提高红曲菌9903A原生质体形成数量和再生率的研究

采用酶解法制备红曲菌9903A原生质体。研究红曲菌菌丝体的菌龄、酶种类、酶解温度、酶解时间、稳渗剂和几种再生培养基对原生质体形成和再生的影响。确定酶解最佳条件为:菌龄50h～60h,组合酶(蜗牛酶(0.6%)+溶菌酶(0.4%)+纤维素酶(0.8%)),酶解温度31℃,酶解时间1.5h。研究了稳渗剂对原生质体制备与再生的影响,并对红曲菌9903A原生质体的释放和再生过程进行了观察。结果表明:山梨醇可促进原生质体的释放;蔗糖对原生质体的再生有促进作用。在此条件下原生质体的形成为4.24×108/mL,再生率为52%。

酿酒酵母与糖化酵母原生质体的形成与再生

对影响酿酒酵母及糖化酵母形成与再生的因素——菌龄、酶浓度、温度、酶解时间、预处理剂的浓度和作用时间及渗透压稳定剂的选择做了初步的研究，确定了原生质体形成与再生的最佳条件：菌龄为13～15h，0．1％β-巯基乙醇作用10min；在30℃下，2．0％的蜗牛酶酿酒酵母、糖化酵母酶解1．0h；配制酶解液时渗透压稳定剂采用0．8mol／LKCl，而在稀释及配制再生培养基时则采用0．53mol／L蔗糖。

2株酵母菌单倍体原生质体形成与再生条件的研究

对酒精高产酿酒酵母GGFS16和GJ2008单倍体原生质体的形成与再生条件进行了研究。结果表明,在菌龄8h、0.2%β-巯基乙醇和0.1%EDTA-Na2预处理20min、1.5%的蜗牛酶37℃处理30min以及使用浓度170g/L的蔗糖作为渗透压稳定剂的条件下,GGFS16和GJ2008单倍体原生质体的形成率和再生率均达到最大。形成率分别是98.14%和97.19%,再生率分别是17.29%和15.78%。

枯草芽孢杆菌Bx-4原生质体形成与再生条件优化

为优化枯草芽孢杆菌Bx-4原生质体形成与再生条件,研究了甘氨酸、青霉素、溶菌酶等因素对原生质体形成与再生的影响。结果表明,在最佳形成与再生条件下,原生质体形成率与再生率分别达到77.44%和88.03%。

红曲霉M_(9x)的原生质体形成与再生条件的研究

对红曲霉M9x用混合酶制取原生质体及原生质体再生条件进行了探索。其原生质形成和再生最佳条件为:以豆芽汁培养液为菌丝培养基,采用60h菌龄的菌丝体,以0.6mol/LMgSO4作为渗稳剂,用1.5%混合酶(蜗牛酶:纤维素酶=7:3)在30℃处理2h,原生质体形成数可以达到1.61×107个/ml,再生率为8.49%。

γ-亚麻酸菌株少根根霉原生质体形成与再生

用 6mg/m L纤维素酶 + 3mg/m L蜗牛酶 + 1 mg/m L溶菌酶作为混合酶酶解 2 8℃培养 2 6h的菌丝。以含 0 .6mol/L NH4Cl磷酸缓冲液 ( p H6.0 ) ,+ 0 .0 2 mol/L Mg SO4· 7H2 O+ 0 .4mmol/L Ca Cl2 作为渗透压稳定剂 ,酶解前以 0 .3% β-巯基乙醇处理 35 min,从少根根霉的菌丝中获得了大量的原生质体。同时对菌丝的培养时间、渗透压稳定剂、酶解系统和酶解温度等因素进行了观察 ,获得了制备原生质体的最适条件。

无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨

根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件，用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞，原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１，渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中，酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响，可确定最佳再生条件，再生率达３０％以上．

