原癌基因蛋白质C-erbB-2在乳腺良恶性病变中表达的意义

目的 :检测原癌基因蛋白质 C- erb B- 2在乳腺良恶性病变中的表达及意义。方法 :对 1 1 1例乳腺良恶性病变的石蜡切片标本进行免疫组织化学染色。结果 :乳腺良恶性病变中乳腺导管内乳头状瘤病的 C- erb B- 2阳性率为 31 .3% ,与乳腺纤维腺病和纤维腺瘤比较差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ,乳腺癌 C- erb B- 2的阳性率为 74.3% ,与良性病变比较差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ;乳腺癌 C- erb B- 2表达与肿瘤大小和组织学分级呈正比 ( P<0 .0 5 ) ,与激素受体 ( ER、PR)水平及 5年生存期呈反比( P<0 .0 5 ) ,与淋巴结是否转移无关。结论 :C- erb B- 2表达的乳腺导管内乳头状瘤病容易癌变 ,C- erb B- 2过度表达的乳腺癌组织分化差、生存期短、预后不好。C- erb B-

带“-”原癌基因及原癌基因蛋白质的检索技巧探讨

利用国内外医学权威数据库,对带“-”原癌基因及原癌基因蛋白质中易漏检的一些问题,通过检索实例进行比较,探讨如何提高文献检索的查全率和查准率。

原癌基因蛋白质C-erb B-2及增殖细胞核抗原在结肠癌中的定量检测及临床意义

目的 探讨原癌基因蛋白质 C- erb B- 2及增殖细胞核抗原 (PCNA )在结肠癌中含量及与结肠癌生物学行为的关系。 方法 利用免疫组织化学及自动化图像分析技术定量检测 C- erb B- 2及 PCNA在 10例正常肠粘膜 ,30例结肠腺瘤 ,5 3例结肠癌中的表达。 结果 阳性总面积、积分光密度、平均光密度、阳性率 1 、平均光密度 1及半定量测定的阳性率等 6个参数值均按正常肠粘膜→ 级不典型增生腺瘤→ 级不典型增生腺瘤→ 级不典型增生腺瘤→腺癌的顺序呈递变趋势 ,伴有淋巴结转移的腺癌组中 ,上述各参数值明显增高。 结论 C- erb B- 2及 PCNA一起可作为判断肿瘤的恶性程度及评价预后的指标 ,应用图像分析技术对结肠癌及癌前病变进行多指标多参数的计量分析 ,具有鉴别诊断的重要意义 ,为结肠癌的早期诊断提供客观依据。

原癌基因蛋白质c-Myc及骨膜蛋白在脑胶质瘤中的表达及与肿瘤侵袭转移的相关性

目的探讨原癌基因蛋白质c-Myc及骨膜蛋白在脑胶质瘤中的表达及与肿瘤侵袭转移的相关性。方法回顾性分析2017年2月—2018年10月行肿瘤切除术的脑胶质瘤82例作为研究组,根据WHO胶质瘤分级分为低级别组32例、高级别组50例;另选取同期行颅内减压手术的脑外伤60例作为对照组。检测并比较脑胶质瘤组织、正常脑组织中c-Myc和骨膜蛋白表达阳性率,c-Myc和骨膜蛋白与肿瘤侵袭转移的相关性采用Pearson直线相关分析。结果研究组c-Myc和骨膜蛋白表达阳性率均高于对照组(P<0.01)。高级别组c-Myc和骨膜蛋白表达阳性率均高于低级别组(P<0.05,P<0.01)。c-Myc和骨膜蛋白与肿瘤侵袭转移呈显著正相关(P<0.01)。结论c-Myc及骨膜蛋白在脑胶质瘤中呈高表达,并且与肿瘤侵袭转移呈正相关。脑胶质瘤组织中c-Myc和骨膜蛋白表达水平可为患者病情和预后评估提供参考。

