人剪切修复基因XPD对肝癌细胞P53和Ets-1基因的作用

目的探讨人剪切修复基因XPD对肝癌细胞P53和Ets-1基因的影响。方法使用脂质体瞬时转染技术,将pEGFP-N2-XPD重组质粒转染至肝癌细胞HepG2,24 h后加入20μmol/L的P53抑制剂Pifithrin-α,孵育24 h,并以未经转染的HepG2细胞作为空白对照。RT-PCR、Western blot检测细胞中XPD、P53、phosphoP53(ser-15)、Ets-1的mRNA和蛋白的表达变化,MTT法观察细胞增殖的活力,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果与空白对照比较,转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后,HepG2细胞XPD、P53 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),而Ets-1 mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),加入Pifithrin-α后,XPD、P53 mRNA和蛋白表达下调,Ets-1mRNA和蛋白表达上调(P<0.01)。转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后,HepG2细胞进入S期发生阻滞,停滞在G1期(P<0.01),加入Pifithrin-α后,HepG2细胞G1期细胞减少,S期细胞增多(P<0.01)。转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后,HepG2细胞增殖活力下降(P<0.01),加入Pifithrin-α后,HepG2细胞增殖活力上升(P<0.01)。结论野生型XPD基因在转染至肝癌HepG2细胞后,可以上调P53的表达,通过P53途径抑制Ets-1的表达,促使肝癌细胞凋亡。

大肠癌Ets-1基因mRNA定量表达研究

目的:探讨原癌基因Ets-1的表达与大肠癌生物学行为的关系。方法:应用实时荧光定量PCR技术分别检测30例大肠癌组织及切端组织中Ets-1 mRNA转录水平。结果:全部大肠癌组织中可见Ets-1的阳性表达。大肠癌组织Ets-1 mRNA转录水平明显高于切端组织(P<0.05)。Ets-1的表达与大肠癌的淋巴结转移、浸润深度和Dukes分期明显相关,差异具有显著性(P<0.05)。而与大肠癌的病理组织学类型和分化程度无关,差异无显著性(P>0.05)。结论:Ets-1在大肠癌的侵袭与转移中发挥着重要作用。检测Ets-1的表达可作为判断大肠癌浸润、转移的良好参考指标。并可为将来大肠癌的诊断、分期和治疗开辟一个新的方向。

人剪切修复基因XPD对人肝癌SMMC-7721细胞中Ets-1和Cdk6基因的调控作用

目的:观察野生型人剪切修复基因XPD转染入人肝癌细胞SMMC-7721后,细胞内Ets-1和Cdk6基因的表达变化及对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响。方法:将人工合成的pEGFP-N2-XPD重组质粒通过Lipofectamine 2000TM转染SMMC-7721细胞。设重组质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD(XPD)组、空载质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2(N2)组、脂质体组、无转染空白对照组。分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因mRNA和蛋白质的表达量,并用流式细胞仪检测细胞周期变化,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测各组细胞的增殖活力。结果:XPD组中的XPD的mRNA和蛋白质表达较其他3组明显增高(P<0.001),而Ets-1、Cdk6 mRNA和蛋白质表达较其他3组明显减少(P<0.001)。转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后细胞停滞在G1期,难于进入S期。转染了野生型XPD的SMMC-7721细胞增殖能力减弱。结论:XPD基因可能通过抑制Ets-1、Cdk6基因的表达影响肝癌细胞的生长。

10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因通过炎症参与心肌重构的研究进展

心肌重构是心脏遭受损伤,如压力负荷、缺血、容量负荷等出现的一系列结构和功能变化,在组织水平可表现为心肌肥厚、心肌纤维化,在细胞水平可表现为心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞增殖和转分化、心肌炎性细胞浸润。心肌重构合并心功能不全患者5年内病死率约为50%,死亡原因大多归于心肌重构或心力衰竭[1]。因此,对于心肌重构相关机制的基础研究仍是研究热点和难点。研究认为,炎症与病理性心肌重构密切相关[2]。Ridker等[3]研究证实,使用白细胞介素(interleukin,IL)-1β阻断剂可降低冠心病患者因心力衰竭住院的比例。另外,促炎性消退介质减少中性粒细胞浸润,降低T细胞产生的促炎细胞因子TNF-α、IL-6水平,激活修复细胞因子IL-10,并刺激巨噬细胞的吞噬活性。