豆豉芽孢杆菌原生质体形成及再生条件的初步研究

为选育出适宜于工业生产豆豉的重组菌株,对4株豆豉芽孢杆菌原生质体形成与再生条件进行了初步研究。结果表明：溶菌酶浓度、酶解时间和温度与原生质体的形成率成正相关,与再生率成负相关。不同菌株对溶菌酶的敏感度不同,适宜形成原生质体的酶浓度为0.05-0.50 mg/mL,酶解时间5-20 min,酶解温度35℃,原生质体形成率达90%,原生质体再生率为8%左右。

松茸菌丝原生质体形成与再生条件的研究

采用多因素实验正交优选法比较不同酶、渗透压稳定剂、菌丝生理状况、菌丝培养基、预处理液和酶解时间等因素对松茸原生质体形成的影响和再生培养基、明胶、酪蛋白对松茸原生质体再生的影响。以 0 6MMgSO4 作为渗透压稳定剂 ,2 -硫基苏糖醇为预处理液 ,用 2 %蜗牛酶在 30℃酶解 6h ,每克菌丝可以得到 1× 10 6 个原生质体。再生最优条件 :0 6MMgSO4 ,PDY再生培养基 ,2 5%明胶 ,松茸菌丝再生率最高 4 97%。

木质素降解菌L_1原生质体的形成和再生

从自然界筛选出一株降解木质素高的白腐真菌 L1,对其原生质体的形成和再生进行了研究。在 OS培养基中生长的菌丝体 ,原生质体数量较高。在液体培养条件下 ,于 OS培养基中培养 60 h的菌丝体 ,用 0 .3% β-巯基乙醇与酶液同时处理菌丝体 ,采用 p H5 .0的混合酶 (蜗牛酶∶纤维素酶∶溶菌酶的最佳浓度比为 5∶ 4∶ 1 ) ;在 30℃酶解 4h;用 0 .4mol/L NH4Cl,1 0 mmol/L Mg SO4作渗透压稳定剂时 ,原生质体数量达到 4.32× 1 0 5个 /mg。

蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)原生质体形成与再生条件研究

研究了溶菌酶浓度、酶解温度及时间、制备液的pH值、渗透压稳定剂对蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)TO-8-24-2原生质体的形成与再生的影响。TO-8-24-2菌株原生质体形成和再生的最佳条件是以SMM pH7.5作酶解缓冲液,溶菌酶浓度为0.15mg/mL,在37℃下,酶解45分钟。原生质体形成率为91.7%,再生率为13.6%。

粉被马利娅霉原生质体的形成与再生

本文报道几个影响粉被马利娅霉（ＭａｒｉａｎｎａｅａｐｒｕｉｎｏｓａＬｉａｎｇ）原生质体形成和再生的重要因子。在所试的几种酶中，以单用蜗牛酶（Ｓｎａｉｌａｓｅ）６～８ｍｇ／ｍｌ于２５℃处理３～４ｈ对原生质体的制备和再生效果都较好。原生质体的形成与再生对０．６ｍｏｌ／Ｌ的三种无机盐稳定剂无选择性，均为合适的渗透压稳定剂。巯基乙醇对于原生质体的形成不是关键因素。打散菌丝时的机械拉力强度也很大程度上影响原生质体的形成。

红色酵母原生质体形成和再生条件的研究

研究了不同渗透压稳定剂、酶浓度、酶解时间、温度等对红色酵母（Ｐｈａｆｆｉａｒｈｏｄｏｚｙｍａ）原生质体的形成与再生的影响。实验结果表明：使用对数生长期早期的细胞、蜗牛酶浓度１％，３０°Ｃ处理５０～６０ｍｉｎ，山梨醇为渗透压稳定剂，有利于原生质体制备和再生。

球毛壳菌原生质体形成与再生研究

采用酶解法制备球毛壳原生质体 .确定酶解条件为 :菌龄 2 .5d ,渗稳剂为S/C .采用 5、15、15mg/mL的Novozym 2 34、蜗牛酶 ,溶壁酶混合酶液 ,30℃下酶解 1.5h .再生率可达 2 9.11% .研究了渗稳剂对原生质体制备与再生的影响 ,并对球毛壳原生质体的释放和再生过程进行了观察 .结果表明 :山梨醇可促进原生质体的释放和再生 ;Ca2 + 对原生质体的再生有促进作用 ;葡萄糖对再生菌株生长的促进作用优于山梨醇 .

