原癌基因c—Met在子宫内膜癌中表达的研究

目的 研究原癌基因c—Met在子宫内膜癌中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学SP的方法，研究50例子宫内膜癌组织及20例正常子宫内膜组织中原癌基因c—Met的表达。结果 子宫内膜癌中c—Met阳性表达率高于正常子宫内膜（P〈0．05），且与组织分级、肌层浸润深度、临床分期显著相关（P〈0．05）。结论c—Met的过表达在子宫内膜癌变中起重要作用，促进了子宫内膜癌的发生和发展，对判断子宫内膜癌的恶性程度有较重要价值。

喉癌中原癌基因c-met蛋白的表达

目的:研究原癌基因c-met蛋白在人类喉癌组织中的表达,探讨c-met的蛋白表达与喉癌的临床病理特征之间的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测80例人类喉癌组织标本及60例声带小结、息肉中c-met的蛋白表达,并行统计学分析。结果:原癌基因c-met蛋白在声带小结、息肉中的表达率为10％,在喉癌组织中的表达率为65％;c-met蛋白的表达与喉癌的临床分期、病理学分级、淋巴结转移均显著相关(P<0．01)。结论:原癌基因c-met蛋白在喉癌组织中高表达且与喉癌淋巴结转移、病理学分期、组织分级密切相关。

c-met、EGF及其受体在外阴鳞癌中的表达及意义

目的:通过检测原癌基因c met、表皮生长因子(EGF)和EGF受体(EGFR)在正常外阴皮肤,外阴上皮内瘤变(VIN)和外阴鳞状细胞癌(VSCC)中的表达,探讨其在外阴癌变中的作用。方法:应用免疫组化SABC法进行检测。c met,EGF和EGFR的表达与外阴肿瘤的临床病理特征相比较。结果:c met在80%VSCC和20%VINⅢ中表达(P<0.05)。EGF在100%VSCC和VINⅢ以及20%VINI,Ⅱ中表达。EGFR在67%VSCC和40%的VINⅢ中表达(P<0.05)。c met更强表达于高分化型的VSCC中,与中/低分化型差异显著(P<0.05)。结论:EGF,c met是外阴癌变的早期事件。

c-Met和TIMP-2在喉癌中的表达及其意义

目的检测c-Met、TIMP-2蛋白在喉鳞状细胞癌(简称喉癌)及癌旁组织中的表达水平,研究两者表达与临床、病理参数的关系,探讨两者在喉癌侵袭、转移过程中的作用及其两者的相互关系。方法选取喉癌患者41例,另选癌旁组织15例作为对照,采用免疫组织化学方法(SP法)检测c-Met、TIMP-2的表达。结果c-Met、TIMP-2蛋白在喉癌组织中的阳性率分别为56.1%(23/41)及63.4%(26/41)。c-Met蛋白在癌旁组织中的阳性率为13.3%(2/15),TIMP-2蛋白在癌旁组织为阴性。结论c-Met与喉癌颈淋巴结转移及病理分级有关;TIMP-2与喉癌的颈淋巴结转移有关;c-Met与TIMP-2在喉癌中的表达无相关性。

肝细胞癌组织C-met的表达与临床意义

目的:探讨肝细胞癌组织中C-met的表达及其临床意义。方法:对37例肝细胞癌病例定期随访,确定患者复发转移情况,并采用免疫组织化学检测肝细胞癌组织中C-met的表达。另选择9例正常肝组织和9例肝硬化组织作为对照。结果:肝细胞癌组织中C-met的表达阳性率(64.9%)均显著高于正常对照组。在肝细胞癌病例中,C-met在门静脉癌栓组的表达阳性率(91.7%)显著高于无癌栓组(52.0%),在1年内有复发转移组的表达阳性率(86.9%)显著高于1年内无复发转移组(28.6%)。kaplan meier生存曲线提示:C-met高表达组的肝细胞癌术后的平均复发时间明显低于C-met低表达组和阴性组。结论:肝细胞癌组织中C-met呈高表达,C-met的表达与肝细胞癌的早期复发有关。

