人体血清中原卟啉Ⅸ自体荧光光谱研究

通过对人体血清样品和模拟人体生理条件下原卟啉Ⅸ和牛血清白蛋白混合溶液的荧光光谱测定和分析,表明人体血清中原卟啉Ⅸ的自体荧光光谱主要来自于原卟啉Ⅸ和血清白蛋白的结合形式。此外,还考察了血清白蛋白和原卟啉Ⅸ对原卟啉Ⅸ荧光发射峰的影响。和不含有白蛋白的原卟啉Ⅸ溶液相比较,白蛋白不但使原卟啉Ⅸ产生的荧光峰发生红移,而且具有很强的增敏效应。在白蛋白存在条件下,当原卟啉Ⅸ浓度值小于0.8×10-5mol·L-1时,随着它的浓度增加,原卟啉Ⅸ的荧光发射峰稍有红移;而当原卟啉Ⅸ浓度值大于0.8×10-5mol·L-1时,其荧光发射波长几乎不随原卟啉Ⅸ浓度而变化。

声化学激活原卟啉Ⅸ杀伤艾氏腹水瘤细胞的分子机理

采用频率为2.2MHz、声强为3W/cm2的低强度聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的损伤进行研究,并初步探讨其作用的生物学机制。分别用荧光分光光度法、激光共聚焦扫描显微镜分析原卟啉Ⅸ在肿瘤细胞内的积聚、定位情况;利用台盼蓝拒染法测定聚焦超声激活原卟啉Ⅸ对细胞存活率的影响;透射电镜观察细胞的超微结构变化;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorodihydrofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;硫代巴比妥酸法检测细胞膜脂质过氧化水平的变化。通过研究发现,艾氏腹水瘤细胞对原卟啉Ⅸ有一定的选择性吸收和留作用,原卟啉Ⅸ主要定位于细胞的线粒体中;在超声结合原卟啉Ⅸ作用下,艾氏腹水瘤细胞的存活率明显下降;细胞的超微结构发生明显损伤;线粒体膜电位下降;ROS生成量显著增加;脂质过氧化水平显著增加。研究结果表明:超声激活原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞有着明显的协同杀伤效应,其间产生的活性氧自由基作用,降低线粒体膜电位,增加膜的脂质过氧化水平,可能是其损伤艾氏腹水瘤细胞的主要因素之一。

5-氨基乙酰丙酸诱导原卟啉Ⅸ在大鼠大肠癌组织中积聚的特征研究

目的探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)诱导原卟啉IX(PpIX)在大肠肿瘤内积聚的特性。方法腹腔注射DMH溶液(1,2-二甲肼)建立大肠癌大鼠模型。尾静脉注射5-ALA溶液,对正常、早癌及进展期癌3组大肠组织分别取样,用化学抽提法提取组织原卟啉IX并定量检测其含量。结果在正常组、早癌组和进展期癌组中,大肠组织原卟啉IX含量差别均具有统计学意义,其原卟啉IX含量的平均值分别为(622.966±61.85)ng/g、(763.098±83.93) ng/g、(844.164±87.56)ng/g。结论5-ALA诱导原卟啉IX在大鼠大肠正常组织和癌组织中的积聚差异显著,为大肠早癌的荧光光谱诊断提供了实验依据。

激光诱导荧光光谱中内源性原卟啉Ⅸ对胃癌生长状态的标示作用

用不同的生物治疗方式治疗人胃癌的裸鼠模型,通过测量治疗后的瘤体体积和检查病理组织学的变化,确定了各组胃癌组织中癌细胞的不同坏死程度。应用激光诱导自体荧光光谱系统测量不同坏死程度的胃癌组织的自体荧光光谱。结果发现,随肿瘤坏死程度的加重,自体荧光光谱中内源性原卟啉Ⅸ(Pp Ⅸ)的特征峰值降低,而烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的特征峰未能提示该变化。表明Pp Ⅸ可以作为标识,灵敏地表征胃癌组织的生长状态。

