原癌基因ras在玉米中同源序列的检出及其荧光原位杂交定位

原癌基因ｒａｓ是动物中抑制细胞凋亡的重要基因之一。以人的ｒａｓ基因为探针，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术，确证玉米和水稻中均含有ｒａｓ基因的同源序列；同时，运用荧光原位杂交技术，首次对ｒａｓ基因在玉米中的同源序列进行了定位。结果表明：ｒａｓ探针在第２号和第７号染色体上均检出了杂交信号，信号检出率分别为１０．８５％和１４．１５％，杂交信号与着丝粒的百分距离分别为 ５４．９２± １．９０和 ９４．６２± ２．７７。上述研究结果为植物细胞凋亡的进一步研究提供了线索和帮助。

MEDLINE数据库(1982～1998年)中原癌基因ras的主题词分析

利用MEDLINE光盘检索原癌基因ras专题文献,分析比较ras基因的主题词和副主题词,对该专题的研究发展做了分析预测。

活血祛痰法对高血压左心室肥厚大鼠心肌ras原癌基因表达的影响

目的 :探讨活血祛痰治法对原发性高血压左室肥厚大鼠 (SHR)心肌ras原癌基因表达的影响。方法 :以正常Wistar大鼠为对照组 ,将SHR分为 14周龄组、2 8周龄组、中药治疗组和西药治疗组 ,分别在 14周和 2 8周取材 ,用半定量逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定各组大鼠心肌N rasmRNA的含量。结果 :SHR各组N ras癌基因表达水平明显高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,且随着SHR病程延长呈上升趋势 ;中药或西药治疗能降低该趋势 (P <0 .0 5 ) ,中药组和西药组疗效无统计学差异。结论 :ras癌基因在心肌肥厚形成、发展过程中起着一定的作用 ,中医活血祛痰治法可逆转心肌肥厚 。

Ras原癌基因的功能与表达调控

广泛分布于真核细胞的ras基因编码的P_(21)蛋白具有G蛋白相似的特性,偶联受体和效应系统传递跨膜信号对细胞增殖和分化起双重调节作用。ras原癌基因突变激活,P_(21)蛋白出现质和量的改变,易引起细胞转化形成肿瘤。ras原癌基因的表达受到基因组内外多种因素的影响,某些生物活性因子及核苷酸类似物从不同途径不同层次影响基因表达。

瘢痕疙瘩组织中c-myc、ras原癌基因的表达

目的探讨c-myc、ras原癌基因表达与瘢痕疙瘩形成的关系。方法应用免疫组织化学方法检测c-myc、ras p21蛋白在30例瘢痕疙瘩组织和26例正常皮肤组织中的表达和分布。结果c-myc蛋白在瘢痕疙瘩成纤维细胞中呈强阳性表达,与正常皮肤对照组相比,差异有显著性(P<0.001),在瘢痕疙瘩的成纤维细胞中,ras p21蛋白缺乏表达。结论瘢痕疙瘩中c-myc蛋白表达升高提示c-myc原癌基因的激活,c-myc原癌基因可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与降解以及对细胞因子的调控,并导致瘢痕增生;ras原癌基因在瘢痕疙瘩形成中可能不突变或不起主要调控作用,这可能是瘢痕疙瘩较少癌变的原因。

PCR-SSCP在恶性血液病N-ras癌基因点突变检测中的应用

目的：检测血液系统肿瘤中Ｎ－ｒａｓ癌基因点突变的活性。方法：采用ＰＣＲＳＳＣＰ技术分析了２８例恶性血液病Ｎｒａｓ基因的突变活性，包括：ＡＮＬＬ６例，ＡＬＬ１２例，ＨＤ２例，ＮＨＬ３例，ＭＤＳ５例。结果：２８例中ＰＣＲＳＳＣＰ检测与正常对照，发生阳性者４例（１４．６％），其中ＡＬＬ１例（８．３％）、ＡＮＬＬ１例（１６．６％）、ＭＤＳ２例（４０％）。４例中有２例临床缓解后持续阳性，１例为ＡＬＬ患者，于骨髓移植后１０４ｄ复发死亡。１例ＭＤＳ患者转化为急性白血病，另２例临床缓解后３个月检测转阴，其中１例为ＡＮＬＬ，１例为ＭＤＳ。结论：ＰＣＲＳＳＣＰ方法可作为一种癌基因点突变检测手段常规应用于临床，但值得注意的是，ＰＣＲＳＳＣＰ方法只能提供分析区域是否存在突变点。

