氧自由基对胃癌细胞MGC-803的P53、P21ras蛋白表达的影响

目的:观察氧自由基对人胃癌细胞系MGC-803细胞的P53、P21ras蛋白表达的影响,探讨氧自由基在胃癌发生发展中的作用。方法:通过细胞培养、采用硫代巴比妥酸反应物质法检测细胞内氧自由基中间产物丙二醛(MDA)的含量,应用免疫组织化学技术检测MGC-803细胞内不同浓度的氧自由基对P53、P21ras蛋白表达的影响。结果:氧自由基含量升高可增强MGC-803细胞内P53、P21ras蛋白表达(P<0.01),氧自由基水平降低则P53、P21ras蛋白表达减弱(P<0.01)。结论:胃癌细胞系MGC-803内氧自由基水平的改变可影响其P53、P21ras蛋白表达。

胰腺癌组织中p21ras蛋白表达与微血管密度的关系及其临床意义

目的检测胰腺癌组织中p21ras蛋白的表达及微血管密度(MVD)计数,探讨两者的关系及其临床意义。方法选择病理证实为胰腺导管腺癌的48例患者的石蜡切块标本,应用EnVision显色系统免疫组织化学方法进行p21ras蛋白检测和MVD计数。结果p21ras蛋白表达率胰腺癌组织为60·41%,癌旁组织为37·5%(P<0·05)。MVD计数p21ras表达阳性组为22·207±5·815,p21ras阴性组为18·053±5·502(t=3·597,P<0·01)。结论胰腺癌组织中p21ras的表达与MVD计数相关,提示ras基因突变可能促进肿瘤微血管的形成。

洛伐他汀对NB4细胞ras基因p21^(Ras)膜结合作用影响的体外试验

目的 :探讨洛伐他汀 (LOV)对人白血病NB4细胞的作用及其机制。方法 :以MTT比色法首先观察LOV对NB4细胞增殖的影响 ;利用逆转录 -聚合酶链反应半定量测定LOV作用于NB4细胞不同时间H -ras、K -ras、N -ras癌基因mRNA表达水平 ;同时采用流式细胞术测定NB4细胞p2 1Ras总蛋白、膜蛋白的表达。结果 :①LOV抑制NB4细胞增殖 ,IC5 0为 12 5 9μmol/L。②NB4细胞H、K、N -ras基因表达均为阳性。③LOV处理不同时间的NB4细胞H、K、N -ras基因转录水平无明显变化 ;p2 1Ras总蛋白水平也无变化 ,而细胞膜表面p2 1Ras蛋白水平随时间进行性下降。结论 :LOV抑制NB4细胞增殖。LOV靶向HMG -CoA还原酶 ,抑制p2 1Ras蛋白异戊二烯化、阻滞p2 1Ras蛋白与细胞膜结合 ;不影响ras癌基因以及p2 1Ras总蛋白的表达。

p21^(Ha-ras)原核表达载体的构建、表达及纯化的研究

目的:构建PET-28a(+)-Ha-ras原核表达质粒,并表达、纯化得到p21ras蛋白,为研究p21ras在肿瘤发病中的作用和机制以及p21ras细胞内抗体抗肿瘤的研究奠定基础。方法:培养人肝癌细胞株7703,提取总RNA,通过RT-PCR特异扩增出Ha-ras cDNA,然后应用TA克隆策略将纯化后的Ha-ras插入至中间载体pMD18-T vector中得到重组质粒PMD-18T vector-ras,重组质粒PMD-18Tv ector-Ha-ras经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后纯化回收得到具有黏性末端的Ha-ras cDNA,将PET-28a(+)同样经过BamHⅠ和HindⅢ双酶切后纯化回收得到与ras cDNA相同的黏性末端的线形质粒片段,将具有黏性末端的ras cDNA与酶切后的PET-28a(+)定向连接,构建出重组质粒PET-28a(+)-Ha-ras,经酶切鉴定,并通过核苷酸序列测序证实。将鉴定正确的PET-28a(+)-Ha-ras转入感受态BL-21(DE3)中诱导表达,利用组氨酸"标签"(His-Tag)对p21ras进行金属螯合亲和层析纯化。结果:测序分析证实,克隆入PET-28a(+)的Ha-ras序列与Genbank登录号为"NM_005343"的Ha-ras cDNA序列一致,将重组质粒PET-28a(+)-Ha-ras转化BL21(DE3),用IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAG和蛋白纯化结果表明,PET-28a(+)-Ha-Ras在E.coli中获得可溶性高表达,经Ni-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了PAGE纯的p21ras蛋白。结论:成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-Ha-ras,并经表达、纯化得到活性形式的p21ras蛋白,从而为研究p21ras在肿瘤发病中的作用和机制以及P21ras细胞内抗体抗肿瘤的研究奠定了基础。

