原位滚环扩增技术在肝组织HBVcccDNA表达的检测中的应用

目的运用原位滚环扩增和原位PCR方法检测HBVcccDNA在肝组织中的表达。方法收集20例乙肝表面抗原携带者、慢性乙型肝炎、慢性乙型肝炎后肝硬化及肝细胞性肝癌患者的石蜡包埋肝组织切片,采用PSAD酶消化、原位滚环扩增方法及使用根据HBVcccDNA与HBVrcDNA结构上的差异而设计的地高辛标记的原位跨缺口引物进行原位PCR,然后用免疫组织化学方法进行显色,显微镜下观察HBVcccDNA在肝组织中表达分布,并对结果进行评价分析。结果：20例标本中有15例可见HBVcccDNA阳性信号,组织切片阳性表达率为平均40-85%,以核型为主,呈蓝色、紫色或紫蓝色,呈颗粒状、弧形或圆形团块状,主要在核及核膜上表达。结论原位滚环扩增方法用于检测肝组织中HBVcccDNA的表达,具有敏感性高、特异性强的特点。

滚环扩增(RCA)技术放大信号实现17β-雌二醇(E2)的超灵敏检测

目的为实现食品中17β-雌二醇(E2)污染物的超灵敏检测,本研究将适配体、分子信标和滚环扩增(RCA)技术相结合,用于E2的荧光检测。方法E2能解旋由适配体和cDNA杂交生成的复合DNA,使cDNA游离并与环DNA特异性结合,在Phi29酶的作用下生成长单链DNA。长单链DNA与分子信标杂交后,解旋分子信标的发夹结构,使FAM荧光基团的荧光恢复,从而实现E2的超灵敏检测。结果经过条件优化,在0.001ng/mL-10ng/mL的浓度范围内E2浓度与荧光强度呈现良好的线性关系:y=594.17LgC+3868.87(R 2=0.9758),检出限为0.19 pg/mL。在牛奶和自来水中,加标回收率分别为81.33%-117.42%和89.25%-107.04%,相对标准偏差是2.02%-3.13%和1.09%-2.45%。结论在本研究中,我们基于适配体技术和等温扩增技术提出了一种E2的超灵敏荧光检测方法。该方法灵敏度高、特异性强、操作简单、实验仪器要求低。该策略为E2的检测提供了一种新的方法,也为其他污染物的检测提供了新的思路。

猪输血传播病毒检测方法研究进展

猪输血传播病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)是一种单链,无包膜的DNA病毒。在健康的或患有某些疾病的猪中,都能检测到它的存在,具有很高的流行率。目前,针对TTSuV的检测方法有多种,如PCR方法,血清免疫学方法等,但是各有优缺点,因此本文就现有的TTSuV检测方法做一个简单综述,使读者能够对TTSuV的检测方法有一个全面了解。