EGFR、Ras蛋白在大肠癌及其癌前组织中的表达及临床意义

目的探讨在大肠癌发生过程中EGFR、Ras蛋白表达及其与大肠癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测115例大肠癌、36例大肠腺瘤、43例正常大肠黏膜中EGFR和Ras的蛋白表达,并分析两者与大肠癌临床病理特征的关系。结果大肠癌、大肠腺瘤与正常大肠黏膜组EGFR蛋白的阳性表达率分别为62.61%(72/115)、30.56%(11/36)与12.77%(6/47),三组间差异有统计学意义(P<0.05);Ras蛋白的阳性表达率分别为46.09%(53/115)、38.89%(14/36)与10.63%(5/47),前两者明显高于后者(P<0.05)。其中在大肠癌浸润深度达黏膜下层和肌层、浆膜下层及侵透浆膜层组EGFR蛋白阳性表达率分别为36.84%(7/19)、67.09%(53/79)与70.59%(12/17),后两者明显高于前者(P<0.05);在低分化癌与高中分化癌组中Ras蛋白的阳性表达率分别为59.52%(25/42)与38.36%(28/73),两者差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示EGFR与Ras在大肠癌组织中表达呈正相关(r=0.354,P<0.05)。结论 EGFR蛋白表达与大肠癌组织浸润深度相关,而Ras蛋白表达与肿瘤的分化程度相关,联合检测两基因有助于大肠癌的诊断及预后评估。

胰腺癌组织中p21ras蛋白表达与微血管密度的关系及其临床意义

目的检测胰腺癌组织中p21ras蛋白的表达及微血管密度(MVD)计数,探讨两者的关系及其临床意义。方法选择病理证实为胰腺导管腺癌的48例患者的石蜡切块标本,应用EnVision显色系统免疫组织化学方法进行p21ras蛋白检测和MVD计数。结果p21ras蛋白表达率胰腺癌组织为60·41%,癌旁组织为37·5%(P<0·05)。MVD计数p21ras表达阳性组为22·207±5·815,p21ras阴性组为18·053±5·502(t=3·597,P<0·01)。结论胰腺癌组织中p21ras的表达与MVD计数相关,提示ras基因突变可能促进肿瘤微血管的形成。

p21^(Ha-ras)原核表达载体的构建、表达及纯化的研究

目的:构建PET-28a(+)-Ha-ras原核表达质粒,并表达、纯化得到p21ras蛋白,为研究p21ras在肿瘤发病中的作用和机制以及p21ras细胞内抗体抗肿瘤的研究奠定基础。方法:培养人肝癌细胞株7703,提取总RNA,通过RT-PCR特异扩增出Ha-ras cDNA,然后应用TA克隆策略将纯化后的Ha-ras插入至中间载体pMD18-T vector中得到重组质粒PMD-18T vector-ras,重组质粒PMD-18Tv ector-Ha-ras经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后纯化回收得到具有黏性末端的Ha-ras cDNA,将PET-28a(+)同样经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后纯化回收得到与ras cDNA相同的黏性末端的线形质粒片段,将具有黏性末端的ras cDNA与酶切后的PET-28a(+)定向连接,构建出重组质粒PET-28a(+)-Ha-ras,经酶切鉴定,并通过核苷酸序列测序证实。将鉴定正确的PET-28a(+)-Ha-ras转入感受态BL-21(DE3)中诱导表达,利用组氨酸"标签"(His-Tag)对p21ras进行金属螯合亲和层析纯化。结果:测序分析证实,克隆入PET-28a(+)的Ha-ras序列与Genbank登录号为"NM_005343"的Ha-ras cDNA序列一致,将重组质粒PET-28a(+)-Ha-ras转化BL21(DE3),用IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAG和蛋白纯化结果表明,PET-28a(+)-Ha-Ras在E.coli中获得可溶性高表达,经Ni-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了PAGE纯的p21ras蛋白。结论:成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-Ha-ras,并经表达、纯化得到活性形式的p21ras蛋白,从而为研究p21ras在肿瘤发病中的作用和机制以及P21ras细胞内抗体抗肿瘤的研究奠定了基础。