泛癌中CBLL1的差异表达、预后及其免疫细胞浸润的相关性分析

分析m6A甲基转移酶Cbl原癌基因E3泛素蛋白连接酶样1基因(Hakai,CBLL1)在泛癌中的表达及对肿瘤微环境的影响。方法 从tcga的癌症基因组图谱数据库中获取了多种不同的癌症病例,并利用生物信息学技术研究了CBLL1基因在不同类型的肿瘤中的表现以及其对预后的影响。探讨CBLL1在肿瘤微环境相关细胞浸润方面的影响。结果 CBLL1基因在大多数恶性肿瘤中表达上调,导致了直肠癌、肾透明细胞癌患者远期总生存率及无进展生存期延长;肾上腺皮质癌、膀胱尿路上皮癌及头颈癌患者远期PFS更短。在直肠癌、肾透明细胞癌、膀胱尿路上皮癌和头颈癌中,CBLL1的表达水平与多种免疫细胞浸润水平及抑制性免疫检查点基因的表达水平相关(P<0.05)。结论 CBLL1基因表达水平上调与直肠癌、肾透明细胞癌、膀胱尿路上皮癌和头颈癌的不良预后相关,可能通过抑制免疫浸润及增加抑制性免疫检查点基因的表达水平发挥作用。

原癌基因Bmi-1的研究进展

原癌基因Bmi-1属于转录抑制因子基因polycomb家族,通过抑制ink4a位点的表达及调节端粒酶的活性控制细胞的增殖和衰老。Bmi-1基因对成体干细胞及白血病干细胞的自我更新是必需的。最近发现,Bmi-1基因在血液系统恶性肿瘤及多种实体瘤中表达异常,有望成为肿瘤治疗的新靶点。

乳腺浸润性癌中E2F1和P16蛋白的表达及意义

目的探讨转录因子E2F1和P16蛋白在乳腺浸润性癌中的表达及其对乳腺癌发生、发展及预后评估的意义,并为乳腺癌的靶向治疗提供一定的依据。方法采用免疫组织化学方法检测61例乳腺浸润性癌、49例导管内乳头状瘤及58例乳腺增生组织中E2F1和P16蛋白的表达情况。结果 E2F1在乳腺浸润性癌、导管内乳头状瘤及乳腺增生组织中的阳性率分别为78.7%、12.2%和1.7%,前者与后二者分别比较差异有统计学意义(P<0.05);P16在乳腺浸润性癌、导管内乳头状瘤及乳腺增生组织中的阳性率分别为34.4%、57.1%和70.7%,前者与后二者分别比较差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织中E2F1和P16阳性表达与患者年龄及肿瘤TNM分期差异无统计学意义(P>0.05),与淋巴结转移及组织学分级差异有统计学意义(P<0.05),E2F1和P16蛋白在癌组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,呈显著负相关性(r=-0.297,P<0.05)。结论 E2F1、P16蛋白可能参与了乳腺癌的发生和发展,E2F1蛋白的阳性表达与P16失表达可能是患者预后差的指标,二者联合检测更有利于评估预后,同时可为乳腺癌新的生物靶向治疗提供依据。

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR、K-Ras和BRAF基因突变的分子病理检测分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中EGFR、K-Ras和BRAF基因各亚型突变情况。方法应用直接测序方法检测550例NSCLC石蜡组织中EGFR基因、K-Ras基因和BRAF基因突变情况。结果 NSCLC肿瘤组织中EGFR基因总突变率为37.09%(204/550),外显子18、19、20和21的突变率分别为1.45%(8/550)、21.09%(116/550)、3.64%(20/550)和11.09%(61/550);EGFR基因各外显子之间双重突变共13例(2.36%),EGFR基因各外显子内双重突变共12例(2.18%)。K-Ras基因总突变率为2.00%(11/550)。BRAF基因总突变率为0.36%(2/550)。结论 NSCLC患者中EGFR基因存在较高的突变率,尤其为19和21外显子突变,其基因突变亚型分类能指导EGFR-TKI的肿瘤靶向治疗,K-Ras和BRAF基因突变率虽低但不容忽视。