PTEN、p21基因在新疆哈萨克族食管癌中的表达

目的研究PTEN、p21基因在哈萨克族食管癌中的表达。方法采用RT-PCR法检测PTEN、p21基因在48例哈萨克族食管癌组织及远端无癌组织中的表达,并分析其表达与肿瘤分化、TNM分期、临床分期、淋巴结转移的关系。结果 PTEN基因在癌组织和远端无癌组织中的表达阳性率分别为75%、45.8%,癌组织高于远端无癌组织(χ2=8.537,P<0.05);p21基因在癌组织和远端无癌组织中表达的阳性率分别为95.8%、97.9%,差异无统计学意义(χ2=0.344,P>0.05)。PTEN和p21表达与食管癌分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移均无相关性。结论 PTEN、p21基因可能均不是哈萨克族食管癌的主要致病基因。

甲状腺乳头状癌p53基因突变及其与p21^(WAF1/CIP1)蛋白定量表达的关系

目的 初步探讨甲状腺乳头状癌 (PTC)中 p5 3基因突变及其与 p2 1WAF1 /CIP1 蛋白定量表达的关系。 方法 采用 PCR- SSCP、DNA序列分析、免疫组织化学、图像分析等技术 ,检测 4 1例 PTC和 10例甲状腺滤泡性腺瘤标本组织中 p5 3基因突变情况和 p2 1蛋白染色状况。 结果 (1)伴 p5 3基因突变 ( 组 )和不伴突变 ( 组 ) PTC的原发肿瘤 (T)、淋巴结转移 (N)及远处转移 (M)差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 (2 ) 、 和 之间 , 和 、 和 、 和 的平均积分光密度值 (D)差异具有显著性意义 (P<0 .0 1)。 结论 (1) PTC的演进和 p5 3基因突变与否无直接关系 ,p5 3蛋白的空间构象可能发挥关键作用。 (2 )在 PTC的发生、发展中存在依赖野生型 p5 3蛋白诱导P2 1WAF 1

睾丸精原细胞瘤中p27^(kip1)、p21^(ras)、p16的表达及其临床意义

目的 探讨 p2 7kip1、p2 1ras、p16在精原细胞瘤中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化 S- P法检测 4 6例精原细胞瘤组织、10例正常睾丸组织 p2 7kip1、p2 1ras、p16蛋白的表达情况。同时用 PCR法检测 2 7例精原细胞瘤组织 p16和 p2 1基因的缺失情况。结果 p2 7kip1在精原细胞瘤组织中的阳性表达率为 4 8.9% (2 2 / 4 5 ) ,显著低于正常睾丸组织的 90 .0 % (P<0 .0 5 ) ,p2 7kip1蛋白在精原细胞瘤组织中的阳性表达与淋巴结和远处器官转移相关 (P<0 .0 5 ) ,与组织学分型无关 ;p2 1ras、p16蛋白在精原细胞瘤组织中的阳性表达率分别为 4 2 .2 % (19/ 4 5 )和 6 0 .0 % (2 7/4 5 ) ,与正常睾丸组织比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 p16、p2 1ras蛋白在精原细胞瘤组织中的表达与组织学类型及淋巴结转移无相关性 (P>0 .0 5 )。p2 1基因无纯合子缺失。p16基因纯合子缺失率为 4 4 .4 % (12 / 2 7) ,其缺失率与精原细胞瘤的组织学类型、淋巴结和远处器官转移无关。p2 7kip1、p2 1ras及 p16阳性表达率之间有相关性 (P<0 .0 5 )。结论 p2 7kip1蛋白的低表达或缺失可能与精原细胞瘤的发生、浸润转移有关 ,可作为估计精原细胞瘤预后的良好指标。 p16基因的缺失和表达下降可能是精原细胞瘤发生的早期事件。

肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和CDK4蛋白的影响

目的检测肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)蛋白表达的影响。方法肉桂醛(3.13、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10 g/L)作用肝癌HepG2细胞后,MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性和半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。流式细胞术检测肉桂醛对HepG2细胞凋亡影响。免疫荧光法检测HepG2细胞p21和CDK4蛋白的表达。结果肉桂醛能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24小时、48小时和72小时IC_(50)值分别为0.68、0.45、0.35 g/L(P<0.01)。肉桂醛组(0.900、0.450、0.225 g/L)肝癌HepG2细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肉桂醛能增加p21蛋白和降低CDK4蛋白在HepG2细胞中的表达,各浓度肉桂醛组的p21、CDK4蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肉桂醛可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,可能与调节p21和CDK4的蛋白表达有关。

P21基因rsi059234位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌发病风险相关性

【目的】研究 p21基因 rs1059234位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌之间的相关性。【方法】通过测序及PCR-RFLP方法，对263例子宫内膜癌患者（观察组）及315例健康人群（对照组）的外周血DNA的 p21基因 rs1059234位点进行基因型分型，并分析分型与子宫内膜癌之间的相关性。【结果】观察组中 rs1059234位点C等位基因频率较对照组明显升高（P ＝0．039）。rs1059234位点 CC基因型频率在观察组中与对照组相比呈明显升高趋势（0．335vs 0．219，P＝0．045），CC基因型增加子宫内膜癌的风险（OR＝1．589，95％ CI：1．010～2．502），但是经回归分析校正后，CC 基因型并不增加子宫内膜癌的风险（OR＝1．623，95％ CI：0．720～3．659，P＝0．243）。【结论】在东北地区汉族女性中，p21基因 rs1059234位点的多态性与子宫内膜癌的发生风险无明显关联。

p21^(WAF1)蛋白的表达与非小细胞肺癌增殖和预后的关系

目的:检测人非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)组织中的p21WAF1/CIP1表达水平,探讨NSCLC中p21WAF1/CIP1的表达与细胞增殖活性和预后的关系。方法:采用流式细胞术检测60例NSCLC中p21WAF1/CIP1的表达量及DNA含量;分析p21WAF1/CIP1表达水平与S期细胞比例、预后的关系。结果:正常肺组织中未见p21WAF1/CIP1的表达,60例NSCLC组织中p21WAF1/CIP1阳性率为60%(36/60),p21WAF1/CIP1阳性表达者的S期细胞比例(10.87±0.69)%低于阴性表达者(13.30±0.93)%,t=3.232,P=0.001。p21WAF1/CIP1的表达与患者的术后累积生存月数和5年生存率有关,p21WAF1/CIP1阳性表达者的术后平均生存月数(40个月)明显高于阴性表达者(25个月),t=2.885,P=0.003;5年生存率(29%)也高于阴性表达者(9%),t=2.712,P=0.004。结论:p21WAF1/CIP1表达是判断NSCLC预后的一个可参考指标。

