湖南省HIV-1感染者原发性耐药现况调查

目的了解湖南省1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者其基因亚型分布和原发性耐药(PDR)情况,为艾滋病防控及抗病毒治疗(ART)提供参考依据。方法收集湖南省2021年1月—2022年8月某院HIV门诊新确诊并且未接受ART的HIV-1感染者的人口学及流行病学相关数据,采集患者血清,提取核糖核酸,利用In-house的方法采取2轮聚合酶链式反应进行基因扩增,Sanger法对产物进行测序,分析患者临床资料及HIV-1亚型及耐药情况。结果共纳入患者667例,基因型耐药检测失败20例,647例检测成功的新确诊HIV-1感染者纳入研究。53例患者感染的HIV-1株发生PDR,发生率为8.19%,主要集中于男性(88.68%)、未婚(71.70%)、男男性行为(MSM,60.38%)、21~40岁的群体(58.49%),且多为湖南省本地籍居民(98.11%)。共检测出15种HIV-1毒株亚型,主要亚型为CRF_01AE(35.70%)、CRF07_BC(25.19%)、B/C(18.86%)以及CRF55_01B(7.88%)。不同HIV-1亚型患者的PDR发生率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=18.62,P=0.017)。蛋白酶抑制剂(PIs)耐药率为0.15%,核苷酸类逆转录酶抑制剂(NRTIs)耐药率为2.78%,非核苷酸类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药率为6.65%,整合酶抑制剂(INSTIs)耐药率为0.31%。结论湖南省HIV-1毒株亚型分布复杂,PDR发生率已超过世界卫生组织制定的低水平耐药预警线(<5%),应加大感染预防与控制力度,阻断耐药毒株传播。

吉非替尼联合二甲双胍对EGFR-TKIs原发性耐药非小细胞肺癌H1975细胞的抑制作用及其机制研究

目的探讨吉非替尼联合二甲双胍对肺癌H1975细胞的抑制增效作用及其机制。方法采用MTT、克隆形成实验观察吉非替尼与二甲双胍单用及联用对原发性耐药非小细胞肺癌H1975细胞增殖活性的影响;Matrigel包被的Transwell小室检测细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot、免疫荧光法检测凋亡和上皮细胞-间充质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的变化。结果吉非替尼联合二甲双胍组对H1975细胞增殖、侵袭及迁移抑制效应优于吉非替尼组,协同增效作用明显(P<0.05);吉非替尼和二甲双胍单用时较对照组的细胞凋亡率增加,当两者联合作用时细胞凋亡率增加更显著(P<0.05),且明显下调抗凋亡相关蛋白(Bcl-xl、Mcl-1)和上调促凋亡蛋白Bax;两药联用明显逆转H1975细胞EMT的发生;间质细胞相关蛋白(Vimentin、N-cadherin、Slug、Snail)表达水平降低,上皮细胞相关蛋白E-cadherin表达水平升高。结论吉非替尼联合二甲双胍可显著抑制EGFR-TKIs原发性耐药非小细胞肺癌H1975细胞的增殖、侵袭和迁移,促使肿瘤细胞凋亡;其机制可能通过激活线粒体凋亡途径及逆转EMT的发生来发挥抗肿瘤作用。

乙型肝炎病毒RT区原发性耐药变异的研究

目的探讨核苷(酸)类似物(NA)治疗前乙型肝炎病毒(HBV)RT区原发性耐药变异的发生情况。方法采用PCR产物直接测序技术对61例未接受NA治疗的慢性HBV感染者进行HBV RT区序列测定,分析NA治疗前HBV RT区原发性耐药变异的发生率。结果通过HBV基因扩增、PCR产物直接测序后,共获得61个HBV RT区基因序列,采用HBV RT区基因进化树基因分型共分出B型42例(42/61,68.85%),C型19例(19/61,31.15%),未检出其他基因型。通过核苷酸序列及氨基酸序列分析,对NA常见的10个耐药变异位点(rtI169T、rtV173L、rtL180M、rtA181V/T、rtT184G/S/A/I、rtA194T、rtS202I/G、rtM204I/V、rtN236T、rtM250V)进行比对后,61例患者中共检出HBV RT区变异3例(rtM204I 2例,rtM204I+L180M 1例),自然耐药变异的检出率为4.92%。结论慢性HBV感染者存在少量RT区原发性耐药变异位点,与原发性无应答有关。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在非小细胞肺癌患者原发性耐药机制的研究进展

