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利用废弃胚胎行人原核移植方法的初步建立 被引量:1
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作者 刘颖 周灿权 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期342-346,共5页
【目的】探索利用废弃胚胎进行人原核移植的方案。【方法】收集废弃多原核受精卵117个。用显微操作-电融合的方法构建原核移植重构胚胎。分别比较钙离子浓度0.05mmol/L(n=39)和0.1mmol/L(n=58)的两种电融合液以及电压分别为1800V/cm(n=... 【目的】探索利用废弃胚胎进行人原核移植的方案。【方法】收集废弃多原核受精卵117个。用显微操作-电融合的方法构建原核移植重构胚胎。分别比较钙离子浓度0.05mmol/L(n=39)和0.1mmol/L(n=58)的两种电融合液以及电压分别为1800V/cm(n=58)和2000V/cm(n=20)的两种电场条件对重构合子融合率和发育的影响。【结果】操作成功率70.1%,融合成功率59.8%,得到43个卵裂胚胎,其中23个(53.5%)6细胞以上胚胎。共14个重构胚发育至8细胞或以上,得到3个囊胚。将电压由2000V/cm下降到1800V/cm,重构胚胎融合率、卵裂率和囊胚率的差异没有统计学意义(P>0.05),但6-细胞率明显上升(22.2%vs.60.9%,P<0.05)。和钙离子浓度为0.05mmol/L的融合液比较,0.1mmol/L的融合液融合率明显上升(39.3%vs.69.0%,P<0.05),卵裂率、6-细胞率和囊胚率皆无统计学差异(P>0.05)。【结论】通过显微操作-电融合的方法,用废弃胚胎重构人核-质异质的胚胎模型,是可行的、经济的。 展开更多
关键词 原核移植 电融合 人胚胎
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原核移植技术对子代小鼠脑组织mRNA表达谱的影响
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作者 李天杰 曹延祥 +3 位作者 金小虎 赵红翠 于洋 乔杰 《天津医药》 CAS 2016年第10期1213-1216,1299,共5页
目的探讨原核移植(PNT)技术对子代小鼠脑组织m RNA表达谱的影响。方法将SPF级ICR(CD-1)雌鼠超促排卵并与雄鼠交配受精后,收集雌鼠受精卵进行原核移植,获得重构胚胎,将其移植到假孕小鼠输卵管内获得原核移植子代小鼠(PNT组),未经原核移... 目的探讨原核移植(PNT)技术对子代小鼠脑组织m RNA表达谱的影响。方法将SPF级ICR(CD-1)雌鼠超促排卵并与雄鼠交配受精后,收集雌鼠受精卵进行原核移植,获得重构胚胎,将其移植到假孕小鼠输卵管内获得原核移植子代小鼠(PNT组),未经原核移植操作的受精卵经过胚胎移植后获得子代小鼠(对照组)。提取2组小鼠脑组织RNA,逆转录为c DNA后荧光染料标记,利用Agilent小鼠m RNA芯片检测2组m RNA表达谱差异,筛选差异表达的m RNA并进行GO和信号通路分析。结果 PNT组与对照组表达差异倍数在2倍以上的m RNAs有392个,占所有m RNAs的1.7%,其中366个表达升高,26个表达降低;表达差异倍数在4倍以上的共11个。上述差异表达的m RNAs经GO分析结果显示靶基因富集于m RNA可变剪接、小GTP酶介导的信号转导、胰岛素受体信号通路调节等生物学过程以及水解酶活性、跨膜转运蛋白活性、焦磷酸酶活性等分子功能。信号通路富集分析结果显示靶基因集中在离子通道转运、脂肪酸代谢、丁酸甲酯代谢、三酰甘油和酮体代谢等信号通路。结论原核移植可能会对小鼠脑组织一些关键代谢过程产生影响。 展开更多
关键词 移植技术 胚胎移植 RNA 信使 基因表达谱 计算生物学 原核移植
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“三亲”体外受精技术治疗线粒体疾病的反思 被引量:2
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作者 王张生 唐增 周韵娇 《中国医学伦理学》 2015年第5期679-682,共4页
线粒体疾病是一种不同寻常的遗传疾病,"三亲"体外受精技术作为一项新的辅助生殖技术,可能会使女性避免将线粒体疾病遗传给后代,但其争议不断,对此做一些科学及伦理方面的阐述及反思。对其必要性、安全性、有效性、以及合伦理... 线粒体疾病是一种不同寻常的遗传疾病,"三亲"体外受精技术作为一项新的辅助生殖技术,可能会使女性避免将线粒体疾病遗传给后代,但其争议不断,对此做一些科学及伦理方面的阐述及反思。对其必要性、安全性、有效性、以及合伦理性作了讨论,进而对该项技术的应用可能带来的风险提出担忧,基于目前的现状,对该项技术应该采取保守态度。 展开更多
关键词 三亲胚胎 辅助生殖 线粒体疾病 线粒体DNA 原核移植 孕母纺锤体移植
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生殖遗传技术预防线粒体遗传病的研究进展 被引量:4
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作者 纪冬梅 曹云霞(审校) 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2020年第2期153-157,162,共6页
发生在卵子中的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变引起母系家族性疾病,即线粒体遗传病。线粒体遗传病通常在婴幼儿期发病,且绝大多数线粒体疾病影响到多器官系统的正常功能,是一类严重危害人类健康的可致残致死性疾病,无有效药物... 发生在卵子中的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变引起母系家族性疾病,即线粒体遗传病。线粒体遗传病通常在婴幼儿期发病,且绝大多数线粒体疾病影响到多器官系统的正常功能,是一类严重危害人类健康的可致残致死性疾病,无有效药物治疗,故女性患者不建议生育。mtDNA遗传学特征使得很多携带致病性mtDNA突变女性的遗传咨询更加困难,但可以考虑通过生殖遗传干预的方法帮助生育,降低后代患有线粒体遗传病的风险。胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)与产前诊断技术可检测突变mtDNA水平,选择正常的胚胎移植或者预防携带高水平突变mtDNA子代的出生,但并不适于所有患者。线粒体置换技术的诞生为预防严重线粒体遗传病带来希望,有望使后代患有线粒体遗传病的风险最小化,但其长期安全性、有效性仍需进一步研究。 展开更多
