响应面法优化平菇单核原生质体的制备及再生技术

为了提高平菇原生质体融合育种效率,本研究通过构建基于原生质体产量及单核原生质体再生率的响应面模型,优化平菇原生质体制备体系。以平菇菌株黑平16-1为试材,分别通过单因素试验考察菌丝菌龄(3~6 d)、酶液浓度(0.5%~2.0%)、酶解温度(28~34℃)和酶解时间(3~6 h)对原生质体制备及再生率的影响,并在单因素试验基础上,设计4因素3水平的响应面试验,建立各因素与响应值(原生质体产量和单核原生质体再生率)之间的数学模型,确定原生质体制备及单核原生质体再生的最佳提取工艺。结果表明,最佳提取工艺为菌龄4 d、酶液浓度1.51%、酶解温度28.3℃、酶解时间3.7 h,在此条件下平菇原生质体产量和单核原生质体再生率分别为(2.25±0.21)×10^7个·mL^-1和(6.80±0.42)%,与模型预测值接近(2.27×10^7个·mL^-1和6.83%),方程拟合度良好,该方法适用于对平菇原生质体的制备及单核原生质体再生条件的参数优化。

酿酒酵母与糖化酵母原生质体的形成与再生

对影响酿酒酵母及糖化酵母形成与再生的因素——菌龄、酶浓度、温度、酶解时间、预处理剂的浓度和作用时间及渗透压稳定剂的选择做了初步的研究，确定了原生质体形成与再生的最佳条件：菌龄为13～15h，0．1％β-巯基乙醇作用10min；在30℃下，2．0％的蜗牛酶酿酒酵母、糖化酵母酶解1．0h；配制酶解液时渗透压稳定剂采用0．8mol／LKCl，而在稀释及配制再生培养基时则采用0．53mol／L蔗糖。

原生质体技术选育桃红侧耳优良菌株

研究了桃红侧耳原生质体的制备及再生,并进行了原生质体再生株的筛选工作。实验表明,培养5天的桃红侧耳菌丝体30℃酶解3h原生质体数目可达8.4×107/mL。原生质体再生率在1号再生培养基上最高,为6.9%。再生菌株经筛选后,得到长速显著快于出发菌株的优良菌株H120和H247。经F3代栽培实验证明:H120和H247的生物学效率明显优于出发菌株,且差异极显著。酯酶同工酶分析表明:H120和H247酶谱均发生了变化。

外部环境条件对香菇原生质体产量与再生率的影响

以香菇菌株0912试材,以原生质体产量与再生率为指标,探究酶种类、酶解时间、酶解温度、pH、稳渗剂种类、稳渗剂浓度及菌丝菌龄等7个因素对原生质体产量与再生率的影响。通过单因素试验,发现几种因素在固定限度之中时,都能够提升原生质体的产量以及再生率,并且具有明显的效果。原生质体的最佳制备条件为,在pH为5.0的条件下,使用0.5摩尔/升硫酸镁作为稳渗剂,在温度达到28℃时,对5日龄菌丝进行酶解3小时。最佳再生条件为,在pH为5.5的条件下,使用0.5摩尔/升蔗糖作为稳渗剂,在温度达到27.8℃时对6.5日龄菌丝进行酶解2.9小时。