地衣芽孢杆菌原生质体最佳形成和再生条件的研究

近年来,微生物原生质体融合及诱变受到广泛重视,实验方法日趋完善,实践证明它是一种有效的育种方法。在微生物原生质体制备和再生过程中,各种微生物所需的最佳条件差别很大。我们研究厂地衣芽孢杆菌53-A,菌株原生质体形成和再生的各种因素及最佳条件,并用光学显微镜和电镜观察了原生质体形成、再生和原生质体的聚集现象,现将结果报道如下。

钝齿棒杆菌AS1.998原生质体形成与再生条件的研究

研究了影响L-异亮氨酸(L-Isoleucine)产生菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.998原生质体形成和再生的各个因素。结果表明:菌体培养至对数生长期,0.8 U/mL青霉素G处理3 h后,1.0mg/mL的蛋清溶菌酶37℃,150 r/min酶解15 h,原生质体形成率可达98.0%以上,在含8.5%蔗糖的再生完全培养基上,再生率可达20.0%～30.0%。

产纤维素酶原生质体形成和再生条件选择

研究了4种营养缺陷型产纤维素酶菌的原生质体形成和再生条件。结果表明 ,它们原生质体形成条件均以0.2mol·L-1(pH5.8)磷酸缓冲液为好。绿色木霉(Trichodermaviride)UV2 -11 和另一未定木霉(T.sp.)UV2 -2 以0.7mol·L-1KCl的渗透稳定剂为好 ,菌丝菌龄分别为20,18～20h ;康宁木霉(T.Koningii)UV2 -1 和UV2 -15 以0.6mol·L -1NaCl的渗透稳定剂为好 ,菌丝菌龄均为16～20h,酶解时间均为2～3h。原生质体再生培养基以加入0.5%酵母膏和0.5 %泛酸钙的改良Czapek培养基效果好 ,用0.7mol·L-1 KCl和NaCl作为渗透稳定剂 。

酿酒酵母RasseⅫ原生质体的形成与再生

研究了菌龄、酶系统、脱壁促进剂、渗透压稳定剂对酿酒酵母ＲａｓｓｅⅦ（ＳａｃｃｈａｒｏｎｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＲａｃｅⅫ）原生质体形成与再生的影响。结果表明，对数生长早期的菌体最适于制备原生质体；酶浓度是影响原生质体产量的主要因子，其次为时间，再次是温度；而就再生率而言，温度则是决定因子，酶浓度为第二，时间则几乎不起作用；脱壁促进剂能够加速细胞壁的溶解，尤以巯基乙醇效果较好，然而也有降低再生率之弊，综合考虑原生质体形成与再生的情况，本研究中以选用２％的酶浓度３０℃下酶解１－１．５ｈ于１７％蔗糖高渗培养基上再生为获得ＲａｓｓｅⅫ原生质体形成率和再生率的最佳条件。

黑曲霉原生质体形成与再生影响因子的研究

运用正交试验设计研究酶系统、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂等因素对黑曲霉原生质体形成与再生的影响,确定黑曲霉原生质体形成与再生的最佳条件,获得高产原生质体,其浓度可达3.0×106个/mL,再生率达25%以上。并于欧林巴斯相差显微镜下观察了黑曲霉原生质体的形成过程。

红发夫酵母原生质体的形成和再生

研究了用NOVOZYME234酶,制备红发夫酵母的原生质体和再生的条件。