基因共表达网络分析及蛋白质相互作用筛选核分裂周期蛋白80与肺腺癌分期及预后的相关性

目的通过基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analaysis,WGCNA)及蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)识别肺腺癌发生发展中的枢纽基因。方法从TCGA数据库中下载497例肺腺癌组织和54例正常肺组织的RNA-seq表达矩阵及配套临床信息。利用R语言的DESeq2软件包进行差异基因表达分析。随后通过WGCNA筛选出枢纽模块,PPI分析鉴定出枢纽基因。最后使用GEIPA数据库验证枢纽基因与肿瘤分期、预后的关系。结果通过DESeq2分析得到1904个差异基因。通过构建共表达网络,确定棕色和蓝色模块为枢纽模块,PPI分析筛选得到核分裂周期蛋白80(nu⁃clear division cycle 80,NDC80)为枢纽基因。GEIPA数据库验证结果显示NDC80基因与肿瘤的分期相关(F=3.58,P<0.05),且NDC80基因高表达与肿瘤的总生存期较差有明显相关(HR=1.6,P<0.05)。结论通过构建WGCNA及PPI分析得到枢纽基因NDC80,且NDC80基因的高表达与肿瘤的分期及预后密切相关。提示NDC80基因有望成为肺腺癌预后的生物学标志物。

类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列,设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641bp的groEL基因片段,将其连接至pMD19-T载体,构建pMD19-T-groEL重组质粒,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定正确后,构建重组质粒pET-28a(+)-groEL。将鉴定正确的pET-28a(+)-groEL质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定,利用DNAMAN和BioEdit等软件进行生物信息学分析。结果发现,试验成功克隆了类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因并进行了蛋白表达,表达的融合蛋白大小约为64 ku,GroEL蛋白的分子式为C4510H7381N1641O1840S521,原子总个数为15 893,消光系数为32 500,不稳定指数为40.31,亲水性平均值为0.901。GroEL蛋白二级结构中α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、无规则卷曲(Cc)分别占48.71%、13.19%和38.10%。本试验结果为深入探究类鼻疽杆菌groEL基因的分子作用机理奠定了基础。

肝癌介入治疗前后原癌基因Pokemon、甲胎蛋白异质体、甲胎蛋白、脱γ-羧基凝血酶原联合检测的临床价值

目的研究原癌基因Pokemon、甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)、脱γ-羧基凝血酶原(DCP)在原发性肝癌(HCC)病人介入治疗前后表达量变化及其与治疗效果之间的关系。方法纳入30例HCC病人,均行肝动脉化疗栓塞(TACE),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测治疗前后血清中Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量,分析四者TACE前后表达量变化与治疗效果之间的关系,并对TACE治疗后复发者与未复发者Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量变化进行探讨。结果(1)TACE治疗有效组Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量分别为(50.09±4.91)μg·L^(-1)、(322.67±64.53)μg·L^(-1)、(10.26±1.08)μg·L^(-1)、(42.66±9.43)AU·L^(-1),低于治疗前Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量(103.10±7.65)μg·L^(-1)、(807.36±113.55)μg·L^(-1)、(27.42±3.00)μg·L^(-1)、(93.39±4.70)AU·L^(-1);t=6.741、7.740、7.534、4.985;P=0.000、0.000、0.000、0.001。治疗无效组Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量分别为(87.71±5.73)μg·L^(-1)、(503.20±132.01)μg·L^(-1)、(20.31±2.66)μg·L^(-1)、(73.11±8.36)AU·L^(-1),与治疗前四者的表达量相比(93.47±1.92)μg·L^(-1)、(610.55±101.69)μg·L^(-1)、(21.18±1.97)μg·L^(-1)、(75.01±7.29)AU·L^(-1),差异无统计学意义(t=1.801、1.280、0.626、0.764;P=0.146、0.270、0.565、0.488)。(2)按治疗后3个月是否复发将有效组分为复发者和未复发者,复发者Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量分别为(114.63±16.28)μg·L^(-1)、(763.50±140.22)μg·L^(-1)、(18.58±2.09)μg·L^(-1)、(87.93±8.57)AU·L^(-1),与TACE治疗后1个月(复发前)Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量[(65.90±8.25)μg·L^(-1)、(400.60±99.11)μg·L^(-1)、(9.17±1.27)μg·L^(-1)、(35.93±4.10)AU·L^(-1)]相比,差异有统计学意义(t=2.598、6.247、5.762、6.122;P=0.029、0.000、0.000、0.000)。结论 TACE治疗有效者Pokemon、AFP、AFP-L3、DCP的表达量明显下降,复发者四种标志物的表达量再次升高,提示四者对监测HCC的治疗效果及预测肿瘤的复发有一定的参考价值,但需进一步研究证实。