原卟啉Ⅸ-声动力学疗法诱导S180肿瘤细胞的凋亡

采用频率为2.2MHz,声强为3W/cm2的低强度聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞的损伤以及诱导细胞凋亡的发生进行研究,并探讨其作用的分子机制。超声激活原卟啉Ⅸ作用于S180肿瘤细胞处理后,不同时间段取材,通过Annexin V-PI荧光双染观察凋亡细胞的形态学变化;采用TUNEL末端标记法检测细胞凋亡的发生率;利用间接免疫荧光技术和免疫细胞化学技术检测细胞内凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-3以及死亡底物聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的表达活性变化。实验结果显示:超声激活原卟啉Ⅸ可以诱导S180肿瘤细胞凋亡的发生,并且凋亡细胞的比例随着取材时间的延迟明显增加;免疫细胞化学染色表明声动力学处理显著增强了细胞内Caspase-8和Caspase-3的蛋白表达活性,并且其活化程度分别于处理后1h和3h达到最高,而死亡底物PARP也发生时间相关性剪切。研究表明,超声结合原卟啉Ⅸ可以通过诱导细胞凋亡的方式发挥其抗肿瘤活性,其作用的分子机制可能涉及到膜受体介导的Caspase-8。

血红素氧合酶-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ对裸鼠胃癌腹膜转移的抑制作用

背景:前期研究证实血红素氧合酶-1(HO-1)是与人胃癌腹膜高转移细胞株GC9811-P具有亲和力的多肽序列PⅢ的天然配体,两者结合可能抑制胃癌的腹膜转移。目的:探讨HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)对裸鼠胃癌腹膜转移的抑制作用及其可能机制。方法:48只BALB/c裸鼠经GC9811-P胃癌组织块胃壁原位种植建立胃癌腹膜转移模型后随机分为3组,于术后1周起分别予ZnPPⅨ、钴原卟啉(CoPPⅨ,HO-1诱导剂)或铜原卟啉(CuPPⅨ,阴性对照)40μg隔日腹腔注射。术后第23d每组取6只裸鼠处死,测定腹膜转移结节数量、体积、质量和腹水量。其余裸鼠用于存活率实验,于出现明显生命衰竭体征时处死,以免疫组化方法检测腹膜转移瘤中CD31标记的肿瘤微血管密度(MVD),以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与CoPPⅨ组和CuPPⅨ组相比,ZnPPⅨ组荷瘤裸鼠腹膜转移结节数量、体积、质量和腹水量均显著减低(P<0.05),生存期延长(P<0.01),腹膜转移瘤MVD和VEGF含量降低(P<0.05)。结论:HO-1参与了胃癌腹膜转移的调控,其抑制剂ZnPPⅨ可能通过抑制肿瘤血管发生而抑制裸鼠胃癌腹膜转移。

高效液相色谱-荧光检测法定量检测癌细胞内原卟啉Ⅸ实验研究

为建立定量测定癌细胞内原卟啉Ⅸ含量的高效液相色谱-荧光检测法,采用BDSC18色谱柱;流动相:甲醇、乙腈、乙醇,pH=7.0;激发波长:410nm;发射波长:630nm,细胞密度1×106/mL的癌细胞悬液1mL冻融,离心,取0.3mL加流动相处理,20μL进样,样品在5min检测完毕.原卟啉IX在0.1～2.7μg/L浓度范围内线性良好,最低检出浓度为0.027μg/L.该法测定癌细胞内原卟啉Ⅸ含量方法简单、取样少、灵敏度高、结果准确可靠.