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)因其高效低毒等特点,广泛运用于非小细胞肺癌的治疗,临床发现部分患者在治疗初期就对EGFR-TKI不敏感,即发生EGFR-TKI原发性耐药。本文对EGFR-TKI原发性耐药机制进行综述,以期更有效地指导非小细胞肺癌个体化治疗。

EGFR-TKI原发性耐药的分子机制及其进展——附2例病例分析

酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine-kinase inhibitor, TKI)类药物已经被证实对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)敏感突变的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者有很好的疗效,优于化疗。但仍有部分敏感突变的患者出现原发性耐药。耐药的原因尚不明确,可能与EGFR基因的敏感突变与耐药突变共存、EGFR通路下游基因突变、MET扩增、BIM缺失多态性等因素相关。本文分享了2例原发性耐药病历并进行了原因分析。

HIV-1原发性耐药国内外研究进展

联合抗逆转录病毒治疗通过抑制患者体内人类免疫缺陷病毒(HIV)的复制,显著降低了HIV感染者/获得性免疫缺陷综合征患者病死率,延长了患者预期寿命。然而在抗病毒药物选择压力及病毒自身因素作用下HIV-1耐药突变不断产生。原发性耐药(PDR)对抗病毒治疗的疗效和患者远期预后具有负面影响。该文对近年来国内外PDR的研究进行了总结,旨在为后续相关研究提供思路,为PDR管理提供策略。

Connexin 43对非小细胞肺癌细胞吉非替尼原发性耐药的影响

目的:探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)对非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)吉非替尼原发性耐药的影响。方法:MTT法测定吉非替尼对3株非突变型EGFR(WT-EGFR)NSCLC细胞系A549、H1299、Calu3细胞的半数抑制浓度(IC50);Western blot观察Cx43、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白在上述细胞系中的表达水平;"Parachute"法检测细胞缝隙连接功能(gap junction intercellular communication,GJIC);免疫荧光法检测Cx43蛋白在细胞中的定位。结果:吉非替尼作用于Calu3、A549、H1299细胞的IC50分别为(0.064±0.011)μmol/L、(13.64±0.015)μmol/L、(20.054±0.012)μmol/L,即A549、H1299细胞对吉非替尼原发性耐药;A549、H1299细胞中Cx43、p-Akt蛋白水平显著高于Calu3细胞(P<0.01);A549、H1299细胞有荧光传递现象,且Cx43蛋白定位在A549、H1299细胞膜上,而Calu3细胞无荧光传递现象,且Cx43主要表达于细胞质上。结论:NSCLC细胞膜上调的Cx43及其组成的GJIC可促进细胞对吉非替尼的原发性耐药,其机制可能与其激活PI3K/Akt信号通路有关。

少菌型麻风病人对利福平和氨苯砜的原发性耐药

多菌型麻风的原发耐DDS已为大家所熟知,然而耐药发生在少菌型的情形仍然是个谜,因为皮损细菌少,鼠足垫技术不适用。对利福平(RMP)耐药菌株,迄今文献报道的只发生在瘤型病人。作者最近遇到一例少菌型病人显示对RMP和DDS耐药。患者男性、31岁,1984年4月因食指和中指麻木就诊于神经科,诊断为非特异性神经炎并进行治疗。后又就诊于矫形外科。