p21ras和VEGF在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测胰腺癌组织中的p21ras和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况,并探讨其与肿瘤临床病理因素的关系。方法选择48例病理证实为胰腺导管腺癌患者的手术切除石蜡切块标本,应用EnVision显色系统免疫组织化学方法进行p21ras和VEGF蛋白检测。结果胰腺癌组织中p21ras蛋白表达率为60·4%,其表达与胰腺癌患者年龄、性别、组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移及肿瘤分期无明显关系;VEGF蛋白表达率为64·6%,其表达与肿瘤大小及TNM分期有关。p21ras表达阳性组的VEGF表达明显高于其阴性组(P<0·05)。结论p21ras和VEGF在胰腺癌组织中均呈高表达,p21ras表达与VEGF蛋白表达有相关性,提示K-ras基因突变可上调VEGF表达。

MRAS基因多态性与急性心肌梗死及Syntax评分的相关性分析

目的分析肌RAS原癌基因同源基因(MRAS) rs3755751位点多态性与急性心肌梗死(AMI)及Syntax评分的关系。方法选择2006年6月—2015年12月常州市武进人民医院心内科AMI患者248例作为研究对象,采用病例—对照研究,应用基因测序方法检测AMI患者248例(AMI组)和非冠心病者310例(对照组)的MRAS基因rs3755751位点多态性。采用Syntax评分软件进行Syntax评分。结果 AMI组CC、CT和TT基因型频率与对照组比较,差异无统计学意义(χ~2=4. 231,P=0. 121)。进一步构建效应模型,CC vs.(CT+TT)和TT vs.(CT+CC),AMI组与对照组基因型差异无统计学意义(P=0. 056和0. 934)。进一步多元Logistic回归显示,在调整其他危险因素后,CC基因型与AMI无显著性关联(P=0. 796)。CC基因型组Syntax评分明显低于CT及TT基因型组(CC vs.CT:P=0. 006; CC vs. TT:P=0. 007),而CT与TT 2组间Syntax评分无显著性差异(P=0. 167)。结论 MRAS基因rs3755751位点多态性与AMI发病无显著性关联,但AMI患者CC基因型的Syntax评分明显低于CT和TT基因型。

氧自由基对胃癌细胞MGC-803的P53、P21ras蛋白表达的影响

目的:观察氧自由基对人胃癌细胞系MGC-803细胞的P53、P21ras蛋白表达的影响,探讨氧自由基在胃癌发生发展中的作用。方法:通过细胞培养、采用硫代巴比妥酸反应物质法检测细胞内氧自由基中间产物丙二醛(MDA)的含量,应用免疫组织化学技术检测MGC-803细胞内不同浓度的氧自由基对P53、P21ras蛋白表达的影响。结果:氧自由基含量升高可增强MGC-803细胞内P53、P21ras蛋白表达(P<0.01),氧自由基水平降低则P53、P21ras蛋白表达减弱(P<0.01)。结论:胃癌细胞系MGC-803内氧自由基水平的改变可影响其P53、P21ras蛋白表达。