c—Met蛋白在老年结肠癌患者组织中的表达及其意义

【目的】探讨c—Met蛋白在老年结肠癌患者组织中的表达及其意义。【方法】采用免疫组化法检测49例老年人结肠癌组织、33例非老年人结肠癌组织及82例癌旁组织中c—Met蛋白的表达，并分析其与老年、非老年患者临床病理特征的相关性。【结果】c—Met蛋白在老年人结肠癌组织和非老年人结肠癌组织中的阳性表达率分别为75．5％、63．6％，均明显高于癌旁组织（20．7％），差异有统计学意义（P〈0．05）。老年人结肠癌中，不同性别和不同淋巴结转移状况患者中c—Met蛋白表达比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；在不同肿瘤大小、不同组织学类型、不同分化程度、不同临床分期的患者中，c—Met蛋白表达比较无统计学差异（P〉0．05）；非老年人结肠癌中，在不同性别的患者中c—Met蛋白有统计学差异（P〈0．05）；在不同肿瘤大小、不同组织学类型、不同分化程度、不同临床分期及不同淋巴结转移状况的患者中，c-Met蛋白表达均无统计学差异（P〉0．05）。【结论】c—Met表达上调可能是结肠癌发生、发展的重要因素；c-Met在老年人和非老年人结肠癌组织中的表达有差异。

TPO mRNA和HGF/c-Met在甲状腺良恶性结节中的表达及意义

目的探讨甲状腺过氧化物酶(TPO)mRNA和肝细胞生长因子及其受体蛋白(HGF/c-Met)在良恶性甲状腺结节中的表达及意义。方法应用逆转录聚合酶链反应技术检测55例甲状腺结节新鲜标本的TPO mRNA丰度,采用免疫组织化学法检测600例甲状腺结节石蜡标本HGF/c-Met的表达。结果甲状腺癌HGF/c-Met表达率显著高于甲状腺良性结节,乳头状癌高于滤泡型癌(P<0.01)。甲状腺恶性结节TPOmRNA的阳性表达率显著低于甲状腺良性病变。结论HGF/c-Met和TPO的联合检测在良恶性甲状腺病变的鉴别中有一定应用价值。

携带c-Met短发夹结构重组腺相关病毒的包装及滴度测定

目的:包装带有人U6启动子及c-Met短发夹环的重组腺相关病毒,为抑制c-Met的表达及进行肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法:通过PCR方法将带有c-Met短发夹结构的片段构建至人U6启动子下游,将U6shMet构建至腺相关病毒载体质粒pSNAV中,将pSNAVUshMet转染BHK细胞,经G418筛选后加辅毒rHSV1-repcap包装成携带U6shMet的重组腺相关病毒。SDS-PAGE电泳分析病毒纯度,斑点杂交测定病毒滴度。结果:获得了2段带有c-Met短发夹结构的片段U6shMet1和U6shMet2,成功包装了2个带有U6shMet序列的重组腺相关病毒rAAVUshMet1和rAAVUshMet2,纯化后的病毒电泳分析条带清晰、杂带少,病毒滴度均为4×1012mg.L-1。结论:成功构建了带有U6shMet的重组腺相关病毒rAAVUshMet,病毒纯度好、滴度高,为抑制c-Met的表达及进行肿瘤基因治疗提供了运载工具。

30例鼻腔恶性乳头状瘤HGF及其受体c-Met的表达分析

目的探讨鼻腔恶性肿瘤肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及其受体c-Met的表达阳性率以及二者的表达分布。方法选择2005年1月—2010年12月确诊为鼻腔恶性乳头瘤患者30例,以同期确定为鼻息肉28例和慢性肥厚性鼻炎18例为对照组,对手术切除组织采用免疫组织化学方法 SP法检测HGF、c-Met的表达,统计其染色得分,计算2组的中位数并进行比较。结果 2组的HGF和c-Met染色得分均为偏态分布,鼻息肉和慢性肥厚性鼻炎的HGF、c-Met得分都≤240分,鼻腔恶性乳头瘤二者表达得分都高于301分,且分布集中程度较良性鼻腔增生组织高。良、恶性组织HGF、c-Met的得分值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 HGF和c-Met共同高表达或单独的高表达都与鼻腔恶性乳头状瘤的发生有关。设计针对HGF和c-Met治疗措施可能对恶性乳头状瘤的治疗起到有利作用。