表皮生长因子受体敏感突变肺癌靶向治疗原发性耐药机制的研究进展

针对伴有表皮生长因子受体(EGFR)敏感突变的晚期非小细胞肺癌, 小分子靶向药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗效果明确, 是目前的标准治疗方法。然而, 部分患者在初始治疗时即出现原发性耐药。本文就EGFR敏感突变的晚期非小细胞肺癌患者原发性耐药可能机制展开讨论与总结, 以期为临床治疗决策提供参考。

天津市2014－2017年男男性行为人群艾滋病病毒感染者原发性耐药分析

目的 了解2014－2017年天津市MSM人群HIV感染者（MSM感染者）原发性耐药（transmitted drug resistance，TDR）的流行特点和相关因素。方法 收集2014－2017年天津市未经抗病毒治疗的MSM人群中HIV感染者的血浆样本共225例，采用巢式PCR法扩增pol区基因片段，进行基因型耐药检测和相关因素分析。结果 205例样本获得pol区基因序列，完成HIV亚型和耐药检测。基因型依次为CRF01_AE占53.2%（109/205），CRF07_BC占28.8%（59/205），B亚型占10.2%（21/205），CRF55_01B亚型占4.9%（10/205），其他独特型二代重组亚型占2.9%（6/205）。75例样本成簇分布在20个传播簇内，62.5%（10/16）的TDR样本分布在5个传播簇中。耐药株的TDR流行率为7.8%，2014－2017年每年的TDR流行率逐年上升，分别为3.9%（2/51）、5.7%（3/53）、9.6%（5/52）和12.2%（6/49），但差异无统计学意义（χ^2=2.504，P=0.127），CRF01_AE亚型和B亚型TDR流行率最高，分别为3.4%（7/205）和2.9%（6/205）。TDR突变以非核苷酸反转录酶抑制剂（NNRTIs）为主，TDR流行率为6.3%（13/205），核苷酸反转录酶抑制剂（NRTIs）和蛋白酶抑制剂（PIs）的TDR流行率分别为1.5%（3/205）和1.0%（2/205）。结论 天津市MSM感染者的TDR毒株的TDR流行形势较严重，需采取有针对性的预防和控制措施。

石家庄市2015年新确诊HIV-1感染者流行毒株的亚型分布及原发性耐药分析

目的了解河北省石家庄市2015年新确诊1型艾滋病病毒（HIV-1）流行毒株的亚型分布和原发性耐药情况。方法 2015年石家庄市新报告HIV-1感染者433例,共收集到感染者血浆样本335份,经反转录巢式荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增,最终获得311份样本的HIV-1 pol基因片段并测序。对获得的核酸序列用Neighbor.Joining Tree方法构建进化树,以Boot strap值〉70%来判定HIV-1的基因亚型。同时将序列提交至美国斯坦福大学HIV耐药数据库进行耐药基因型分析。结果 311例HIV-1感染者以男性（93.9%）、本市户籍（83.0%）、汉族（96.1%）为主。性接触是最主要的感染途径（98.1%）,其中同性性传播占77.5%。311例pol基因序列片段亚型分布显示,CRF01_AE占51.4%（160例）,CRF07_BC为28.6%（89例）,B亚型为13.2%（41例）,未定型CRF01_B为4.2%（13例）,CRF08_BC为1.3%（4例）,CRF55_01B为0.6%（2例）,CRF59_01B为0.3%（1例）,CRF65_cpx为0.3%（1例）和CRF01_AE/B为4.2%（13例）。CRF01_AE、CRF07_BC和B是主要的亚型。HIV-1基因亚型分布在性别之间（χ~2=14.039,P=0.005）、不同的职业类型之间（χ~2=21.716,P=0.041）以及不同的传播途径之间（χ~2=20.971,P=0.028）有统计学差异。311例中,14例感染者具有耐药位点,原发耐药率为4.5%,其中蛋白酶抑制剂和核苷类反转录酶抑制剂耐药相关突变率均为1.6%（各5例）,非核苷类反转录酶抑制剂耐药相关突变率为1.3%（4例）。结论石家庄市新报告的HIV-1感染者中,传播途径以同性性接触为主,病毒基因亚型以CRF01_AE为主,但具有多样化特点。原发耐药率为4.5%,处于低水平状态。

