人MT-1E融合蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

目的 :体外表达人源性MT 1E融合蛋白并进行纯化。方法 :采用RT PCR方法获得人MT 1E基因的编码区 ,将其克隆入原核表达载体pQE4 0 ,并在大肠杆菌M15中表达 ,对蛋白的表达形式及诱导条件进行分析 ,用Ni NTagarose亲和层析柱纯化目的蛋白。结果 :重组蛋白在原核细胞中以可溶和不可溶两种表达形式存在 ,但以不可溶性形式为主 ,表达量随诱导时间延长而增加 ,在诱导 8h时目的蛋白约占菌体总蛋白的 32 %。经亲和层析获得较高纯度的人MT 1E融合蛋白。结论 :利用基因重组原核表达技术获得较纯的人源性MT 1E融合蛋白 ,为进一步研究金属硫蛋白的功能及特异性抗体的制备奠定了基础。

人谷氧还蛋白基因的分子克隆及表达

目的:克隆人脐静脉内皮细胞谷氧还蛋白(glutaredoxin, Grx)编码区的cDNA序列并进行序列测定,构建原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达. 方法:从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,采用RT- PCR技术,获得该基因编码区的cDNA,并重组入原核克隆表达载体pRSETA,构建重组质粒pRSET- Grx,通过茵落PCR筛选及限制性内切酶鉴定,选择阳性克隆并测序.将测序正确的重组质粒pRSET-Grx 转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达. 结果:将所得序列与GenBank提供的序列(NM002064)比较,测出的序列在核苷酸序列上有一处碱基不同,但在氨基酸序列上与已知序列一致.IPTG诱导4-5 h后, 150 g/L SDS-PAGE分析,表达出Mr16000的蛋白. 结论:从人脐静脉内皮细胞中成功地获得Grx编码区的cDNA,成功构建了原核融合表达载体pRSET-Grx并获得表达.