c-myc、HIF-1α和VEGF在高海拔地区乳腺癌的表达及临床意义

目的探讨高海拔地区乳腺癌及乳腺良性病变中c-myc、HIF-1α、VEGF的表达与转移及预后的关系。方法应用免疫组化Elivision plus法,测定60例乳腺癌和20例乳腺良性病变中c-myc、HIF-1α、VEGF的表达。结果60例乳腺癌组织中c-myc、HIF-1α、VEGF阳性表达率分别为55.0%、51.7%、63.3%,与乳腺良性病变比较,差异有统计学意义(P<0.01)。c-myc的阳性表达与年龄、淋巴结转移有关(P<0.05)。HIF-1α、VEGF的阳性表达与组织学分级、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。HIF-1α、VEGF的表达呈正相关(r=0.371;P<0.01),与c-myc蛋白表达呈正相关(r=0.332;P<0.01),c-myc、VEGF的表达呈正相关(r=0.369;P<0.01)。结论c-myc、HIF-1α、VEGF在乳腺癌中的高表达与乳腺癌淋巴结转移密切相关。c-myc、HIF-1α、VEGF在促进乳腺癌淋巴结转移中可能起协同作用,联合检测乳腺癌中c-myc、HIF-1α、VEGF的表达,有利于更好地评估乳腺癌的生物学行为,提高对患者预后判断的准确性,指导个体化治疗。

MACC1及c-Met在前列腺癌组织中的表达

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)及肝细胞生长因子受体(c-Met)在前列腺癌中的表达及其与前列腺癌发展、浸润和转移的关系。方法采用枸椽酸-微波-SP免疫组织化学染色法检测67例前列腺癌组织及30例前列腺增生(BPH)组织中MACC1和c-Met的表达情况,并结合临床病理因素进行相关分析。结果 MACC1及c-Met表达水平在前列腺癌组织中不同Gleason分级、病理分级、前列腺特异性抗原(PSA)水平及根治术后是否发生骨转移方面差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而不同年龄,是否吸烟的表达水平差异无统计学意义;且Ⅲ期和Ⅳ期前列腺癌中MACCl的高表达率明显高于BPH(P<0.05),c-Met蛋白高表达率仅在Ⅳ期前列腺癌高于BPH(P<0.05)。前列腺癌中MACC1与c-Met的表达呈正相关(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线表明前列腺癌组织中MACC1及c-Met高表达较低表达无骨转移生存时间短且生存率低。结论 MACC1和c-Met的异常高表达可能与前列腺癌的发展及浸润密切相关,且预示骨转移的发生,可能成为多种恶性肿瘤判断预后、诱导转移的预测指标。

甲状腺乳头状癌中D2-40、EGFR和VEGF的表达及BRAF基因突变

目的探讨甲状腺乳头状癌中D2-40、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达与鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1,BRAF)基因突变及其临床意义。方法选取87例甲状腺乳头状癌和48例甲状腺乳头状增生手术切除标本,应用扩增阻碍突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)及免疫组织化学法检测甲状腺乳头状癌和乳头状增生中BRAF基因突变情况和D2-40、EGFR及VEGF蛋白表达情况。结果甲状腺乳头状癌中BRAF基因突变率与D2-40、EGFR和VEGF蛋白阳性表达率均高于甲状腺乳头状增生(均P<0.05)。甲状腺乳头状癌有淋巴结转移组BRAF基因突变率和D2-40、EGFR及VEGF蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移组(均P<0.05)。结论 BRAF突变检测联合D2-40、EGFR及VEGF检测可以提高甲状腺乳头状癌的确诊率,并可能是预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移与否的重要指标。

