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猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点的克隆及原核表达载体的构建
1
作者
张春叶
沈红
+2 位作者
张莉
李焕荣
路苹
《中国农学通报》
CSCD
2008年第7期11-16,共6页
研究目的对猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点进行克隆和原核表达载体的构建。方法参考GenBank上公布的TGEVS基因A抗原位点序列,应用Primer6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增A抗原位点目的片段,将扩增产物连接于paesy-T克隆...
研究目的对猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点进行克隆和原核表达载体的构建。方法参考GenBank上公布的TGEVS基因A抗原位点序列,应用Primer6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增A抗原位点目的片段,将扩增产物连接于paesy-T克隆载体上构建克隆载体,用EcoRI和XholI对表达载体PET-32a(+)和重组质粒进行酶切,将酶切产物亚克隆至PET-32a(+)多克隆位点上,连接、转化至BL21(DE3),构建A位点的原核表达载体,并对阳性重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。结果所扩增的目的片段的大小为534bp,与原核表达载体连接后,经核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其它猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,说明成功地构建了TGEVS基因A抗原位点的原核表达载体。结论TGEVS基因A抗原位点原核表达载体的成功构建,填补了中国国内单独针对此位点进行研究的空白,也为TGEV诊断方法的建立提供良好的技术基础。
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关键词
猪传染性胃肠炎病毒
S基因A抗原位点
克隆
原核表达载体的构建
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职称材料
题名
猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点的克隆及原核表达载体的构建
1
作者
张春叶
沈红
张莉
李焕荣
路苹
机构
北京农学院动物科学技术系
北京市农林科学院畜牧兽医研究所
农业应用新技术北京市重点实验室
出处
《中国农学通报》
CSCD
2008年第7期11-16,共6页
基金
农业应用新技术北京市重点实验室开放课题"猪传染性肠胃炎病毒与猪呼吸道冠状病毒检测方法的研究"(KF2004-04)
文摘
研究目的对猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点进行克隆和原核表达载体的构建。方法参考GenBank上公布的TGEVS基因A抗原位点序列,应用Primer6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增A抗原位点目的片段,将扩增产物连接于paesy-T克隆载体上构建克隆载体,用EcoRI和XholI对表达载体PET-32a(+)和重组质粒进行酶切,将酶切产物亚克隆至PET-32a(+)多克隆位点上,连接、转化至BL21(DE3),构建A位点的原核表达载体,并对阳性重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。结果所扩增的目的片段的大小为534bp,与原核表达载体连接后,经核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其它猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,说明成功地构建了TGEVS基因A抗原位点的原核表达载体。结论TGEVS基因A抗原位点原核表达载体的成功构建,填补了中国国内单独针对此位点进行研究的空白,也为TGEV诊断方法的建立提供良好的技术基础。
关键词
猪传染性胃肠炎病毒
S基因A抗原位点
克隆
原核表达载体的构建
Keywords
swine transmissible gastroenteritis virus, the A antigenic site of S gene, cloning, construction ofprokaryotic expression
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点的克隆及原核表达载体的构建
张春叶
沈红
张莉
李焕荣
路苹
《中国农学通报》
CSCD
2008
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