人宫颈癌基因蛋白B细胞表位及其HLA限制性细胞毒性T细胞表位预测分析

目的:预测人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)蛋白的二级结构,B细胞表位及其HLA-A,B限制性细胞毒性T细胞表位.方法:综合分析二级结构、亲水性、柔韧性、表面可及性与抗原性指数,预测HCCR蛋白的B细胞抗原表位;利用BIMAS,SYFPEITHI和NetCTL方法预测分析其HLA-A*0201限制性CTL表位,运用NetCTL方法对HLA-A的其他等位基因和HLA-B限制性CTL表位进行预测分析.结果:HCCR蛋白的二级结构主要由α-螺旋结构组成,B细胞优势表位位于N端第41～53,216～228,310～325和355～360区段;预测得到5个HLA-A*0201限制性CTL优势表位分别为YLVFLLMYL(152～160),YLFPRQLLI(159～167),LLLHNVVLL(343～351),CLFLGIISI(138～146)和SIPPFA-NYL(145～153),HCCR蛋白HLA-A,B限制CTL表位主要位于胞外区.结论:应用多参数预测HCCR蛋白B细胞表位及其HLA-A,B限制性细胞毒性T细胞表位,为进一步实验鉴定其表位进而制备单克隆抗体和基于HCCR抗原的肿瘤免疫学治疗奠定了基础.

原癌基因蛋白C-MYC和C-FOS在良性胆道狭窄瘢痕组织中的表达及相关性研究

目的观察原癌基因c-myc,c-fos蛋白在良性胆道狭窄瘢痕组织中的表达和分布,探讨其与良性胆道狭窄形成的相关性。方法应用免疫组化SP法,检测c-myc,c-fos蛋白在20例肝外胆管瘢痕组织、12例肝内胆管瘢痕组织和10例正常胆管组织中的表达和分布。对其阳性表达结果进行比较分析。结果在肝外胆管瘢痕组织和肝内胆管瘢痕组织的成纤维细胞、胆管上皮细胞及血管内皮细胞中c-myc,c-fos呈强阳性表达,而正常胆管组织中无表达。肝外、肝内胆管瘢痕组织中c-myc,c-fos的表达与正常胆管组织差异有显著性意义(P<0.01),肝外与肝内胆管瘢痕组织中c-myc,c-fos的表达差异无显著性意义(P>0.05)。在肝外胆管瘢痕组中c-myc与c-fos蛋白两者的表达成正相关(r=0.75,P<0.05)。在肝内胆管瘢痕组中c-myc与c-fos蛋白两者的表达亦成正相关(r=0.68,P<0.05)。结论肝外、肝内胆管瘢痕组织中c-myc和c-fos癌基因受激活,可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与降解以及对细胞因子的调控,并导致瘢痕增生。原癌基因c-myc,c-fos与良性胆道狭窄瘢痕形成密切相关,两者具有协同性。