睾丸精原细胞瘤中p27^(kip1)、p21^(ras)、p16的表达及其临床意义

目的 探讨 p2 7kip1、p2 1ras、p16在精原细胞瘤中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化 S- P法检测 4 6例精原细胞瘤组织、10例正常睾丸组织 p2 7kip1、p2 1ras、p16蛋白的表达情况。同时用 PCR法检测 2 7例精原细胞瘤组织 p16和 p2 1基因的缺失情况。结果 p2 7kip1在精原细胞瘤组织中的阳性表达率为 4 8.9% (2 2 / 4 5 ) ,显著低于正常睾丸组织的 90 .0 % (P<0 .0 5 ) ,p2 7kip1蛋白在精原细胞瘤组织中的阳性表达与淋巴结和远处器官转移相关 (P<0 .0 5 ) ,与组织学分型无关 ;p2 1ras、p16蛋白在精原细胞瘤组织中的阳性表达率分别为 4 2 .2 % (19/ 4 5 )和 6 0 .0 % (2 7/4 5 ) ,与正常睾丸组织比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 p16、p2 1ras蛋白在精原细胞瘤组织中的表达与组织学类型及淋巴结转移无相关性 (P>0 .0 5 )。p2 1基因无纯合子缺失。p16基因纯合子缺失率为 4 4 .4 % (12 / 2 7) ,其缺失率与精原细胞瘤的组织学类型、淋巴结和远处器官转移无关。p2 7kip1、p2 1ras及 p16阳性表达率之间有相关性 (P<0 .0 5 )。结论 p2 7kip1蛋白的低表达或缺失可能与精原细胞瘤的发生、浸润转移有关 ,可作为估计精原细胞瘤预后的良好指标。 p16基因的缺失和表达下降可能是精原细胞瘤发生的早期事件。

大鼠肝癌发生过程中癌基因和抑癌基因的表达

探讨癌基因ras和抑癌基因P5 3蛋白在实验性肝癌发生中的表达与内在联系。方法 应用原位杂交和免疫组织化学 (SABC)法 ,在 38例化学致癌剂二乙基亚硝胺 (DENA)诱发大鼠原发性肝细胞癌及癌前增殖结节中 ,观察P5 3蛋白和ras家族基因 (N ras,H ras,Ki ras)蛋白表达。结果 化学诱癌生成为 6 8.42 % (2 6 / 38) ,癌前增生性病例为 31.5 8% (12 / 38)。在癌与增生性病变中ras基因蛋白高表达分别为 88.46 % (2 3/ 2 6 )和 75 % (9/ 12 ) ,两组无显著差异(P >0 .0 5 ) ,但与癌的恶性分化程度密切相关 (P <0 .0 1)。在增生性病灶中未检出P5 3蛋白的表达 ,在癌中P5 3蛋白表达阳性率为 46 .15 % (12 / 2 6 ) ,但与ras蛋白表达无显著相关性 (P >0 .0 5 )。结论 ras基因是肝癌转化较早的分子改变 ;癌前嗜碱性增生性结节和不典型增生性腺瘤结节具有较高的恶化潜能 ;ras和P5

华支睾吸虫Rap2B样基因的生物信息学分析及其克隆、表达

目的从华支睾吸虫cDNA文库中筛选Rap2B样基因并分析其结构和功能,初步进行克隆和表达纯化,为进一步研究其功能奠定基础。方法利用多种生物信息学分析软件,分析华支睾吸虫Rap2B蛋白的拓扑学结构、生物学和免疫学功能特征。设计引物,从华支睾cDNA质粒文库中扩增目的基因cDNA序列,构建原核重组质粒并初步表达纯化。结果华支睾吸虫Rap2B样基因长度为847bp,其全长编码序列为426bp,编码141个氨基酸,理论分子量是15851.1。重组的原核表达质粒pET-28a(+)-Rap2B经PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒构建成功。该基因在大肠杆菌中能高效表达。经His亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白,Western blotting证实Rap2B重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别。结论华支睾吸虫Rap2B蛋白经生物信息学预测为ras原癌基因家族成员,可能在华支睾吸虫致癌过程中有一定作用。该基因可在原核表达系统中高效表达,并得到了纯化的重组蛋白,为进一步研究该蛋白的功能以及在致病尤其是可能促发肿瘤的作用方面奠定一定基础。

PTEN、p21基因在新疆哈萨克族食管癌中的表达

目的研究PTEN、p21基因在哈萨克族食管癌中的表达。方法采用RT-PCR法检测PTEN、p21基因在48例哈萨克族食管癌组织及远端无癌组织中的表达,并分析其表达与肿瘤分化、TNM分期、临床分期、淋巴结转移的关系。结果 PTEN基因在癌组织和远端无癌组织中的表达阳性率分别为75%、45.8%,癌组织高于远端无癌组织(χ2=8.537,P<0.05);p21基因在癌组织和远端无癌组织中表达的阳性率分别为95.8%、97.9%,差异无统计学意义(χ2=0.344,P>0.05)。PTEN和p21表达与食管癌分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移均无相关性。结论 PTEN、p21基因可能均不是哈萨克族食管癌的主要致病基因。

