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重组人前列腺特异性抗原的原核表达、纯化与鉴定 被引量:1
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作者 王增军 张炜 +1 位作者 吴宏飞 眭元庚 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第12期1080-1083,共4页
目的:用分子克隆技术体外制备人前列腺特异性抗原(PSA)重组蛋白,并对其活性进行鉴定。方法:用分子克隆技术从前列腺癌cDNA文库中扩增PSAcDNA,再将cDNA和准备插入的质粒载体PET-12α分别用限制性内切酶NdeⅠ和BamHⅠ消化,然后用T4连接酶... 目的:用分子克隆技术体外制备人前列腺特异性抗原(PSA)重组蛋白,并对其活性进行鉴定。方法:用分子克隆技术从前列腺癌cDNA文库中扩增PSAcDNA,再将cDNA和准备插入的质粒载体PET-12α分别用限制性内切酶NdeⅠ和BamHⅠ消化,然后用T4连接酶将两者连接,序列正确的阳性克隆转染BL21(DE3)大肠埃希菌,诱导表达重组人PSA蛋白,从细菌包涵体中纯化PSA蛋白,再用小剂量胰岛素激活PSA活性,观察活化的PSA是否分解其变色底物S-2586和天然底物精囊蛋白Semenogelin(Sg)。结果:利用原核表达技术得到了重组人PSA,在胰岛素作用下PSA被激活,活性PSA水解其天然底物Sg和变色底物S-2586。结论:用基因克隆方法体外获得的重组人PSA蛋白可表现与天然PSA同样的丝氨酸蛋白酶活性和功能。 展开更多
关键词 前列腺特异性抗原 表达 纯化 原核鉴定 重组技术 分子克隆
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水貂肠炎病毒VP2基因的原核表达及鉴定 被引量:1
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作者 钱毓斌 张彦龙 《野生动物》 2012年第3期118-121,共4页
在分析水貂肠炎病毒VP2基因主要抗原位点分布的基础上,设计了1对特异性引物,克隆一段长为846 bp,编码主要抗原位点的基因片段。将该基因片段定向插入表达载体PET-32a中,转化BL21(DE3)菌株,IPTG诱导实现高效表达。诱导表达比较实验结果表... 在分析水貂肠炎病毒VP2基因主要抗原位点分布的基础上,设计了1对特异性引物,克隆一段长为846 bp,编码主要抗原位点的基因片段。将该基因片段定向插入表达载体PET-32a中,转化BL21(DE3)菌株,IPTG诱导实现高效表达。诱导表达比较实验结果表明,在37℃,IPTG浓度为1.0 mM,诱导时间为6 h,诱导表达达到最大效率。重组蛋白以包涵体形式存在,大小约为50 KD,应用兔抗水貂MEV抗体,经Western-blotting验证该重组蛋白具有MEV的抗原性,可为今后抗MEV单克隆抗体制备及相关免疫学检测方法的建立提供良好的抗原物质。 展开更多
关键词 水貂肠炎病毒 VP2基因 原核表达与鉴定
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Construction of a High-efficient Expression Vector of Δ^(12) Fatty Acid Desaturase in Peanut and Its Prokaryotical Expression 被引量:4
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作者 殷冬梅 崔党群 贾斌 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期81-88,共8页
A full-length sequence coding for △^12 fatty acid desaturase gene from peanut(Arachis hypogaea L.)was cloned into the expression vector, pRSETB, to generate recombinant plasmid pRSET/HO-A, which was subsequently tr... A full-length sequence coding for △^12 fatty acid desaturase gene from peanut(Arachis hypogaea L.)was cloned into the expression vector, pRSETB, to generate recombinant plasmid pRSET/HO-A, which was subsequently transformed into expression Escherichia. coli BL21(DE3)pLysS. The △^12 fatty acid desaturase was highly expressed in E. coli BL21(DE3)pLysS in the presence of isopropyl-D-thiogalactopyranoside (IPTG). The fusion protein was purified and used to form a reaction system in vitro by adding oleic acid as substrate and incubating it at 20℃ for 6 h. Total fatty acids was extracted and methlesterified and then analyzed with gas chromatography. A novel peak corresponding to linoleic acid methyl ester standards was detected with the same retention time. GC-MS (gas chromatogram and gas chromatogram-mass spectrometry) analysis showed that the novel peak was linoleic acid methyl ester. These results exhibited △^12 fatty acid desaturase activity, which could convert oleic acid to linoleic acid specifically. 展开更多
关键词 PEANUT △^12 fatty acid desaturase prokaryotical expression function identification
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