17β羟基类固醇脱氢酶13和线粒体融合蛋白2在肝细胞癌组织中的表达变化及生物信息学分析

目的探索17β羟基类固醇脱氢酶13(HSD17B13)和线粒体融合蛋白2(MFN2)在临床肝细胞癌(以下简称肝癌)组织样本中的表达变化及临床意义;同时采用生物信息学方法,进行目标基因分析。方法选取2017年9月-2018年3月于福建省立医院接受手术治疗的15例肝癌患者,手术后获取肝癌及其周围癌组织进行实验研究。通过实时荧光定量PCR及Western Blot法检测HSD17B13和MFN2基因在肝癌组织和癌旁组织中的表达变化情况,并分析其临床意义。采用单细胞测序数据库、GTEx数据库及TCGA数据库分析HSD17B13和MFN2在肝癌组织中的表达量、肝癌不同分期的表达水平及与肝癌总体生存的关系,并分析二者之间的相关性。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。采用log-rank检验变量对生存率的影响,Kaplan-Meier法绘制生存曲线。采用Pearson相关分析检验两个变量之间的关系。结果实时荧光定量PCR及Western Blot检测结果显示,相对于癌旁组织,HSD17B13和MFN2基因在肝癌组织中的表达明显下调(PCR检测t值分别为-2.467、-3.933,P值分别为0.020、0.001;Western Blot检测t值分别为-5.357、-5.771,P值分别为0.006、0.026)。生物信息学分析结果表明,肝癌组织中HSD17B13表达明显下调(P<0.05);随着肝癌分期越高,HSD17B13表达水平越低(F=3.220,P=0.023);低HSD17B13表达与不良生存相关(风险比=0.630,P=0.011);在肝癌组织中,MFN2与HSD17B13表达呈显著正相关(r=0.190,P<0.001)。结论MFN2与HSD17B13在肝癌中表达下调,是潜在的具有临床相关性的抑癌基因,可能参与肝癌发生发展过程中的生物学行为,也可成为肝癌筛查、临床分级、预后评估的分子标志物及有效的肝癌治疗靶点。

小细胞肺癌组织中c-kit蛋白的表达及其原癌基因的检测

目的:探讨c-kit蛋白在小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)组织中的表达及c-kit原癌基因第9和11号外显子突变状态,及其与临床病理特点之间的关系。方法:采用免疫组化方法检测13例手术切除SCLC组织标本中c-kit蛋白的表达,并用PCR扩增和基因测序的方法检测其第9和11号外显子序列。结果:c-kit蛋白的阳性表达率为69·2%(9/13)。13例SCLC组织中,1例(7·7%)c-kit基因9号外显子突变,5例(38·5%)c-kit基因11号外显子突变。突变方式有点突变和插入突变。结论:c-kit蛋白表达与SCLC发生发展密切相关,c-kit原癌基因第9和11号外显子均检测到突变,为临床靶向治疗SCLC提供依据。

人卵巢癌顺铂耐药细胞中核糖体蛋白基因的表达谱分析

目的研究核糖体蛋白基因在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达。方法以顺铂为诱导剂,采用中等剂量、间歇作用法建立人卵巢癌顺铂耐药细胞系COC_1／DDP,然后以其亲本细胞COC_1为对照,应用cDNA微阵列检测COC_1／DDP细胞的核糖体蛋白基因表达。结果与COC_1细胞相比,COC_1／DDP细胞对顺铂有6．2倍耐药性,细胞倍增时间延长了8．9h,S期细胞减少了(27．4±2．13)％,而G_1和G_2期细胞分别增加了(19．6±3．71)％和(8．3±1．95)％。在143个表达水平发生改变的基因中,有12个核糖体蛋白基因表达下调,多个凋亡抑制基因表达上调,凋亡诱导基因CASP2表达下调。结论 COC_1／DDP细胞对顺铂具有耐药性,耐药性的产生可能与部分核糖体蛋白基因的表达下调有关。

喉癌中原癌基因c-met蛋白的表达

目的:研究原癌基因c-met蛋白在人类喉癌组织中的表达,探讨c-met的蛋白表达与喉癌的临床病理特征之间的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测80例人类喉癌组织标本及60例声带小结、息肉中c-met的蛋白表达,并行统计学分析。结果:原癌基因c-met蛋白在声带小结、息肉中的表达率为10％,在喉癌组织中的表达率为65％;c-met蛋白的表达与喉癌的临床分期、病理学分级、淋巴结转移均显著相关(P<0．01)。结论:原癌基因c-met蛋白在喉癌组织中高表达且与喉癌淋巴结转移、病理学分期、组织分级密切相关。

