原矛头蝮蛇毒及其组分对凝血功能的影响

目的研究原矛头蝮蛇毒（PMV）及其组分作用于血液循环系统的部分生物学活性,进一步探讨其毒性机制。方法采用Sephadex G-75凝胶层析方法分离不同分子质量范围的蛋白组分FⅠ,FⅡ和FⅢ。贫血小板血浆调节富血小板血浆使血小板为3×1011L-1,血小板悬液分别与PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.03 g·L-1预孵育5 min,血小板聚集仪测定PMV及其组分诱导血小板聚集活性;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.05 g·L-1分别与纤溶酶原0.1 U·L-1预孵育10 min,采用单一时间点测定和酶动力学测定PMV及其组分酶切发色底物S-2251的作用;将大鼠血浆与PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ1.0 g·L-1分别孵育5和30 min,测定凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）和纤维蛋白原（FIB）水平;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ10,50和250 mg·L-1处理微血管内皮细胞24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.1 g·L-1与含卵磷脂和不含卵磷脂的豚鼠红细胞悬液分别孵育不同时间,计算溶血率。结果与对照组相比,PMV和高分子质量蛋白组分FⅠ（〉71 ku）诱导血小板聚集率显著升高〔（61.0±5.8）%和（56.9±5.9）%vs（12.4±4.1）%〕（P〈0.01）。酶切发色底物S-2251结果显示,PMV与中分子质量组分FⅡ（18~37 ku）具有酶切发色底物的作用（P〈0.01）。PMV和FⅠ可引起血浆凝固。与对照组相比,FⅡ组分和低分子质量蛋白组分FⅢ（〈10 ku）明显使TT,APTT和PT的时间延长（P〈0.01）。PMV,FⅠ及FⅡ导致内皮细胞解离悬浮,与对照组相比,细胞存活率下降,分别为（56.8±3.6）%,（71.6±3.8）%和（58.2±5.5）%。在无卵磷脂条件下,PMV和FⅡ可缓慢地引起红细胞轻度溶血;在卵磷脂参与下,PMV和FⅡ引起豚鼠红细胞急剧溶血,与正常对照组相比,在0.5 min内溶血率从（17.7±1.0）%分别升高至（81.0±4.0）%和（81.0±1.0）%（P〈0.01）。结论 PMV在体外表现出多方面的血循毒性质的活性,不同分子质量蛋白组分活性机制及作用不同。

原矛头蝮蛇毒的抗凝作用

目的研究原矛头蝮蛇毒(PMV)对血液系统的作用。方法将PMV 0.2 mg.kg-1一次性尾静脉注射给予SD大鼠。注射后0.5,1,3,6和24 h分别取下腔静脉血,制备抗凝全血、抗凝血浆和富血小板血浆(PRP)。利用血细胞计数板对抗凝全血和PRP进行血小板计数;将抗凝血浆用生理盐水稀释5倍,在412 nm测定血红蛋白含量;采用凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和纤维蛋白原(FIB)含量测定试剂盒分别测定抗凝血浆的TT,APTT,PT和FIB含量;用发色底物法测定抗凝血浆酶切发色底物S-2251的活性。给昆明小鼠一次性尾静脉注射PMV 0.28 mg.kg-1,在0.5,1,3,6和24 h测定尾部出血时间。结果给予PMV 0.2 mg.kg-130 min大鼠抗凝全血血小板计数减少至正常对照组的1/3(P<0.01),PRP中血小板计数减少至正常对照组的1/20(P<0.01),抗凝血浆血红蛋白含量增加约6倍(P<0.01);给予PMV 6 h APTT明显延长(P<0.05),3和6 h TT明显延长(P<0.01),1和3 h PT明显缩短(P<0.01);FIB含量和抗凝血浆酶切发色底物S-2251的活性无明显变化。给予小鼠PMV 0.28 mg.kg-130 min小鼠尾部出血时间达(2341±742)s,较正常对照组小鼠(81±11)s明显延长(P<0.01),1 h逐渐缩短(P<0.01),24 h仍未恢复至正常水平(P<0.05)。结论 PMV具有明显的抗凝作用。

基于全血凝血功能评价原矛头蝮蛇毒对大鼠凝血功能的影响

原矛头蝮蛇(Protobothrops mucrosquamatus)主要分布于我国长江以南和台湾地区,原名烙铁头蛇(Trimeresurus mucrosquamatus),属蝰蛇科原矛头蝮属[1]。原矛头蝮蛇毒(Protobothrops mucrosquamatus venom,PMV)主要表现为血液毒性,影响心血管及凝血系统等方面,对组织细胞也有毒性作用[2-3]。该蛇伤较为常见,临床表现主要为凝血障碍、头昏恶心、视力模糊和胸闷腹痛等,严重者出现皮下出血、血尿、全身内脏出血甚至失血性休克[4-5]。