聚焦超声激活原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞的杀伤作用

目的初步研究超声激活原卟啉IX(PPIX)对S180肿瘤细胞的杀伤作用,并探讨其作用的生物学机制。方法采用频率为2·2MHz,强度为3W/cm2的聚焦超声,结合120μmol/L的PPIX作用于S180肿瘤细胞,通过台盼蓝拒染法检测细胞的存活率;扫描电镜观察细胞膜表面超微结构变化;活性氧试剂盒检测细胞悬液中活性氧的生成量;酶化学方法检测细胞内几种抗氧化物酶活性的变化。结果同等条件下,超声结合PPⅨ对细胞的损伤显著高于单纯超声组,而单纯PPⅨ表现出无明显的细胞毒作用;酶化学方法显示,超声激活PPⅨ后细胞内的丙二醛(MDA)含量显著增加,而细胞内的抗氧化物酶类均有不同水平的下降,并且与处理后细胞悬液中活性氧的生成量相关。结论超声激活原卟啉Ⅸ产生的活性氧自由基作用于细胞膜,增加膜脂质过氧化水平,降低细胞内的抗氧化物酶的含量,可能是其损伤S180肿瘤细胞的主要因素之一。

药物诱导大鼠大肠癌组织原卟啉Ⅸ积聚的定量分析

目的定量分析不同药物诱导大肠癌大鼠大肠正常组织、早期癌和进展期癌组织原卟啉Ⅸ聚积特征。方法15只大鼠分成3组。A组:5-ALA尾静脉注射;B组:DFO腹腔注射半小时后给予5-ALA尾静脉注射;C组:相当量的生理盐水尾静脉注射。每组大鼠诱导4h采集标本。另20只大鼠按B组诱导方法分别在药物诱导2、4、6、8及10h采集标本。用高效液相色谱-荧光检测仪测定其原卟啉Ⅸ含量。结果大肠正常组织、早期大肠癌和进展期大肠癌组织原卟啉Ⅸ含量在A组分别为:(475.261±65.027)、(687.738±73.293)、(852.371±69.457)ng/mg;B组分别为:(496.194±63.539)、(853.194±81.937)、(1173.795±87.184)ng/mg;C组分别为:(347.375±57.413)、(479.375±59.274)、(593.173±37.461)ng/mg。癌变组织原卟啉IX的含量在用药4h最高;正常组织原卟啉IX的含量在用药2h最高,癌变组织与正常大肠组织原卟啉IX含量在用药后4h差异最大。结论5-ALA与DFO联合应用,显著提高5-ALA诱导癌组织原卟啉IX的积聚作用;用药后4～6h检测原卟啉IX含量最高。

DFO、5-ALA联合诱导大肠癌细胞原卟啉Ⅸ聚积的时间动力学研究

目的探讨DFO、5-ALA联合体外诱导大肠癌SW480细胞原卟啉Ⅸ聚积随时间变化的规律,为该药物诱导大肠癌组织原卟啉Ⅸ聚积用于大肠早癌的诊断提供依据。方法DFO、5-ALA浓度分别为10momL/mL、2momL/mL的诱导培养液,作用SW480细胞2h后,分别在2、3、4、5、8及10h终止培养;SW480细胞用上述诱导培养液分别作用20、40、60、80、100及120min后终止培养;密度为1×106/mL的细胞悬液处理后,用高效液相色谱-荧光检测仪测定细胞内原卟啉Ⅸ含量。结果SW480细胞株在药物作用2h后,细胞内原卟啉Ⅸ含量在第4h达到高峰;药物作用40min以后,原卟啉Ⅸ含量明显升高;60min以后各组间差异不明显。结论DFO、5-ALA联合诱导时间最短不得少于40min,药物作用后最佳检测时间为第4小时。

无硝干腌肉制品中锌-原卟啉Ⅸ形成的研究进展

对无硝干腌肉制品中锌-原卟啉Ⅸ形成的研究进展进行了较为系统的阐述。锌-原卟啉Ⅸ是无硝干腌肉制品中的主要红色色素,研究结果表明其生成量与工艺条件密切相关,通过优化工艺参数可促进肉制品中锌-原卟啉Ⅸ,但其形成机制还尚待进一步阐明。