p21^(waf1)基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的 :构建人 p2 1waf1 基因的原核表达载体并在大肠杆菌 JM10 9中高效表达。方法 :从人肝细胞中分离总 RNA,经逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)得到 p2 1waf1 全基因。用原核细胞表达载体构建了 p BV 2 2 0 / p2 1waf1 重组质粒 ,经 DNA测序确认后 ,将其转化到大肠杆菌 JM10 9进行表达、初步纯化。结果 :SDS- PAGE凝胶电泳分离显示在分子量 2 10 0 0处有一诱导蛋白带 ,薄层扫描显示表达产物在诱导 5 h时可达细菌总蛋白的 38% ,Westernblotting证明表达产物与抗人 P2 1waf1 单克隆抗体有特异性免疫反应。结论 :成功构建出 p2 1waf1 表达载体 ,诱导产生蛋白经检测证实为 P2 1waf1 蛋白。

Smad4及TβRⅡ和P21^(waf1)在食管鳞癌的表达及意义

目的 :探讨食管鳞癌中Smad4、TβRⅡ及P2 1waf1的表达特点及其意义。方法 :80例食管鳞癌样本常规石蜡切片行Smad4、TβRⅡ、P2 1waf1免疫组织化学染色。结果 :Smad4、TβRⅡ、P2 1waf1的表达在食管癌组织学分级Ⅰ级、癌细胞未浸至深肌层和淋巴结无转移的组织样本中阳性率明显高于组织学分级Ⅲ级、癌细胞浸至深肌层或浆膜层和淋巴结有转移的组织样本 ,差异均有显著或极显著意义 (P <0 .0 5 )。结论 :Smad4、TβRⅡ、P2 1waf1与食管鳞癌的发生发展及生物学行为有关 ,随病理分期、细胞分级增高阳性表达率降低。

12-脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及bcl-2的表达

目的研究12-脂氧化酶(12-LOX)对胃癌细胞中P21、bcl-2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达的影响及与ERK1/2信号传导通路的关系。方法胃癌细胞AGS常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中24h至对数生长期,改用无血清RPMI-1640培养基培养24h加入干预药物。P21、bcl-2及p-ERK1/2表达采用Western blot法测定。分别采用100nmol/L的12-LOX催化合成产物12-羟基廿碳四烯酸(12-HETE)及40μmol/L的12-LOX特异性抑制黄苓素干预AGS细胞24h,测定P21、bcl-2及p-ERK1/2含量;采用ERK抑制剂PD98059预处理AGS细胞2h后,再分别用100nmol/L的12-HETE及40μmol/L黄苓素干预24h后再测定P21、bcl-2及p-ERK1/2含量。结果经100nmol/L的12-HETE干预24h后,p-ERK1/2、P21、bcl-2均显著高于末干预组(P<0.05),而40μmol/L黄苓素干预24h后,p-ERK1/2、P21、bcl-2显著低于对照组(P<0.05);采用ERK抑制剂PD98059预处理AGS细胞2h后再分别用100nmol/L的12-HETE及40μmol/L黄苓素干预与未采用PD98059预处理组相比,PD98059预处理后12-HETE干预组bcl-2水平低于仅用12-HETE干预组,PD98059预处理后黄苓素干预组bcl-2水平高于仅用黄苓素干预组(P<0.05)。而PD98059预处理后2组P21水平含量均无明显差异。结论 12-LOX对胃癌细胞P21及bcl-2表达具有调节作用,12-LOX通过其合成产物12-HETE促进ERK1/2的磷酸化,并通过ERK1/2途径调节bcl-2的表达,P21的表达不受ERK1/2途径调控。