胃腺癌微环境caveolin-1的表达及其临床意义

背景:肿瘤的发生、发展是肿瘤微环境中肿瘤实质与间质成分共同作用的结果。目前仅少数研究探讨胃癌微环境小窝蛋白-1(caveolin-1)的表达情况、目的:探讨胃腺癌微环境caveolin-1的表达及其临床意义。方法:收集外科胃腺癌手术切除标本72例,32例正常胃窦黏膜组织作为对照,以免疫组化法检测实质和间质中的caveolin-1和原癌基因蛋白c-myc表达,分析胃癌实质caveolin-1表达与c-myc以及主要肿瘤临床病理特征的相关性。随机选取7例冰冻标本,激光捕获显微切割(LCM)技术获取纯净胃癌和癌旁组织实质和间质细胞,蛋白质印迹法检测caveolin-1和c-myc表达并行相关性分析。结果:常规标本中,胃癌实质和间质caveolin-1高表达率分别显著低于正常胃黏膜实质和间质(P<0.05):胃癌实质高表达c-myc,并与caveolin-1呈正相关(r=0.312,P<0.05)胃癌实质caveolin-1高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈负相关(P<0.05)。LCM标本中,胃癌实质和间质caveolin-1表达分别显著低于相应癌旁组织实质和间质(P<0.05)。caveolin-1与c-myc在胃癌实质中的表达呈正相关(r=0.752,P<0.05),在胃癌间质中的表达呈负相关(r=-0.975,P<0.05)。结论:胃腺癌微环境低表达caveolin-1。胃癌实质caveolin-1高表达与肿瘤浸润、转移、临床进展呈负相关。c-myc可能通过不同机制调节胃癌实质和间质中的caveolin-1表达。胃癌间质caveolin-1低表达有望为胃癌预后判断提供依据。

PIM-1基因沉默对前列腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨RNA干扰(RNAi)沉默PIM-1基因表达对前列腺癌细胞体外生长的影响。方法:将RNAi重组质粒(PPIM1-shRNA-3)经脂质体介导转染前列腺癌PC-3细胞,用G418筛选稳定转染、PIM-1基因沉默的PC-3细胞。用空质粒载体(pRNAT-U6.1/Neo)稳定转染的PC-3细胞和正常培养的PC-3细胞作为对照,进行体外研究。利用细胞计数法分别检测3组PC-3细胞的增殖能力。利用流式细胞技术分别检测3组PC-3细胞的细胞周期及凋亡情况。结果:与两对照组PC-3细胞相比,PIM-1基因沉默组的PC-3细胞在培养48、72和96h的细胞计数显著减少(P<0.01),细胞周期中G1期细胞的比例显著升高,而S期细胞的比例显著降低(P<0.01),发生早期凋亡的细胞比例明显升高(P<0.01)。结论:PIM-1基因沉默可以使得PC-3细胞的细胞周期进程受阻,抑制细胞增殖,并诱发细胞凋亡。PIM-1可以作为前列腺癌基因治疗的有效靶点,具有潜在的临床应用价值。

核转录因子E2F-1和p27在大肠癌中的表达及意义

目的探讨E2F-1和p27在大肠腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测78例大肠癌、20例正常大肠黏膜和30例大肠腺瘤E2F-1和p27的表达情况。结果 E2F-1在大肠癌中的阳性率显著高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤(P<0.05)。E2F-1表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。p27在正常大肠黏膜的阳性率明显高于大肠腺瘤和大肠癌。p27表达与大肠癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。结论 E2F-1和p27的表达与大肠癌发生关系密切,可以作为肠癌发生、发展的生物学标志物。

食管上皮癌变过程中cyclin E和p21^(WAF1)的表达及其意义

目的 研究细胞周期调控因子 cyclin E和 p2 1WAF1 基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义。方法 应用免疫组化 S- P方法和原位杂交方法分别检测 4 8例食管癌组织和相应癌旁组织 (正常黏膜 17例 ,非典型增生组织 31例 )中 cyclin E和 p2 1WAF1 蛋白及 m RNA表达。结果 从食管正常黏膜到非典型增生组织和癌组织 ,cy-clin E蛋白和 m RNA阳性表达率皆呈逐渐升高的趋势 ,食管癌组织和癌旁组织之间差异有显著性。高分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于其它各组 ,m RNA阳性表达率显著高于正常黏膜和非典型增生 级。 p2 1WAF 1 蛋白及m RNA在癌旁组织和癌组织中表达皆较高 ,两者差异无显著性。cyclin E和 p2 1W AF 1 基因表达无显著相关性。结论 食管癌变过程中 ,细胞周期蛋白 cyclin E表达水平增高 ,和组织分化程度显著相关 ,其异常是食管癌变过程中的早期事件 ,可能作为食管高分化鳞癌的诊断标志物之一。p2 1WAF 1 基因在食管癌组织中高表达 ,可能与细胞周期调控的反馈机制有关。