2011-2013年深圳市新报告男男性行为传播的HIV-1感染者原发性耐药及相关因素

目的分析深圳市新报告的男男性行为传播的1型艾滋病病毒(HIV-1)抗体阳性者治疗前耐药的相关因素,为临床抗病毒治疗(ART)方案提供科学依据。方法选取2011-2013年在深圳地区首次确证的、男男性行为传播感染的、HIV-1抗体阳性未接受ART者,分析原发性耐药与亚型、年龄等指标之间的关系。结果纳入本次研究的1046例样本中,原发性耐药率为4.40%(46例),传播耐药率为1.43%(15例)。蛋白酶抑制剂相关耐药发生率为1.43%(15例),核苷类反转录酶抑制剂相关耐药发生率为0.76%(8例),非核苷类反转录酶抑制剂相关耐药发生率为2.49%(26例)。CRF5501B、CRF01AE、CRF07BC和B的原发性耐药率分别为9.43%、3.10%、3.24%和8.77%(P=0.002)。2011-2013年的原发性耐药率分别为2.44%、4.02%、5.40%(P=0.256)。三个年龄组(≤24岁、25~34岁、≥35岁)的原发性耐药率分别为2.41%、4.90%和6.12%(P=0.066)。结论2011-2013年深圳市新报告男男性行为传播的HIV-1感染者原发性耐药率处于低水平,不同年龄组之间的原发性耐药率无显著性差异,CRF5501B的原发性耐药率显著性高于其他亚型。应对CRF5501B的耐药情况持续密切监测和分析评估。

上海地区艾滋病病毒感染者/艾滋病患者原发性耐药基因调查及抗病毒治疗效果观察

目的了解上海地区伴有HIV-1原发性耐药的艾滋病病毒感染者/艾滋病患者(HIV/AIDS)对高效抗反转录病毒治疗(HAART)效果的影响,评估长期抗病毒治疗方案,为调整治疗策略提供依据。方法从上海市艾滋病治疗数据库中随机选取2007-2013年期间被诊断为HIV-1的感染者,在未治疗前进行原发性耐药检测。对其中原发性耐药的病例进行1~7年不等的随访检测,通过CD4+T淋巴细胞计数及病毒载量结果评估抗病毒治疗效果。结果 1 543例HIV-1感染者中发现HIV原发性耐药42例,其中失访8例,死亡1例,停药1例,最后获得32例原发性耐药者。32例中非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)耐药相关突变11例,核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)耐药相关突变7例,蛋白酶抑制剂(PI)耐药相关突变6例;对NRTIs和NNRTIs同时耐药突变有3例,同时发生对PIs和NNRTIs的耐药相关突变1例,同时发生对PIs和NRTIs的耐药相关突变2例;对整合酶抑制剂(IN)耐药相关突变2例,平均原发性耐药率为2.7%。随访监测CD4+T淋巴细胞计数和病毒载量变化结果显示,32例患者的CD4+T淋巴细胞数量在HAART治疗前和治疗后的0.5、1、2、3、4、5、6和7年(±1个月)时分别为249.5±157.4、304.9±188.7、356.3±206.4、441.4±245.7、455.4±256.8、453.2±168.5、458.2±202.4、454.0±66.8和432.0±100.4个/$l。服药依从性指标评估显示所有病例均每年检测病毒载量,除了2例病例病毒载量为600拷贝/ml和700拷贝/ml外,其余病毒载量检测均低于检测下限,病毒抑制率为100%。上述病例在随访期间,均因毒副反应而更换为其他一线药物或二线药物。结论通过随访观察上海地区伴原发性耐药的HIV/AIDS对抗病毒的治疗效果,在原发性耐药率低的流行地区,如果治疗管理规范,患者服药依从性好,并经常开展公共卫生原发性耐药监测,在条件有限的情况下可不考虑进行治疗前原发性耐药检测。

