原发性卵巢功能不全患者原始卵泡体外激活技术

原发性卵巢功能不全(POI)是女性不孕的重要原因之一,目前主要治疗方法是通过供卵途径实现生育,但由于卵源及伦理问题,导致患者面临诸多困难。原始卵泡体外激活(IVA)技术的发展为POI带来了新的治疗思路,其可通过药物或非药物手段,在体外激活Hippo信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路等卵泡发育相关信号通路,诱导原始卵泡发育后,将含有原始卵泡的卵巢组织重新植入患者体内,最终实现患者的生育目的。就POI患者原始卵泡IVA技术的研究进展进行综述,为POI的临床治疗策略提供参考。

原始卵泡激活相关应用及研究进展

社会的进步、不良疾病的进展和高龄女性生育意愿的上升使提高女性生育力成为亟待解决的难题,也是辅助生殖领域面临的重大挑战。对于难以受孕和需要进行生育力保护的患者,调控原始卵泡的休眠与激活至关重要。近年来对原始卵泡激活的研究取得了重大进展,PI3K/Akt和Hippo等信号通路以及多种因子对卵泡发生发育的作用逐渐被发现,体内和体外调控原始卵泡激活的技术也逐步提高。本文对原始卵泡激活的应用、方法及其机制进行简要综述。

原始卵泡体外激活技术的研究进展

体外激活(in vitro activation,IVA)技术是指IVA原始卵泡,使其生长至可接受激素刺激的阶段,结合促排卵获得成熟卵泡的技术,最终通过体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)技术达到受孕目的。常用方法为激活PI3K/Akt信号通路和阻断Hippo信号通路。随着研究深入,新的激活方法逐渐发展。现已有多例早发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)患者应用IVA技术成功妊娠的案例报道,结合生育力保存技术,卵巢低反应(poor ovarian response,POR)以及女性恶性肿瘤患者都可能受益于IVA技术。然而IVA技术尚不完善,仍在临床成功率、安全性等方面存在问题,需要在机制和临床应用继续探索。本文针对IVA技术的机制、临床应用情况以及发展方向方面进行论述,为IVA的研究和临床应用提供参考。

卵泡体外激活在早发性卵巢功能不全患者辅助生殖中的研究进展

早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)是指女性40岁之前出现卵巢功能减退,其病理基础是原始卵泡的耗竭或难以激活,这一类患者自然受孕率低,排卵诱导治疗效果不佳,目前尚无有效恢复卵巢功能的方法。针对卵泡的体外激活技术(in vitro activation,IVA)是指手术取出部分卵巢组织,在体外进行药物或物理干预来激活残存卵泡,然后回植体内,使之生长至能对促排卵治疗产生反应的阶段。再配合促排卵治疗,可获得用于体外受精-胚胎移植的成熟卵泡。迄今IVA技术尚不完善,但为POI患者的治疗提供了新的方向。本文总结了卵泡体外激活的原理,相关信号通路及各通路中的药物靶点,并对卵泡体外激活方案在POI患者中的应用与优化进行综述,为POI患者的诊疗提供依据。

哺乳动物原始卵泡体外培养与激活调控研究进展

随着体外受精、克隆与转基因动物等基础研究快速发展,对卵母细胞的需求越来越多,科学家们不得不寻求能够获得大量优质卵母细胞的新途径。原始卵泡作为生长卵泡的来源,其初始容量影响哺乳动物的繁殖性能,是整个雌性生殖期中各阶段卵泡及卵子发育的源头。哺乳动物的卵巢在出生时由一定数量的卵泡组成,大多数原始卵泡处于休眠状态,只有极少数的原始卵泡被激活并进入生长卵泡池中。因此合理开发卵巢里尚未激活的原始卵泡对提高动物繁殖率、加速优良牛种的遗传改良、阐明动物卵泡发生的分子机理具有重要意义。本文将目前哺乳动物原始卵泡体外激活的国内外进展做一综述,为研究动物和人类卵泡激活的生物学过程提供理论基础。

女性卵巢组织体外激活机制与临床应用研究进展

始基卵泡的激活发育是女性配子成熟的关键。早发性卵巢功能不全(POI)患者由于体内卵泡休眠和发育调控失衡的现象,体内无法完成始基卵泡激活发育,导致女性不孕。卵巢组织体外激活(IVA)技术现已成为解决这类无法通过自体激活始基卵泡的患者获得自身成熟卵母细胞的新途径。在IVA的研究中,PI3K/PTEN/Akt和Hippo等信号通路成为当前研究焦点。本综述将对IVA机制的相关研究进展和临床应用研究进行阐述,为卵巢组织体外培养与激活的临床研究提供参考依据。