人蛋白质二硫键异构酶活性片段基因的克隆及序列测定

目的:获取人蛋白质二硫键异构酶活性片段(hPDIf)基因,并进行序列测定,为今后研究其机理及应用创造条件.方法:从人胎肝组织中用反转录PCR方法扩增hPDTf活性片段基因,重组入pUC19质粒载体,用双脱氧法双向测定目的基因序列.结果:从人胎肝组织中成功地扩增到hPDIf基因,测出的序列与已知基因序列一致.结论:构建了hPDIf基因的重组克隆,为以后的深入研究奠定了基础.

胃癌伴神经内分泌分化HER-2基因扩增和蛋白表达及预后分析

目的观察胃癌伴神经内分泌分化(NED)和胃癌中HER-2基因扩增及蛋白表达情况。方法回顾性分析胃癌伴神经内分泌分化患者70例和具有相同分期的胃癌患者150例,采用免疫组化法(IHC)联合双色银染色素原位杂交(DISH)检测胃癌伴NED和胃癌中HER-2基因扩增和蛋白表达情况,并对胃癌伴NED进行预后分析。结果胃癌伴NED和胃癌中HER-2蛋白过表达率分别为20.00%和21.33%,HER-2基因扩增率分别为8.57%和14.67%。HER-2蛋白表达、HER-2基因扩增及基因扩增类型2组间差异均无统计学意义;胃癌伴NED17号染色体多体与HER-2基因扩增呈正相关。胃癌伴NED患者中HER-2基因扩增者术后生存期短于HER基因不扩增者。多因素分析显示胃癌伴或不伴NED、HER-2基因是否扩增、淋巴结转移和手术方式是预后的独立影响因素。结论胃癌伴NED属于胃癌特殊类型,其HER-2基因扩增、蛋白表达情况和胃癌相同,HER-2基因扩增的胃癌伴NED患者预后差。

山羊原癌基因c-fos电子克隆与生物信息学分析

为探明山羊原癌基因c-fos的结构与功能,以牛c-fos基因编码序列(GenBank登录号为AY322482)作为种子序列电子克隆了山羊c-fos基因cDNA序列,并利用生物信息学方法对其完整编码序列的蛋白理化特征、二级结构、亲/疏水性进行全面解析,进一步预测了该基因在山羊染色体上的定位。结果表明,山羊c-fos基因cDNA全长1 513 bp,开放阅读框为1 143 bp,共编码380个氨基酸,G+C含量高于A+T;山羊c-fos基因编码蛋白二级结构主要以无规则卷曲为主,其他为α-螺旋,延伸直链较少,属于一种亲水性、酸性不稳定蛋白;山羊与同属反刍动物的绵羊、牛和马鹿c-fos基因核苷酸序列相似性为95.4%~99.5%;c-fos基因可能定位于山羊10号染色体上。山羊c-fos基因电子克隆及序列分析为解析其调控肌肉发育的生理功能提供了详尽的生物学基础信息。

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR、K-Ras和BRAF基因突变的分子病理检测分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中EGFR、K-Ras和BRAF基因各亚型突变情况。方法应用直接测序方法检测550例NSCLC石蜡组织中EGFR基因、K-Ras基因和BRAF基因突变情况。结果 NSCLC肿瘤组织中EGFR基因总突变率为37.09%(204/550),外显子18、19、20和21的突变率分别为1.45%(8/550)、21.09%(116/550)、3.64%(20/550)和11.09%(61/550);EGFR基因各外显子之间双重突变共13例(2.36%),EGFR基因各外显子内双重突变共12例(2.18%)。K-Ras基因总突变率为2.00%(11/550)。BRAF基因总突变率为0.36%(2/550)。结论 NSCLC患者中EGFR基因存在较高的突变率,尤其为19和21外显子突变,其基因突变亚型分类能指导EGFR-TKI的肿瘤靶向治疗,K-Ras和BRAF基因突变率虽低但不容忽视。