超深度焦磷酸测序技术用于HIV-1RT基因区原发性耐药突变的研究

目的：利用超深度焦磷酸测序技术（UDS）研究湖南省HIV感染者中原发性耐药流行趋势。方法90份未接受抗病毒治疗的HIV感染者同时采用UDS测序和Sanger测序进行HIV基因型耐药检测，测序结果采用斯坦福大学HIV耐药突变数据库进行分析比对，分析湖南省HIV-1反转录（RT）基因区原发性耐药突变情况。结果 UDS检测成功获取90份测序结果，84.4%为AE亚型（76/90），发现38例（42.2%，38/90）针对RT基因区的耐药突变位点，其中14例样本仅发生核苷类反转录酶（NRTI）耐药突变（15.6%），15例仅发生非核苷类反转录酶（NNRTI）耐药突变（16.7%），9例样本同时发生了NRTI和NNRTI类耐药突变。在16个位置上共发现54次耐药突变。17例（18.9%，17/90）样本有针对RT基因区的中度及以上的耐药突变。传统Sanger法仅检出7例；其中针对NRTI类药物耐药的6例；针对NNRTI类药物耐药的5例。结论 Sanger法测序能够鉴定出显著的耐药性突变（≥20%），但不能及时发现尚未达到显著突变量的突变位点或稀有型抗药型突变（＜20%）。而UDS则能更灵敏检测到低频突变毒株，这些耐药突变同样可在药物选择压力下快速的增长引起病毒学治疗失败，导致临床治疗失败。因此选择更高灵敏度和精确度的技术检测低水平耐药突变位点，对于HIV抗病毒临床治疗有着十分重大的意义。

2016年云南省德宏傣族景颇族自治州新报告HIV感染者原发性耐药研究

高效逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral treatment, HAART)自2003年推广以来,有效降低了HIV感染相关疾病的发病率和死亡率,延长了HIV感染者寿命,同时也促进了HIV耐药突变和耐药株的发生[1,2]。国内关于新报告HIV感染者原发性耐药的研究较少,所报道的耐药率为1.6%~12.2% [3,4,5,6,7]。云南德宏傣族景颇族自治州(德宏州)地处西南边疆,与缅甸接壤,是国家HIV防治重点地区[8]。了解德宏州新报告HIV感染者原发性耐药情况,可指导抗病毒治疗,有效预防继发性耐药发生。为此,本研究对德宏州2016年新报告HIV感染者进行了原发性耐药研究。

2014—2017年上海市长宁区男男性行为人群HIV-1型感染者原发性耐药分析

【目的】了解上海市长宁区2014-2017年男男性行为(MSM)人群HIV-1型感染者亚型分型及原发性耐药情况,为制定该人群抗病毒治疗方案提供依据。【方法】选取2014-2017年首次确证HIV-1型阳性、未接受过抗病毒治疗的MSM感染者363例,对其血浆标本采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、DNA测序,并对序列进行亚型及原发性耐药分析。【结果】363例感染者的标本经RT-PCR筛选,最终获得300例的HIV-1 pol基因片段,扩增率为82. 6%。年龄18~78岁;非上海市户籍212例,占70. 7%;大专及以上文化程度165例,占55. 0%;未婚为主占71. 7%;CRF01_AE亚型154例(51. 3%),CRF07_BC亚型104例(34. 7%),其他亚型和重组体42例(14. 0%);18例有耐药突变,原发耐药率为6. 0%(18/300),其中对非核苷类反转录酶抑制剂的耐药率为4. 3%(13/300),对核苷类反转录酶抑制剂的耐药率为2. 7%(8/300),突变位点PI区的耐药率为1. 3%(4/300),2种及以上合并耐药率为2. 0%(6/300)。【结论】上海市长宁区MSM人群HIV-1型感染者以CRF01_AE亚型为主,且对非核苷类反转录酶抑制剂类药物的原发性耐药率较高,临床治疗中使用非核苷类的药物需谨慎;另外,仍要加强对MSM感染者耐药的监测工作。