超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的杀伤作用

通过台盼蓝拒染法,以细胞存活率为指标用扫描电镜观察超声激活原卟啉Ⅸ(ProtoporphyrinⅨ,PPⅨ)对艾氏腹水肿瘤(Ehrlich ascites tumor,EAT)细胞的杀伤作用;采用硫代巴比妥酸法检测超声激活PPⅨ对EAT细胞膜脂质过氧化水平的影响,研究超声激活Ⅸ对EAT细胞的杀伤效应.结果显示,超声结合PPⅨ杀伤EAT细胞与超声强度、处理时间及PPⅨ药物浓度呈正相关,超声结合PPⅨ对EAT细胞的损伤显著高于单纯超声组,而单纯PPⅨ表现出无明显的细胞毒作用;超声激活PPⅨ后膜的脂质过氧化水平显著增加.实验表明超声激活PPⅨ对EAT细胞具有明显的协同杀伤效应,推测可能是超声激活PPⅨ增加了膜脂质过氧化量,从而使细胞受损,并且质膜可能是超声激活PPⅨ杀伤EAT细胞的主要靶点之一.

超声激活原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞膜功能的损伤研究

探讨超声结合原卟啉Ⅸ(PPⅨ)对S180肿瘤细胞膜功能的影响及其作用机制。采用频率为1.1 MHz,强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1μg/mL的PPⅨ作用于S180肿瘤细胞,借助于流式细胞仪,采用荧光探针DCFH-DA(2',7'-二氯双氢荧光素双乙酸酯)、FD500(异硫氰酸荧光素钠标记的右旋糖酐)、DiBAC4(3)和Fluo3-AM分别检测胞内活性氧生成量、细胞膜通透性、质膜电位及胞内游离Ca2+的浓度变化。研究结果表明,超声结合PPⅨ比单纯超声或单纯PPⅨ对细胞膜功能损伤作用都强,这种损伤作用可能与影响质膜功能的活性氧含量、细胞膜通透性、质膜电位以及胞内游离Ca2+浓度变化相关。

原卟啉Ⅸ-声动力学方法对H-22肿瘤细胞损伤机制的研究

研究了频率为1.43 MHz、强度为1 W/cm2的聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对H-22肿瘤细胞的损伤作用,并探讨其生物学机制.应用台盼蓝拒染法检测不同处理后肿瘤细胞的存活率,环境扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部的超微结构变化,荧光标记技术检测肿瘤细胞内活性氧的产生,硫代巴比妥酸(TBA)法检测肿瘤细胞脂质过氧化水平的变化.发现原卟啉Ⅸ-声动力学方法对H-22细胞产生的损伤效应表现为:细胞存活率明显下降,细胞表面和内部的超微结构改变,胞内活性氧和脂质过氧化水平增高.结果表明:原卟啉Ⅸ-声动力学方法能够使肿瘤细胞产生活性氧自由基,造成膜脂质过氧化,直接或间接地破坏细胞的膜系统,从而杀伤肿瘤细胞.

去铁胺联合5-氨基酮戊酸诱导人结肠腺癌SW480细胞原卟啉Ⅸ积聚的实验研究

目的探讨去铁胺联合5-氨基酮戊酸体外诱导大肠癌细胞原卟啉Ⅸ积聚的特性。方法SW480细胞用6孔培养板分A、B、C、D4组分别用:含DFO0.1mmol/mL、含0.1mmol/mLDFO+2mmol/mL5-ALA、含5-ALA2mmol/mL、不含DFO、5-ALA的RPMI1640培养液常规培养10h,荧光显微镜观察SW480细胞内原卟啉Ⅸ的荧光分布及强度,高效液像色谱-荧光检测器定量分析SW480细胞内原卟啉Ⅸ的含量。结果B组、C组细胞质内可见不同强度的红色荧光,B组细胞内原卟啉Ⅸ的荧光强度明显强于C组,高强度荧光细胞计数分别占(57.67±2.49)%和(20.07±2.05)%,差异有显著性(P<0.001);4组之间SW480细胞内原卟啉Ⅸ的含量有明显差异:A组<D组<C组<B组。结论去铁胺联合5-氨基酮戊酸体外诱导可有效增加大肠癌细胞内原卟啉IX的积聚。