慢性脑低灌注状态缺血再灌注后大鼠海马P21和P53蛋白的表达

目的:通过建立大鼠慢性脑低灌注模型,观察慢性脑低灌注状态下正常脑灌注压恢复过程中P21和P53蛋白的表达情况。方法:实验于2003-12/2004-12在锦州医学院动物实验中心进行。取Ⅱ级Wistar雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型不灌注组和模型再灌注组:每组动物按正常灌注压恢复后不同时间点分组(12,24,48,72h组),每个时间点各5只。采用右侧颈外静脉-颈总动脉端侧吻合和对侧横窦引流静脉结扎的方法,建立慢性脑低灌注动物模型,术后90d阻断颈部动静脉分流造成模型组大鼠脑组织再灌注。各组在恢复正常灌注后12,24,48,72h取材,应用免疫组化和显微图像分析方法检测慢性脑低灌注状态下正常脑灌注压恢复过程中大鼠海马P21和P53蛋白的表达。结果:P21和P53蛋白在对照组大鼠脑组织中无表达,48h灰度值分别为155.34±1.18和172.91±1.37;在模型不灌注组中弱表达,48hP21和P53蛋白分别为125.12±3.56和112.10±4.46;在模型再灌注组大鼠脑组织中P21和P53蛋白于术后12h开始有表达,48h达高峰,分别为53.32±2.84和54.12±0.34,随后逐渐降低。结论:慢性脑低灌注状态下,正常脑灌注压恢复过程中可诱导P21和P53蛋白的表达。

p53、p21、MDM2蛋白在卵巢子宫内膜异位症病人血清、异位及在位内膜组织中的表达及相关性

目的探讨p53、p21、MDM2蛋白在卵巢子宫内膜异位症病人血清、异位及在位内膜组织中的表达及相关性。方法采用随机数字表法选取2012年1月至2017年3月在郑州人民医院收治的卵巢子宫内膜异位症病人手术切除的异位内膜组织50例作为异位组、子宫内膜异位症病人自愿刮宫术取得的在位子宫内膜组织40例作为在位组,刮宫术取得非子宫内膜异位症病人的正常子宫内膜组织35例作为对照组,异位组及在位组病人(共90例,为观察组)。使用免疫组化染色法(S-P法)对p53、p21、MDM2蛋白的表达情况进行检测。结果异位组p53、p21表达阳性率(12.00%、10.00%)明显低于对照组(37.14%、31.43%)及在位组(35.00%、30.00%),P<0.05;异位组MDM2表达阳性率(52.00%)明显高于对照组(5.71%)及在位组(7.50%),P<0.05;在位组与对照组比较(35.00%、30.00%、7.50%比37.14%、31.43%、5.71%),p53、p21、MDM2表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05);对照组、在位组分泌期p53、p21表达(66.67%、60.00%;61.11%、61.11%)均明显高于组内增生期(15.00%、10.00%;13.64%、13.64%),P<0.05,对照组、在位组、异位组分泌期MDM2表达阳性率(6.67%、11.11%、47.83%)与组内增生期(5.00%、4.55%、55.56%)比较,均差异无统计学意义(P>0.05);子宫内膜异位症病人的异位子宫内膜组织中p53表达与p21表达呈正相关(r=0.721,P<0.01);p53表达与MDM2表达呈负相关(r=-0.421,P<0.01);p21表达与MDM2表达无相关性(r=0.308,P>0.05)。观察组血清p53、p21水平[(0.86±0.23)kU/L、(1.04±0.12)kU/L]明显低于对照组[(1.38±0.19)kU/L、(1.68±0.24)kU/L],MDM2水平[(2.19±0.33)kU/L]明显高于对照组[(1.03±0.15)kU/L],P<0.05。结论 p53、p21、MDM2蛋白表达在子宫内膜异位症的发生发展中起着重要作用,且它们之间有一定的相关性。

细胞周期抑制蛋白p21与肾脏疾病

肾脏细胞增殖与凋亡异常在肾脏疾病中具有重要意义 ,其调控最终发生在细胞周期水平上 ,细胞周期抑制蛋白p2 1属于负向细胞周期调控蛋白 ,与多种肾脏疾病中细胞增殖和凋亡异常有关 ,可能影响肾脏疾病进展 。