关键词 DNA 线粒体 线粒体遗传病 遗传性疾病 先天性 胚胎植入前遗传学诊断 植入前诊断 产前诊断 线粒体置换 纺锤体移植 原核移植 极体移植 线粒体替代疗法
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Human Pro-insulin Transgenic Calf Derived from Somatic Cell Nuclear Transfer 被引量:5
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作者 杨东山 郭旭东 +6 位作者 海棠 杜晨光 王建国 仓明 刘东军 李喜和 旭日干 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期409-416,共8页
The current study was undertaken to evaluate the possibility of producing a human pro-insulin transgenic cow by means of somatic cell nuclear transfer (SCNT). A double selection system, Neomycin resistance (Neo^r)... The current study was undertaken to evaluate the possibility of producing a human pro-insulin transgenic cow by means of somatic cell nuclear transfer (SCNT). A double selection system, Neomycin resistance (Neo^r) gene and enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene linked through an inner ribosomal entry site (IRES) sequence directed by a Cytomegalovirus (CMV) promoter, was used for enrichment and selection of the transgenic cells and preimplantation embryos. Transgenes were introduced into bovine fetal fibroblast cells (BFF) cultured in vitro through electroporation (900 V/cm, 5 ms). Transgenic bovine fibroblast cells (TBF) were enriched through addition of G418 in culture medium (800 μg/mL). Before being used as a nuclear donor, the TBF cells were either cultured in normal conditions (10% FBS) or treated with serum starvation (0.5% FBS for 2-4 days) followed by 10 hours recovery for G1 phase synchronization. Transgenic cloned embryos were produced through GFP-expressing cell selection and SCNT. The results were the percentage of blastocyst development following SCNT was lower using TBF than BFF cells (23.2% VS 35.2%, P 〈 0.05). No difference in the percentage of cloned blastocysts between the two groups of transgenic nuclear donor of normal and starvation cultures were observed (23.2% VS 18.9%, P 〉 0.05). Two to four GFP-expressing blastocysts were transferred into the uterus of each synchronised recipient. One pregnancy from of seven recipients (21 embryos) was confirmed by rectum palpation 60 days after embryo transfer and one recipient has given birth to a calf at term. PCR and DNA sequencing analysis confirmed that the calf was produced using human proinsulin transgenic animal. 展开更多
关键词 Somatic cell nuclear transfer Human pro-insulin EGFP Transgenic calf
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