非小细胞肺癌中肝细胞生长因子受体蛋白表达及其与肿瘤细胞增殖、血管生成的关系

目的:检测肝细胞生长因子受体(cMet)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨其与肿瘤细胞增殖和血管形成的关系。方法:运用免疫组织化学SP法对14例正常肺组织和45例NSCLC组织中的cMet、核增殖相关抗原Ki67进行检测。用CD34单克隆抗体检测微血管密度(MVD)。结果:正常肺组织cMet表达率为21.4%(3/14),而在NSCLC中为60.0%(27/45),其在肿瘤和正常组织中的表达差异有显著性(P<0.05)。cMet的表达与组织学类型、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、性别和临床分期均无关。cMet阳性表达组的Ki67指数和MVD明显高于cMet表达阴性组(P<0.01,P<0.05),cMet的表达与Ki67指数和MVD有关。结论:cMet的表达与NSCLC的增殖和血管形成密切相关,可作为诊断和判断预后的一个指标。

c-met基因和趋化因子受体4的表达与大肠癌肝转移的关系

目的探讨c-met基因和趋化因子受体4(CXCR4)在癌旁正常组织、大肠腺瘤、大肠癌组织中的表达及其与大肠癌发生、发展和肝转移的关系。方法回顾性对15例癌旁正常组织、15例大肠腺瘤及48例大肠癌组织采用EliVisionTM plus免疫组织化学方法检测c-met和CXCR4的表达水平,分析二者相关性及其与肝转移等临床病理因素的关系。结果 c-met和CXCR4在癌旁正常组织及大肠腺瘤中的表达均低于大肠癌组织,癌旁正常组织与大肠腺瘤之间差异无统计学意义,c-met和CXCR4在大肠肝转移组的表达高于无肝转移组,并与淋巴结转移及大肠癌Duke分期有关,与年龄、性别、部位及分化程度无关,c-met和CXCR4在大肠癌的表达有显著相关性。结论 c-met和CXCR4的表达存在相关性,与大肠癌的发生、发展和肝转移有关。

c-Met在有、无肝转移结直肠癌组织中的表达差异

目的:探讨肝细胞生长因子受体(c-Met)在有、无肝转移结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:用real-time PCR法和Western-blot法分别对48例肝转移结直肠癌组织和48例无肝转移结直肠癌组织c-Met基因和蛋白表达进行检测,并分析c-Met的表达与各临床病理因素间的关系。结果:肝转移结直肠癌组织中c-Met表达在mRNA和蛋白水平均明显高于无肝转移结直肠癌组织,差异均有统计学意义(均P<0.05);c-Met的mRNA水平和蛋白水平均与临床分期、淋巴结转移密切相关(均P<0.05),而与性别、年龄、组织分化程度及肿瘤部位无关(均P>0.05)。结论:c-Met的高表达与结直肠癌肝转移有关,检测c-Met的表达对预测结直肠癌肝转移可能具有重要价值。

RNA干扰抑制c—Met表达对喉癌Hep-2细胞体内外生长的影响

目的采用RNA干扰（RNAi）技术抑制人喉癌Hep-2细胞c—Met基因表达，观察对其体外生物学活性和体内生长的影响。方法构建能够表达针对c—Met的小干扰RNA的RNAi质粒和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒，采用阳离子脂质体Lipofectamine2000作为转染试剂将其转染人喉癌细胞株Hep-2，通过RT—PCR及Western Blot方法检测转染效率，筛选出抑制效果最好的c—Met—siRNA序列；通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、运动实验及侵袭实验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力。在裸鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟c—Met—siRNA基因治疗实验中，采用Western Blot法检测重组质粒对c—Met基因及MMP-9、VEGF基因表达的影响。结果pSilencer2．0／c—Met—shRNA转染人喉癌细胞株Hep-2后，c—Met的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P值分别为0．003和0．02），细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制（P值分别为0．001，0．004和0．004）。肿瘤接种到裸鼠后第35天，重组质粒组肿瘤体积为（138±27）mm^3，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；重组质粒组瘤体内c—Met、MMP-9、VEGF基因表达率比对照组明显降低（P〈0．05）。结论c—Met—siRNA能成功下调靶基因的表达，并能显著抑制喉癌Hep-2细胞的生长、运动、侵袭及移植裸鼠成瘤后的生长，siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性c—Met治疗的新策略。

肝细胞生长因子及其受体c—met在非小细胞肺癌中的表达及其与淋巴管生成的关系’