激活素-抑制素-卵泡抑素系统对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育潜能的影响机制

目的:探讨激活素-抑制素-卵泡抑素(ACT-INH-FS)系统在小鼠生发泡(GV)期卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育中的的影响机制。方法:取小鼠GV期卵母细胞,随机分成8组,A组:100ng/ml激活素A(ACTA);B组:100ng/mlACTA+100ng/ml卵泡抑素(FS);C组:100ng/ml抑制素A(INHA);D组:100ng/mlINHA+100ng/mlFS;E组:100ng/mlACTA+INHA;F组:100ng/mlACTA+100ng/mlINHA+100ng/mlFS;G组:100ng/mlFS;H组(对照组):人输卵管液(HTF)+10%血清蛋白代用品(SPS)。体外培养16-18h后,MⅡ期卵母细胞进行体外受精,观察ACTA-INHA-FS对GV期卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(PB1)排出及受精率、卵裂率、囊胚形成率的影响。使用MitoTrackerRed荧光探针对A组及E组MⅡ期卵母细胞内活性线粒体数目及分布进行检测。结果:与H组比,A、E、G组GVBD发生率、A、C、E组的MⅡ期卵母细胞发生率和4-细胞、8-细胞及囊胚形成率均显著增加,C组受精率下降,P均<0.05。A、E组卵母细胞内线粒体形态半周型及弥散型比例明显高于H组,整体分布存在显著性差异(P<0.01)。结论:①ACTA、INHA对GV期卵母细胞体外成熟及胚胎发育潜能具有显著的促进作用,并可以被FS所拮抗。②在ACTA/INHA缺乏或不足的条件下,FS可出现ACTA样作用,促进卵母细胞成熟。③ACTA-INHA对体外成熟卵母细胞核质成熟同步化具促进作用。

家兔原始卵泡卵母细胞体外发育的培养体系研究

本研究根据家兔卵巢的发育特征初步探讨了家兔卵巢卵母细胞体外发育的培养体系。采集新生或30日龄家兔卵巢在不同培养液中培养,并分析家兔卵母细胞的体外发生与成熟情况与体内正常发育的兔卵巢卵母细胞之间的差异,来筛选和优化家兔卵巢卵母细胞的体外培养体系。本试验从高糖DMEM、FSH浓度、BSA/血清等3个方面来筛选较好的培养条件,结果表明:①不添加高糖DMEM的M199培养液与添加的相比,卵巢上卵母细胞数量要多,但随着培养时间的延长,组织块上卵母细胞的形态会变得不清楚;②家兔卵巢组织在FSH浓度为50和100m IU/m l、添加血清的DMEM/F12培养液中生长较好,体外培养24d后,卵母细胞数量多,直径增加到65μm;③与添加BSA的培养液相比,添加血清的培养液中的卵巢卵母细胞生长状态较好,体外培养28d后,卵母细胞数量多,并且直径可达65μm。

卵泡刺激素及戊酸雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨卵泡刺激素(FSH)、戊酸雌二醇(E2)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及卵裂能力的影响。方法:对雌性小鼠进行超促排卵后处死小鼠,取出卵巢,刺破卵泡,收集形态较好的未成熟卵母细胞,随机分为6组,在不添加激素的基础培养液中以及分别添加10,50 IU/mL的FSH及1,10,100 mg/L的戊酸E2的培养液中培养24 h后,观察各组卵母细胞的成熟情况。对已成熟的卵母细胞进行体外受精,观察卵母细胞受精情况。受精后继续培养48～72 h,观察其卵裂情况。比较各组的成熟率、受精率和卵裂率。结果:①各浓度FSH组及各浓度戊酸E2组与对照组相比,成熟率[生发卵泡破裂率(GVBD率)、MⅡ率]及卵裂率的差别均无统计学意义(P>0.05)。②10,50 IU/mL FSH组以及10 mg/L戊酸E2组的受精率分别为41.18%,40%和42.86%,均高于对照组(19.44%),差异有统计学意义(P<0.05);1,100 mg/L戊酸E2组与对照组相比受精率差异均无统计学意义(P>0.05)。③各浓度FSH组之间以及各浓度戊酸E2组之间成熟率(GVBD率、MⅡ率)、受精率及卵裂率的差别均无统计学意义(P>0.05)。结论:在小鼠体外成熟培养液中添加10,50 IU/mLFSH及10 mg/L戊酸E2能促进小鼠卵母细胞胞质的成熟,从而提高受精率。

