干细胞样肝原始细胞的体外分化

目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中的形态学变化并用显微摄影记录结果,最后利用免疫细胞化学分析鉴定分化后细胞的性质。结果:干细胞样肝原始细胞集落在体外培养时可形成类似肝小叶的形状,集落中央大部分细胞分化成双核细胞,集落周边细胞仍为单核细胞,但体积明显增大,整个集落中的细胞呈放射状排布。分化后,细胞群中的部分细胞表达成熟肝细胞标志白蛋白(albumin),少部分细胞表达胆管上皮细胞标志细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19),但所有细胞均不表达低分化肝细胞标志α-甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)。结论:干细胞样肝原始细胞在体外具有多向分化能力,可分化为表达成熟肝细胞和胆管上皮细胞标志的细胞。

极小胚胎样干细胞在再生医学中的研究进展

再生医学的发展为治疗受损或衰竭的实质器官提供了一种新的治疗方法,在临床上具有广阔的应用前景。近年来,有研究者从成体组织中分离得到一些数量稀少的极小胚胎样干细胞(VSEL-SCs),VSEL-SCs具有独特的生物学特性,能够表达多能干细胞及原始生殖细胞的标志物,且具有向三胚层分化的潜能。目前,研究者认为VSEL-SCs在受损组织的再生修复和成体组织的更新过程中发挥着重要作用。

ELL3结合的LINE-1作为增强子调控小鼠胚胎干细胞原始多能性

逆转录转座子占据了小鼠基因组的40%以上,并对宿主基因组的结构和进化产生重要影响。LINE-1是一类具有自主转座能力的逆转录转座子。尽管存在导致基因组不稳定的潜在风险,但LINE-1在胚胎早期阶段高度活化。该团队发现ELL3结合的年轻LINE-1亚家族,L1Md_Ts,在小鼠原始态胚胎干细胞中起到增强子的作用。当ELL3缺失时,L1Md_Ts 5hmC水平下降,H3K27ac水平上升,并促使L1Md_Ts附近的基因表达上调。特别是,ELL3结合并抑制了位于Akt3基因内的基于L1Md_T的增强子活性,而Akt3基因编码了AKT信号通路的关键调控因子。在小鼠胚胎干细胞和着床前胚胎发育过程中,ELL3通过抑制AKT3来调控ERK信号通路的适当激活。该研究揭示了ELL3介导的L1Md_T增强子活性在胚胎干细胞多能性调控中的重要意义。

转录因子Blimp1蛋白的研究现状

Blimp1蛋白作为锌指蛋白转录抑制因子,其促进B细胞发育成浆细胞终末分化中的作用已被大家共识。最近的研究显示,此蛋白在B细胞发育中起维持作用、在T细胞发育中起诱导分化作用,及在B细胞淋巴瘤中起抑癌因子作用。在小鼠及其他动物的胚胎发育中,Blimp1蛋白在原始干细胞发育、肌肉组织的形成等方面的作用也得到了人们初步的认识。

Culture of Embryonic Stem Cell by Primordial Germ Cells of Down Producing Goat

[Objective] The paper was to establish embryonic stem cell system of goats. [Method] Numerous primordial germ cell colonies were derived from gonadal ridge and the surrounding tissues in 20 millimeter fetuses of down producing goat. Primordial germ cells and goats embryonic fibroblasts obtained from conceptus of equivaient gestational age were co-cultured. [Result] The colonies showed some characteristics of embryonic stem cells, such as the morphology of nest-like, they continued to be AKP positive and the ability to be continuously passed [Conclusion] These cells were pluripotent and ES-like cells.

鸡Rbbp5基因的生物信息学分析及过表达载体构建

研究旨在利用生物信息学技术分析Rbbp5基因的生物学特征,构建过表达载体,为研究其在鸡生殖干细胞中的调控模式提供试验材料,以探讨其作为组蛋白甲基化修饰酶发挥作用的具体机制。试验利用多种在线工具分析RBBP5的氨基酸序列、保守结构域、亲疏水性、跨膜结构域和信号肽表达,预测其二级、三级结构,进行互作蛋白的预测;采用双酶切和测序鉴定重组载体pcDNA3.1-Rbbp5-Gst;qRT-PCR验证重组载体在PGCs中的表达。结果显示:RBBP5蛋白含有高度保守的结构域——WD40,内含7段典型的WD40重复序列,其亲水性高、不含跨膜结构域、无信号肽表达,可用以构建过表达载体;同源建模和互作蛋白预测显示RBBP5高度保守,互作蛋白为ASH2L、WDR5、DPY30和MLL2等;双酶切和测序结果表明,Rbbp5成功插入pcDNA3.1载体,未出现移码和突变;qRT-PCR结果显示PGCs中重组载体可使Rbbp5过量表达。结果为探明Rbbp5在鸡原始生殖细胞形成中的功能和机制研究提供了试验素材和理论依据。

鸡WDR5基因真核表达载体构建及对PGCs形成相关基因表达的影响

【目的】对鸡色氨酸天冬氨酸重复域5(WD repeat domain 5,WDR5)进行生物信息学分析,构建真核表达载体,并检测其对原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)形成相关基因表达的影响,探索WDR5在鸡PGCs形成中的调控作用。【方法】利用ProtParam、NCBI保守结构域分析、Uniport、TMHMM Server v.2.0和SignalP在线网站,分析WDR5的氨基酸序列、保守结构域、亲疏水性、跨膜结构域和信号肽表达。利用SWISS-MODEL进行同源建模预测其三级结构,借助String网站进行互作蛋白的预测。构建重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST,进行双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST转染PGCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检验WDR5重组蛋白在PGC中的表达情况;用RT-qPCR检测过表达WDR5对PGCs形成相关基因(DDX4、C-KIT、BLIMP1、LIN28B和PRDM14)表达水平的影响。【结果】WDR5蛋白含有1个高度保守的WD40结构域,内含7个典型的WD40重复序列;其亲水性高、不含跨膜结构域、无信号肽表达,可用于构建重组真核表达载体。同源建模和互作蛋白预测显示WDR5高度保守,互作蛋白为类ASH2蛋白(ASH2 Like,ASH2L)、RB结合蛋白5(RB Binding Protein 5,RBBP5)、DPY30和KAT8调控因子NSL复合物亚基3(KAT8 Regulatory NSL Complex Subunit 3,KANSL3)。双酶切和测序结果表明,重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST构建成功。RT-qPCR结果显示PGC中重组载体可使WDR5过量表达;Western blot结果表明,PGC中可表达重组蛋白。WDR5过表达可使PGCs形成相关基因的表达水平升高。【结论】构建的WDR5重组载体在鸡PGCs中能够表达;WDR5基因表达上调后,PGCs形成相关基因表达水平升高,推测其可调控鸡PGCs的形成。

极小胚胎样干细胞的生物学特性

近年来，研究者从小鼠骨髓和其他组织脏器中分离并纯化了一类数量极其稀少的极小胚胎样干细胞（very small embryonic—like stem cells，VSELs）。VSELs不仅表达多能干细胞的表面分子标记，并能向3个胚层方向分化。有学者推测，VSELs可能是在哺乳动物组织／器官的发育早期迁移并定居下来的，且能在特定情况下向组织特异的单潜能干细胞方向分化。据此，VSELs可能在成体组织的更新和损伤组织的再生修复过程中发挥重要作用。