镉应答新基因TEF-1δ的生物学功能研究

目的 探讨镉应答新基因TEF 1δ在细胞转化和致癌过程中的重要作用。方法 应用细胞转染、WesternBlot以及细胞转化等技术与方法 ,对克隆化基因TEF 1δ的生物学功能进行研究。结果 TEF 1δcDNA以pcDNA 3 1 V5 His TOPO为表达载体所转染的CHO细胞和猴肾COS1细胞均可表达相对分子质量为 3 10 0 0的TEF 1δ编码蛋白质 ,而非转染和单纯载体转染的对照细胞则无此蛋白质表达。进一步研究表明 ,TEF 1δcDNA转染NIH3T3细胞可导致TEF 1δ蛋白质超额表达 ,并与细胞转化密切相关。结论 镉的细胞转化和致癌作用至少部分因TEF 1δ基因的高表达所致。TEF 1δ可能是一个新发现的镉应答原癌基因。

MSK1和RSK2介导的组蛋白磷酸化对人结直肠癌细胞恶性表型的影响

背景:ERK-MAPK信号通路与消化系肿瘤的发生、发展密切相关。前期研究发现抑制ERK-MAPK信号转导可能通过抑制其下游效应分子MSK1、RSK2活性而降低组蛋白H3磷酸化水平,进而下调原癌蛋白c-fos表达,抑制人结直肠癌细胞增殖。目的:探讨MSK1、RSK2与组蛋白磷酸化对人结直肠癌细胞肿瘤相关基因表达和恶性表型的影响。方法:以不同浓度ERK-MAPK阻断剂U0126干预人结肠癌细胞株HCT1 16和SW11 16,或以RNA干扰技术靶向沉默细胞中的MSK1、RSK2表达,分别采用CCK-8实验、流式细胞分析和蛋白质印迹法检测经不同处理的肿瘤细胞的增殖情况、细胞周期分布以及MSK1、RSK2磷酸化位点、组蛋白H3磷酸化水平和MSK1、RSK2、c-fos蛋白表达。结果:U0126能阻断人结直肠癌细胞MSK1(Thr581)、RSK2(Ser386)的磷酸化活化,转染MSK1 siRNA或RSK2 siRNA能特异性抑制MSK1、RSK2表达,导致组蛋白H3(Set10)磷酸化水平降低,c-fos蛋白表达下调,肿瘤细胞发生G0/G1期阻滞,细胞增殖显著受抑(P均<0.05)。结论:阻断ERK-MAPK信号转导可能通过抑制MSK1(Thr581)、RSK2(Ser386)磷酸化活化及其介导的组蛋白H3磷酸化而下调肿瘤相关基因如c-fos表达,从而抑制人结直肠癌细胞的恶性表型。

Pim-1在结核性胸膜炎和肺癌胸膜组织中的表达及临床意义

目的探讨Pim-1在结核性胸膜炎及在肺癌患者胸膜组织中的表达及临床意义。方法收集我院2021年1月-2021年11月内科胸腔镜手术切除的结核性胸膜炎及肺癌的胸膜活检标本共41例,其中结核性胸膜炎21例,肺癌20例。利用免疫组织化学法和Western-Blot法分别测定胸膜组织中Pim-1蛋白的表达情况,同时探寻与Pim-1表达有关的临床因素。结果Pim-1在结核性胸膜炎组中的阳性率为95.24%(20/21),在肺癌组中的阳性率为70%(12/20),结核性胸膜炎胸膜组织Pim-1表达水平更高(P<0.001);Western-Blot结果显示Pim-1在结核性胸膜炎中表达水平也高于肺癌组(P<0.01);结核组Pim-1蛋白表达与性别、吸烟史、BMI指数均无明显相关性(P>0.05),肺癌组中Pim-1蛋白表达与性别、吸烟史、BMI指数均无明显相关性(P>0.05),可能与淋巴结转移有关(P<0.01)。结论结核性胸膜炎胸膜组织中的Pim-1表达较高,检测胸膜组织中Pim-1对结核性胸膜炎和肺癌有鉴别诊断价值。