微生物原生质体灭活及其在育种中的应用

灭活原生质体融合技术的依据是,用适当的方法处理单一亲株或双亲株的原生质体,使之失去再生的能力,经细胞融合后,由于致死损伤部位的互补可以形成能再生的融合体,除有诱变作用的灭活剂外,一般的灭活处理对细胞DNA的遗传功能和重组力未发现有明显的影响。该技术在动、植物细胞融合中应用较多,近几年来在微生物研究中的应用亦有较大发展。一、原生质体灭活实验技术主要采用热、紫外线(UV)、电离辐射(X-射线、γ-射线)以及某些生化试剂(包括抗生素)等作为灭活剂。 (一)热灭活通常用50-52℃处理2h。在处理过程中。

麦角菌与雀稗麦角菌种间灭活原生质体融合

探索了在麦角菌中进行省却营养缺陷型标记的种间灭活原生质体融合。亲株Ⅰ（Ｃ．ｐｕｒｐｕｒｅａ，麦角隐亭产生菌）用紫外线灭活（１５Ｗ，照射距离３０ ｃｍ ）７５ ｍ ｉｎ，存活率约６×１０－ ５；亲株Ⅱ（Ｃ．ｐａｓｐａｌｉ，麦角酰胺产生菌）用热灭活（５０～５２℃）６０ ｍ ｉｎ，存活率为零。融合后的再生菌落均为亲株Ⅰ的形态，其再生频率比灭活的亲株Ⅰ提高约２０ 倍，推测绝大多数为融合子。后者经５ 次传代，大多数的产碱能力与亲株Ⅰ相当或略有提高。

双孢蘑菇和姬松茸灭活原生质体融合育种研究

以双孢蘑菇和姬松茸为亲本菌株，通过灭活原生质体融合，经过初筛和复筛，1株新的稳定的双孢蘑菇和姬松茸杂交高产菌株被选育出来。双孢蘑菇原生质体被热灭活（65％，30rain），姬松茸原生质体被紫外线灭活（30w，30cm，10min），双亲存活率为3．1×10^-7～3．3×10^-8。在聚乙二醇诱导下融合继续生存，亲本原生质体融合被实现，重组频率为4．8×10^-5。

木耳灭活原生质体融合育种研究

以黑木和毛木耳为亲本菌株 ,通过灭活原生质体融合 ,经过初筛和复筛 ,一株新的稳定的木耳高产菌株被选育出来。黑木耳和毛木耳原生质体分别被热灭活 (6 5℃ ,30min)和紫外线灭活 (30W ,30cm ,10min) ,双亲存活率为 3 5× 10 -7～ 3 2× 10 -8。在聚乙二醇诱导下融合继续生存 ,亲本原生质体融合被实现 ,重组频率为4 3× 10 -5。

应用双亲株灭活原生质体融合法选育林可霉素高产菌株

目的:选育高产优质林可霉素产生菌.方法:将林可霉素产生菌S活和紫外灭活,并将两种灭活原生质体用PEG融合,从融合株中筛选高产优质菌种.结果:获得82-201#融合株,其摇瓶效价分别较N65-2#、S78-1#提高17%和52%,且色素分泌少,传代稳定性强.结论:双亲株灭活原生质体融合选育林可霉素高产菌株是值得推广的一种选育方法.

高产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件

研究青霉菌Penicillium Q5和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3原生质体制备与再生的最佳条件。采用酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长,酶浓度,酶解时间和灭活时间进行了优化。亲本菌株Q5,培养液中加入浓度0.5%甘氨酸和含量10%的蔗糖处理后,在质量浓度均为10 mg/mL的溶菌酶和蜗牛酶(1︰1)酶解作用下,35℃处理3 h,原生质体生成量达到最大值,为7.35×106cfu/mL;亲本菌株K3,用4 U/mL的青霉素处理,在1 mg/mL的溶菌酶作用下,35℃处理1 h,原生质体形成率与再生率的乘积达到最大值,此时K3原生质体量为1.46×107cfu/mL。青霉菌在65℃热灭活的时间为1 h,紫外灭活时间为3 min;枯草芽孢杆菌在65℃热灭活的时间是2.5 h,紫外灭活时间为5 min。这为后续原生质体融合选育具有抗逆性的高产纤维素酶菌株打下基础。

蛹虫草虫草素高产原生质体融合子鉴定与筛选

以蛹虫草（Cordyceps militaris）4号和8号菌株作为亲本，采用灭活原生质体融合技术获得228个再生菌株。酯酶同工酶与ISSR—PCR方法相结合鉴定融合子，以虫草素含量和子实体性状为筛选指标，经过初步的遗传稳定性测试，得到虫草素含量显著提高的5个稳定融合子——CM59、CM61、CM69、CMl36和CMl86，其虫草素含量分别为8号菌株的1．17～1．73倍。实验证明融合子菌丝中虫草素含量普遍提高。筛选得到的5个融合子经进一步遗传稳定性验证后可用于以获得虫草素为目的的菌丝体发酵培养。

用原生质体融合进行冬菇育种的研究

用灭活的〔Flammulinasubnudus (Pr .)Sing〕双核菌株原生质体与〔Flammulinavelutipes (Fr.)Sing〕双核菌株原生质体融合 ,在 2 2℃的条件下筛选得融合子。融合频率为 0× 10 -5～ 4 1× 10 -5。融合子与双亲有明显的拮抗性。融合子的菌丝体形态 ,氨基酸含量 ,子实体的形态 ,以及酸性磷酸酶的测定都与双亲不同。

激光生物学

Q631 2000010249氦氖激光在红霉素链霉菌和龟裂链霉菌灭活原生质体融合中的应用:Ⅰ.激光对灭活原生质体融合频率的影响=Application of He-Ne laser to inactived protoplastfusion of STR erythreus and STR rimosus:Ⅰ.effect of laser on inactived protoplast fusionfrequency[刊,中]/陈五岭,杨晓燕(西北大学生物学系.陕西,西安(710069)),姚胜利(中科院西安光机所.陕西,西安(710068))//光子学报.—1998,27(7).