不同繁殖季节驴卵母细胞体外成熟与孤雌激活胚胎发育情况研究

为了研究驴在繁殖与非繁殖季节卵母细胞体外成熟与孤雌激活胚胎发育情况,试验以3—9月份为繁殖季节,其他月份为难繁殖季节,从屠宰场采集驴卵巢,统计分析不同繁殖季节卵巢形状的差异,采用抽吸法和切割法获取卵母细胞,并对卵母细胞进行体外成熟诱导,对成熟的卵母细胞进行孤雌激活,分析激活胚胎的发育情况。结果表明:繁殖季节与非繁殖季节卵巢形状差异明显。在繁殖季节,卵巢内卵泡液增多且卵泡体积变大,导致卵巢体积增大,总卵泡、中卵泡、小卵泡数量显著多于非繁殖季节(P<0.05);繁殖季节卵母细胞回收率为85.38%,非繁殖季节卵母细胞回收率为72.18%,两者差异显著(P<0.05);繁殖季节驴卵母细胞体外培养成熟率为50.10%,非繁殖季节时成熟率为34.74%,两者差异显著(P<0.05);繁殖季节卵裂率为31.0%,非繁殖季节卵裂率为29.0%,两者无显著差异(P>0.05)。说明繁殖季节卵母细胞体外成熟情况优于非繁殖季节,非繁殖季节较难获得成熟卵母细胞,但是获得成熟卵母细胞激活发育后无明显差异。

女性癌症患者生育力保存技术

随着近年癌症患者生存率的不断提高以及相关辅助生殖技术的发展,针对女性癌症患者的生育力保存也成为了现阶段的研究热点。本文对近10年的文献研究中报道的女性生育力保存技术进行综述。包括卵巢组织冷冻与移植、卵巢组织体外激活技术、卵巢抑制、卵巢移位术、人工卵巢、未成熟卵母细胞冷冻和胚胎冷冻技术等生育力保存技术的有效性和安全性,并讨论比较了每种方法的优、缺点。以期将来能为女性癌症患者选择合适的生育力保存技术提供支持。

体外激活治疗早发性卵巢功能不全的作用机制及进展

早发性卵巢功能不全(POI)是导致女性卵巢激素缺乏和不孕的重要原因,约1%的育龄女性受到POI的困扰,目前尚无改善POI患者卵巢功能的最佳方案。最近有学者将体外激活(IVA)用于POI患者的不育治疗。部分POI患者卵巢皮质中仍残留着一定数量处于休眠状态的始基卵泡,IVA是通过卵巢皮质的碎裂破坏Hippo信号通路,并用蛋白激酶B(AKT)激活剂培养卵巢皮质片激活磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-AKT信号通路,从而激活休眠的始基卵泡,使其生长发育为可用于辅助生殖技术的卵母细胞。IVA可有效促进卵泡生长,目前已有成功妊娠并分娩的报道。现简述PI3K-AKT和Hippo信号通路对始基卵泡激活的调控作用,并综述IVA治疗POI的现状及研究进展。

原始卵泡库的形成、维持和激活分子调控机制研究进展及其临床应用

卵泡是哺乳动物卵巢结构和功能的基本单位,由位于中央的卵子和周围的体细胞组成。原始卵泡是卵泡发育的最早阶段,在哺乳动物出生前后形成。由于数量有限,原始卵泡构成了卵巢的储备库,为女性的生殖周期提供成熟卵子。原始卵泡在大部分时间内处于休眠状态,直到被激活后开始生长和发育,最终成为可排卵的成熟卵泡。原始卵泡休眠与激活的动态平衡对于卵巢生殖功能的维持非常重要,而各种因素导致的原始卵泡库提前耗竭则可能引起女性的早发性卵巢功能不全。该文系统总结了过去二十年关于原始卵泡形成和激活分子机制的研究进展,全面概述了原始卵泡体外激活技术的发展和在治疗早发性卵巢功能不全或卵巢功能障碍导致的不孕症患者中的临床应用。此外,该文就如何调节原始卵泡库来保护卵巢储备、延缓卵巢衰老方面的研究也进行了讨论,为诊断和治疗与卵泡发育相关的疾病、卵巢性不孕不育的干预以及女性生育力保存提供了新的思路。

