原癌基因A-myb对大鼠精原干细胞活性的影响

目的研究原癌基因A-myb在体外培养的9日龄大鼠精原干细胞活性中的作用。方法用不连续密度的Percoll液结合差速贴壁方法分离和纯化精原干细胞;用RT-PCR检测A-myb mRNA的表达;用Western blot检测A-myb表达产物A-myb的表达;用MTT比色法观察反义A-myb脱氧寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)对精原干细胞作用的量效及时效关系。结果分离提取的细胞基本上为精原干细胞。与空白对照组相比,10μmol.L-1反义A-myb ODNs作用48h后精原干细胞内A-myb mRNA表达下降了47.8%(P<0.05),A-myb蛋白下降了51.7%(P<0.05)。5、10、20μmol.L-1反义A-myb ODNs组与0μmol.L-1组在作用细胞48h后相比,精原干细胞的活性分别下降11.8%(P<0.05)、50.1%(P<0.01)、53.8%(P<0.01)。与空白对照组相比,10μmol.L-1反义A-myb ODNs组作用12、24、48、72h后精原干细胞活性分别下降18.8%(P<0.05)、30.0%(P<0.01)、38.6%(P<0.01)、41.0%(P<0.01),而正义A-myb ODNs组和空白对照组相比无明显差异。结论原癌基因A-myb可调节大鼠精原干细胞的活性。