P21基因rsi059234位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌发病风险相关性

【目的】研究 p21基因 rs1059234位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌之间的相关性。【方法】通过测序及PCR-RFLP方法，对263例子宫内膜癌患者（观察组）及315例健康人群（对照组）的外周血DNA的 p21基因 rs1059234位点进行基因型分型，并分析分型与子宫内膜癌之间的相关性。【结果】观察组中 rs1059234位点C等位基因频率较对照组明显升高（P ＝0．039）。rs1059234位点 CC基因型频率在观察组中与对照组相比呈明显升高趋势（0．335vs 0．219，P＝0．045），CC基因型增加子宫内膜癌的风险（OR＝1．589，95％ CI：1．010～2．502），但是经回归分析校正后，CC 基因型并不增加子宫内膜癌的风险（OR＝1．623，95％ CI：0．720～3．659，P＝0．243）。【结论】在东北地区汉族女性中，p21基因 rs1059234位点的多态性与子宫内膜癌的发生风险无明显关联。

甲状腺乳头状癌p53基因突变及其与p21^(WAF1/CIP1)蛋白定量表达的关系

目的 初步探讨甲状腺乳头状癌 (PTC)中 p5 3基因突变及其与 p2 1WAF1 /CIP1 蛋白定量表达的关系。 方法 采用 PCR- SSCP、DNA序列分析、免疫组织化学、图像分析等技术 ,检测 4 1例 PTC和 10例甲状腺滤泡性腺瘤标本组织中 p5 3基因突变情况和 p2 1蛋白染色状况。 结果 (1)伴 p5 3基因突变 ( 组 )和不伴突变 ( 组 ) PTC的原发肿瘤 (T)、淋巴结转移 (N)及远处转移 (M)差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 (2 ) 、 和 之间 , 和 、 和 、 和 的平均积分光密度值 (D)差异具有显著性意义 (P<0 .0 1)。 结论 (1) PTC的演进和 p5 3基因突变与否无直接关系 ,p5 3蛋白的空间构象可能发挥关键作用。 (2 )在 PTC的发生、发展中存在依赖野生型 p5 3蛋白诱导P2 1WAF 1

凋亡与增殖及其调控基因表达在直肠癌术前放疗前后的对比研究

目的 :通过检测直肠癌术前放疗患者放疗前后凋亡、增殖指数以及凋亡调控基因表达的变化 ,探讨直肠癌自发性凋亡及放射性凋亡的可能调控机制。方法 :分析 2 3例接受术前放疗的直肠癌患者的临床资料。采用TUNEL法观察放疗前活检标本及放疗后手术切除标本的细胞凋亡情况。免疫组化方法检测所取标本的p5 3、p2 1、PCNA、bcl 2、bax等表达情况。结果 :放疗前活检标本中凋亡指数为 2 8± 1 4,而放疗后标本中凋亡指数为 4 9± 1 3 ,P <0 0 1。放疗后p5 3、p2 1、bcl 2、PCNA染色阳性率较放疗前均下降 ,而bax表达阳性率由放疗前的 3 4 8%上升到放疗后的 65 2 % ,但差异均无统计学意义 ,P >0 0 5。在放疗前活检标本中 ,p5 3 ( -)p2 1( +)组的凋亡指数为 4 2± 1 0 ,高于p5 3 ( +)p2 1( -)组的 2 3± 0 6,P <0 0 5。放疗后手术标本中 ,p5 3 ( -)p2 1( +)组的凋亡指数为 5 8± 1 5 ,高于p5 3 ( +)p2 1( -)组的 4 3±0 6,P <0 0 5。结论 :在直肠癌组织的自发凋亡和放射性凋亡过程中 ,p5 3 /p2 1途径均起到了关键作用 ,bax也可能起到一定的作用。