目的检测肝细胞生长因子（HGF）及其受体c-met在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达，探讨其与NSCLC淋巴管生成的关系。方法采用免疫组织化学法检测HGF及其受体c—met在113例NSCLC癌组织中的表达水平；应用D2—40进行淋巴管染色，计数微淋巴管密度（LMVD）；分析HGF及其受体c-met与LMVD之间的关系。结果HGF及c-met阳性染色主要位于NSCLC癌细胞的胞膜和胞质中，阳性表达率明显高于正常肺组织（67．3％、74．3％与20．0％、25．0％）（u值分别为4．008、4．342，均P〈0．05）。HGF、c—met的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度均无关，而与TNM分期、淋巴结转移有关。HGF和c．met阳性表达的NSCLC患者较阴性者有更高的LMVD（HGF：16．3051±5．3753比10．9934±4．9668，t=4．58，P〈0．05；c—met：15．6692±5．5386比11．3700±5．3875，t=3．97，P〈0．05）。结论HGF及其受体c-met在NSCLC中高表达并与LMVD及淋巴结转移密切相关，提示HGF及其受体c-met在NSCLC淋巴管生成及淋巴转移方面起重要作用，为临床肺癌的诊断、防治和新药开发提供了新的靶向目标。

胰腺星状细胞通过HGF／c—Met信号通路调控胰腺癌的侵袭转移

目的探讨胰腺星状细胞（PSCs）调控胰腺癌的迁移和侵袭转移机制。方法检测PSCs培养上清液中肝细胞生长因子（HGF）蛋白的含量。应用PSCs上清液、PSCs上清液加HGF中和抗体或加c—Met特异性抑制剂PHA-665752分别处理人胰腺癌细胞株AsPC-1细胞，以不加PSCs上清液细胞作为对照组，采用MTF法检测AsPC-1细胞的增殖，Transwell小室检测细胞迁移能力，体外侵袭实验观察细胞侵袭能力。结果PSCs上清液中HGF蛋白含量为（4213±543）ng／L。PSCs上清液组、PSCs上清液＋HGF中和抗体组、PSCs上清液＋c—Met抑制剂组及对照组细胞增殖的A。值分别为0．628±0．030、0．324±0．021、0．347±0．054及0．405±0．008，穿膜细胞数分别为（123．3±6．8）、（62．4±6．9）、（58．1±2．2）、（36．6±4．8）／400倍视野，侵袭细胞数分别为（70．0±2．3）、（42．5±4．6）、（42．7±2．8）、（36．4±3．5）／400倍视野。PSCs上清液组细胞增殖、穿膜及侵袭能力较对照组显著升高，PSCs上清液＋HGF中和抗体组及PSCs上清液＋c—Met抑制剂组细胞增殖、穿膜及侵袭能力较PSCs上清液组显著下降，差异均有统计学意义（P值均〈0．01），而PSCs上清液＋HGF中和抗体组与PSCs上清液＋c—Met抑制剂组之间的细胞增殖、穿膜及侵袭能力差异无统计学意义（P值均〉0．05）。结论PSCs可能是通过HGF／c—Met信号通路从而调控胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

MACC1和C—MET蛋白在肝细胞癌组织中的表达研究

目的探讨MACC1和C—MET蛋白在肝细胞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化和Western blot检测51例肝细胞癌组织、相应癌旁组织和13例正常肝脏组织中MACC1和C—MET蛋白的表达情况，同时对患者进行随访，并分析患者生存率与临床病理资料间的关系。结果MACC1和C—MET蛋白在肝细胞癌组织中总的阳性表达率分别为80．4％和76．5％，相对表达量分别为0．645±0．047和0．504±0．023，均明显高于相应癌旁组织及正常肝脏组织（分别F=173．308，252．817，均P=0．000），且两者表达呈正相关（r=0．870，P=0．001）；MACC1和C—MET蛋白表达阳性患者的3年生存率明显低于阴性患者（分别Х^2=3．934，4．439，均P〈0．05），两者的阳性率及表达量均与肝细胞癌的TNM分期、门脉癌栓、病理分型及包膜侵犯显著相关（P〈0．05）。结论MACC1和C—MET的异常表达与肝细胞癌的恶性进展相关，MACC1有作为进展期肝癌预后的独立分子指标和肝癌治疗新靶点的潜在价值。

