殖环境中的甲壳动物进行了杆状病毒检测，共检出带毒虾23份，带毒海水1份。电子显微镜技术证实了检测的可靠性。

聚合酶链反应(PCR)法检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因

根据已报道的鱼源嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶基因序列设计和合成了 1对可扩增目的片段长度为 893bp的引物 ,建立了检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因 PCR方法。脱脂奶平板产溶蛋白圈的 10株鱼源嗜水气单胞菌株以及 ATCC796 6检测均为阳性 ,检测的灵敏度可达 2 .0× 10 - 3g/ L的模板 DNA。表明 PCR法在分子水平快速。