柳州市60株HIV毒株pol区亚型分布和原发性耐药情况

目的了解柳州市HIV亚型分布和原发性耐药情况。方法招募未经抗病毒治疗的柳州HIV感染者66名,采集外周静脉血,从血浆中提取HIV RNA,扩增pol基因并测序,将序列进行系统进化树分析和耐药性分析。结果获得60株序列,47株为CRF01_AE,占78.3%,12株为CRF07_BC,占20.0%,1株不能判断亚型。9株发生耐药性相关突变,其中2株可产生耐药性,原发性耐药的发生率为3.3%。结论当前柳州主要的HIV流行亚型是CRF01_AE和CRF07_BC,HIV原发性耐药的发生率处于国内一般水平。

他克莫司用于激素耐药型原发性肾病综合征患儿的疗效及安全性观察

目的 观察他克莫司用于激素耐药型原发性肾病综合征患儿的疗效及安全性,为临床提供参考。方法 选取2019年9月至2023年3月内蒙古自治区人民医院收治的80例激素耐药型原发性肾病综合征患儿进行研究,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各40例。对照组患儿给予甲泼尼龙冲击疗法治疗,观察组患儿在对照组基础上给予他克莫司进行治疗。比较两组患儿治疗效果及治疗前后三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、肌酐(Cr)、白蛋白(ALB)及24 h尿蛋白定量(U-TP)水平,比较两组患儿治疗后的不良反应发生情况。结果 观察组患儿治疗效果优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患儿TG和TC水平均降低,且与对照组相比,观察组更低(P<0.05)。治疗后,两组患儿Cr和U-TP水平较治疗前下降,ALB水平较治疗前升高,且观察组患儿Cr、U-TP及ALB水平改善情况优于对照组(P<0.05)。两组患儿不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 他克莫司对激素耐药型原发性肾病综合征患儿的治疗效果显著,对ALB、U-TP等指标有较好的改善作用,安全性良好,适用于临床治疗。

厦门市新发现HIV-1感染者分子流行病学及原发性耐药分析

目的了解厦门市新发现HIV-1感染者的HIV-1亚型的型别,进而了解亚型变化以及传播途径,分析其原发性耐药情况。方法收集新发现HIV-1感染者的血浆样品,用罗氏公司的Tanman48进行实时荧光定量PCR测定HIV病毒载量,提取HIV病毒RNA,采用巢式PCR方法扩增gag-pol和env区基因片段、测序,进行分子流行病学分析和耐药基因型分析。结果85例Gag-pol与各亚型标准序列构建的系统进化树显示,CRF01_AE重组型为76例(89.41%),CRF07_BC重组型为5例(5.88%),CRF08_BC重组型为2例(2.35%),B’亚型为2例(2.35%)。共有4例耐药位点突变,原发性耐药率为4.68%。在4例原发性耐药标本中,PIs相关突变株1株,主要突变位点为M46I/L,表现为对NFV中度耐药和对LPV/r、FPV/r、ATV/r潜在耐药;NRTIs相关突变株1例,主要突变位点为D67N和L74V,表现为对ABC中度耐药和对AZT低度或者潜在耐药;NNRTIs相关突变株2例,主要突变位点为V179E和E138A,表现为对EFV、NVP、ETR潜在耐药和对RPV低度或者潜在耐药。结论厦门市新发现HIV感染者以CRF07_BC流行重组型为主,该人群中原发性耐药属于低流行区,但是原发性耐药已经开始传播,应参照原发性耐药检测为新发现HIV-1感染者制定首选治疗方案。