c—met及HnRNPA2／B1mRNA在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨肝细胞生长因子受体c—met及异质性胞核核糖核蛋白HnRNPA2／B1在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其与病理临床的关系。方法选取手术切除的46例NSCLC组织标本和30例正常肺组织标本，采用半定量RT—PCR法检测c—met、HnRNPA2／B1基因的转录表达情况，并结合临床资料进行分析。结果在NSCLC组中，c—met及HnRNPA2／B1的mRNA阳性率（65．2％比26．7％，60．9％比20．0％）及相对表达量[（0．903±0．04）比（0．205±0．06），（0．162±0．04）比（0．096±0．02）]均明显高于对照组，两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。这两种标志物联合检测的阳性率高于单一标志物检测，差异有统计学意义（P〈0．01）。同时，c—met、HnRNPA2／B1基因mRNA表达情况与临床分级和病理N分期相关（P〈0．05），而与患者年龄、性别及病理类型等不相关（P〉0．05）。结论c—met及HnRNPA2／B1在NSCLC中高表达，检测这两种标志物对临床分期有一定的指示作用，联合检测能显著提高NSCLC诊断的敏感度。两种基因的表达突变可能与NSCLC的发生、发展有关。

结直肠癌组织c-Met表达与肿瘤芽殖的临床意义

目的探讨c—Met和肿瘤芽殖在结直肠癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化方法检测组织芯片75例结直肠癌癌组织及配对癌旁正常结肠组织中c—Met的表达。结果结直肠癌与正常结肠黏膜组织中c—Met阳性表达率分别为88．0％和33．3％，二者免疫评分均数表达比较差异有统计学意义[（6．76±3．12）分VS（2．04±3．15）分，P〈0．05]；c-Met与肿瘤芽殖、淋巴结转移和TNM分期呈正相关（r=0．759，0．534，0．462，P〈0．01）。结论c—Met在结直肠癌中的表达与肿瘤芽殖形成密切相关，其参与了结直肠癌的发生及发展。

肺动脉高压大鼠肺组织肝细胞生长因子和c—met表达的变化

目的观察肺动脉高压大鼠肺内肝细胞生长因子（HGF）及其受体（c—met）表达的变化。方法雄性SD大鼠80只，7周龄，体重180—250g，采用随机数字表法，将其随机分为2组（n=40）：对照组（c组）和肺动脉高压组（PH组）。PH组经左侧开胸行左肺切除术，手术结束后关胸，待自主呼吸恢复后拔除气管导管，2周后颈部皮下注射野百合碱60mg／kg，制备肺动脉高压模型；C组仅开胸，2周后颈部皮下注射等容量生理盐水。分别于注射野百合碱前1d（基础值）、注射野百合碱后7、14、21和28d时，各取8只大鼠，监测肺动脉压（mPAP），计算右心室与左心室＋室间隔质量比[RV／（LV＋s）]，计算肌型肺小动脉血管中膜相对厚度（RWT，和RWT2分别表示直径为50～100um和100—150um的血管中膜相对厚度）。采用RT-PCR法检测肺组织HGFmRNA和c-metmRNA的表达，采用Westem blot法检测肺组织HGF蛋白和c—met蛋白的表达，采用ELISA法检测肺组织转化生长因子-β（TGF-β）含量。结果与c组比较，PH组注射野百合碱后14、21和28d时mPAP、RV／（LV＋S）和RwL升高，HGF蛋白表达下调，注射野百合碱后7、14、21和28d时RWT1升高，肺组织HGFmRNA表达下调，TGF-β含量升高（P〈0．01），c-met mRNA及其蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肺组织HGF合成不足可能参与了肺动脉高压的形成，其机制与肺组织TGF—β含量升高有关。

肝细胞生长因子及其受体与神经纤毛蛋白1在骨肉瘤中的表达及意义

目的检测骨肉瘤组织中肝细胞生长因子(HGF)、肝细胞生长因子受体(C-met)和神经纤毛蛋白1(NRP1)的表达特征,探讨三者的关系及临床意义。方法选择70例骨肉瘤术后留取的蜡块及临床资料作为观察组,选择50例成熟的骨组织脱钙后的蜡块及临床资料作为对照组,应免疫组织化学技术检测2组中HGF、C-met和NRP1蛋白的表达,探讨HGF、C-met和NRP1在肿瘤患者不同临床病理特征的表达差别及其相关性。结果观察组中HGF、C-met和NRP1蛋白表达的阳性率明显高于对照组,观察组中HGF、C-met和NRP1蛋白表达的阳性率与肿瘤的转移、脉管浸润、临床分期及Ki67的表达密切相关。观察组中HGF、C-met和NRP1之间的表达具有正相关性。结论骨肉瘤组织中HGF、C-met和NRP1高表达,三者对病变的进展具有重要作用,术后联合检测HGF、C-met和NRP1的表达可能对判断预后有一定价值。