人剪切修复基因XPD对p52和p21基因的影响

目的:探讨人剪切修复基因XPD转染人HepG2肝癌细胞后p52和p21基因表达的变化以及对肝癌细胞生长的影响。方法:人肝癌细胞HepG2为靶细胞,XPD基因通过Lipofectamine2000脂质体转染HepG2。将细胞分为重组质粒HepG2-pEGFP-N2-XPD组(XPD组)、空载质粒HepG2-pEGFP-N2组(N2组)和HepG2空白对照组。分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Westernblot)法检测各组细胞中XPD、p52以及p21的mRNA和蛋白质的表达量,并用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测各组细胞的增殖能力。结果:XPD组中的p52的mRNA表达较其他2组显著下调,XPD、p21的mRNA表达较其他2组明显上调(均P<0.01)。Westernblot检测结果显示各组细胞中XPD、p52及p21的蛋白表达各组间差异与其mRNA各组间差异一致。MTT检测显示XPD转染入HepG2后细胞增殖能力减弱。结论:XPD基因可以抑制癌细胞的生长和基因p52的表达,促进p21的表达。

p21^(WAF1)在小儿肾母细胞瘤组织中的表达及临床意义

目的:探讨p21WAF1 在肾母细胞瘤中的表达水平,评价p21WAF1 的检测对肾母细胞瘤的诊断和预后判断的应用价值。方法:用免疫组织化学技术检测32 例小儿肾母细胞瘤(肿瘤组)和7 例小儿非瘤肾组织(对照组)石蜡标本中p21WAF1的表达,分析p21WAF1 的表达与肾母细胞瘤组织学分型、临床肿瘤分期和淋巴结转移间的关系。结果: 1) p21WAF1 在非瘤肾组织中存在基础水平的表达; 2) p21WAF1 在肾母细胞瘤中的表达与其组织学分型、临床肿瘤分期和淋巴结转移相关。结论: p21WAF1 的表达在一定程度上有助于肾母细胞瘤的诊断和预后判断。

Forskolin对人胃癌细胞增殖影响的实验研究

目的 :探讨毛喉萜 (Forskolin)的抗胃癌作用。方法 :采用MTT比色法、克隆形成法观察Forsko lin对SGC 790 1细胞的作用 ,利用免疫细胞化学方法检测其对rasp2 1、p5 3蛋白表达的影响。结果 :Fors kolin可明显抑制SGC 790 1细胞增殖 ,经Forskolin处理细胞 3d后 ,rasp2 1、p5 3蛋白表达均有明显下降 ,P <0 0 1。结论 :Forskolin能明显抑制人胃癌SGC 790 1细胞增殖 ,其作用可能与降低rasp2 1、p5 3蛋白表达有关。

洛伐他汀或辛伐他汀协同组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人非小细胞肺癌的抑制作用

目的：研究他汀类药物能否协同增强组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。方法：采用磺酰罗丹明B比色法检测不同浓度的SAHA与洛伐他汀／辛伐他汀合用对A549细胞存活率的影响；采用Annexinv／PI双染结合流式细胞术检测2．5μmol／LSAHA与不同浓度的洛伐他汀联合应用对A549细胞凋亡的影响；并采用蛋白质印迹法检测2．5μmot／LSAHA与5μmol／L洛伐他汀联合作用对凋亡相关标志蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（c-PARP）及p21蛋白表达水平影响。结果：与SAHA组比较，洛伐他汀／辛伐他汀与SAHA合用组减少A549细胞的存活率。不同浓度的洛伐他汀能协同增加SAHA对A549细胞的凋亡诱导作用，同时合用组c-PARP的表达较单用两组增加，说明洛伐他汀能协同SAHA诱导A549细胞凋亡。2．5μmol／LSAHA单独作用A549细胞48h可以上调A549细胞p21蛋白的表达，5μmol／L洛伐他汀与2．5μmol／LSAHA合用可以回调p21蛋白的表达。结论：洛伐他汀及辛伐他汀能增加SAHA对非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制作用，其中洛伐他汀增强SAHA对A549细胞的生长抑制作用可能与其共同作用后p21蛋白表达下调相关。