小尾寒羊腔前卵泡体外生长发育的研究

近20年来，胚胎移植、体外受精、核移植、转基因等胚胎工程技术在理论和生产应用上已取得了很大进展。然而，所有这些技术是建立在具有完全发育能力的卵母细胞的基础之上的。大量卵母细胞的体外成熟培养是这些技术的限速步骤之一。目前采用的有腔卵泡卵母细胞的体外成熟和超数排卵，不能提供充足的卵母细胞以支撑胚胎工程技术的进一步发展。此外，卵巢中的卵母细胞绝大多数以无腔的形式存在于卵巢皮质内，有腔卵泡所占比例不到1％，屠宰场屠宰羊只后的卵巢内含有大量的腔前卵泡。如果建立腔前卵泡的体外培养体系，获得大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞，一方面将会最大限度地挖掘保存卵巢上遗传资源；另一方面将极大的促进胚胎工程技术的研究与应用，还有利于研究卵泡和卵母细胞的生长和发育规律。

动态添加FSH对绵羊卵巢皮质组织体外培养的影响

本研究旨在探索促卵泡素(FSH)对体外培养绵羊卵巢原始卵泡和组织活性的影响。通过稳定或动态方式添加不同浓度FSH(1、10、50、100ng·mL-1),用组织学和免疫组化PCNA方法来评估FSH对体外培养绵羊卵巢皮质组织中原始卵泡激活、生长、存活以及颗粒细胞增殖活性的影响;此外通过测定培养液中雌激素含量,评估卵巢组织体外培养过程中活性的保持。结果表明,先升后降动态添加FSH对于卵泡发育、存活和生长以及颗粒细胞的增殖具有全面的促进作用;同时组织分泌雌激素能力也高于其他组。以稳定方式添加时,50ng·mL-1FSH在培养1d时显示对卵泡发育的显著促进作用(P<0.05),添加10ng·mL-1以上浓度的FSH可以促进卵泡存活和生长(P<0.05)。在整个培养期内,各培养组中雌激素产量持续增加,说明卵巢活性在本培养体系中可以得到很好的维持。本试验结果表明FSH可能参与早期卵泡的发生,动态添加FSH更有利于体外培养卵泡的发育和组织活性的维持。

新生大鼠卵巢体外培养体系的研究

目的:探讨最适宜于大鼠原始卵泡体外生长发育的培养体系。方法:取出生2d的SD大鼠卵巢,分别在Waymouth和DMEM中培养8d,石蜡制片,HE染色,统计分析各级正常卵泡数;于培养d4、d8观察各级卵泡形态;并用免疫组化方法检测在这两种培养体系的卵巢中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达定位情况。结果:①在Waymouth中,由原始卵泡启动生长成为初级卵泡和次级卵泡的百分率分别是25.51%和6.93%,高于DMEM中的17.06%和3.56%(P<0.01)。②在Waymouth中培养的卵泡形态都较正常,而在DMEM中培养的异常卵泡较多。③PCNA作为原始卵泡生长的指标,也说明卵巢在Waymouth中能良好生长。结论:Waymouth培养体系是研究原始卵泡生长的一个理想的培养体系。

新生小鼠原始卵泡成熟的诱导

目的:建立人工诱导新生小鼠原始卵泡成熟的方法。方法:30只新生小鼠卵巢同种异体移植于去势的10只成年雌小鼠肾被膜下,14d后分离窦前卵泡进行体外成熟培养。结果:卵泡成活率为50.6%,窦腔形成率为22.3%,卵母细胞成熟率为10.3%,MⅡ期卵母细胞平均直径为71.8±5.6μm。结论:本方法可以诱导新生小鼠原始卵泡发育,从而得到第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞。

不同添加成分对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞体外成熟是胚胎工程中的一项基础性研究。试验比较了不同添加成分对绵羊卵母细胞的体外成熟及其后续发育的影响。分析了EGF不同添加量、FSH∶LH的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响。结果表明,①添加30ng/mLEGF的成熟率显著高于其他试验组(85.0%VS60.0%,71.7%,72.7%,P<0.05),并可提高绵羊孤雌激活胚的囊胚发育率;②成熟液中添加FSH1μg/mL,LH5.0IU/mL成熟率最高;③在绵羊卵母细胞成熟液中添加3%绵羊大卵泡液,在成熟率上极显著高于20%小卵泡液的添加组(78.6%VS36.5%,P<0.01),显著高于3%小卵泡液的添加组和未添加组(78.6%VS60.0%,67.5%,P<0.05)。