镁原卟啉Ⅸ甲基转移酶研究进展

镁原卟啉Ⅸ甲基转移酶(ChlM)是叶绿素合成过程中的关键酶,对光合自养生物中叶绿素合成、叶绿体的正常发育以及光合作用的顺利进行起到至关重要的作用。ChlM不仅影响着光系统Ⅰ(PSⅠ)和光系统Ⅱ(PSⅡ)的形成以及脱落酸(ABA)的信号转导,还可以通过调控镁螯合酶H亚基基因(ChlH)表达而影响镁螯合酶活性。ChlM的产物可能参与叶绿体到细胞核的反向信号转导,同时,ChlM受到光照、叶绿体内氧化还原状态和叶片中叶酸含量等因素的影响。本文主要综述镁原卟啉Ⅸ甲基转移酶的结构特点、作用机制、酶活性调控及其参与的代谢调节,并展望镁原卟啉Ⅸ甲基转移酶的研究前景,以期为进一步深入研究并提高植物光合效率提供参考。

原卟啉Ⅸ介导的声动力疗法对S180肿瘤细胞膜损伤研究

探讨频率为1.1 MHz、强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1μg/mL的原卟啉Ⅸ(PpⅨ)对S180肿瘤细胞膜结构和功能的损伤作用。超声联合PpⅨ作用于S180肿瘤细胞后,通过酸性磷酸酶活力检测细胞生长活力;扫描电子显微镜观测细胞膜表面超微结构;生化分析方法检测Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性,细胞膜唾液酸(SA)及细胞内谷胱甘肽(GSH)含量;通过荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位及细胞色素C氧化酶含量。实验结果显示:与对照组(Control)、原卟啉Ⅸ组(PpⅨ)、超声组相比,超声联合PpⅨ处理组的细胞生长明显受到抑制,其酸性磷酸酶活力(OD值)由对照组0.63±0.03下降至0.34±0.01;细胞膜结构严重破坏,表现为微绒毛消失和胞质部分成分流失;膜表面重要成分如Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性明显下降(P<0.05),细胞膜唾液酸含量及胞内GSH水平急剧降低(P<0.01)。研究表明:超声联合PpⅨ作用于S180肿瘤细胞后,细胞膜蛋白受到严重破坏,部分膜蛋白流失。研究结果还提示:声动力处理后细胞线粒体膜电位水平显著降低(Rhodamin 123平均荧光强度由对照组14 082.78±840.44下降至7 801.53±409.15);细胞色素C氧化酶活性由对照组的(0.015 6±0.002 0)U/min/mg降低至(0.008±0.000 0)U/min/mg,提示线粒体也可能是超声联合PpⅨ对S180肿瘤细胞的作用靶点。

水稻镁原卟啉Ⅸ甲基转移酶突变对光系统Ⅱ的影响

镁原卟啉Ⅸ甲基转移酶(Chl M)是叶绿素合成途径中的关键限速酶之一,在植株生长发育过程中发挥着重要作用。为研究Chl M对植物光合特性的影响,以水稻突变体chlm及其野生型为材料,对叶片中的叶绿素含量、叶绿体超微结构、叶绿素荧光特性及光合系统相关基因的表达进行分析。结果表明,突变体chlm叶片中叶绿素a和叶绿素b的含量显著下降,基粒类囊体发育异常,叶绿素荧光强度降低,单位面积上PSⅡ的光能吸收、光能捕获、电子传递、热耗散等光合能量流减少,PSⅡ反应中心的数量和性能降低,以单位面积为基础的PSⅡ性能指数随之下降;但突变体chlm中PSⅡ相关的放氧复合体、电子传递链等有效光合机构未受到明显损伤,能量流的各量子产额也未受到明显影响,IP相最大幅度和基于吸收光能的PSⅡ性能指数均有所提升。此外,突变体chlm中PSⅡ相关基因的表达调控并无异常。综上,突变体chlm叶片中光合作用的能量流降低了,但其光系统Ⅱ机构仍能较高效地将所吸收的光能用于光合作用。本研究结果为突变体chlm的进一步应用提供了一定的理论依据。