原纤维蛋白1基因在胃癌组织中的表达、功能富集及信号通路生物信息学分析

目的探讨原纤维蛋白1(FBN1)基因在胃癌组织中的表达、相关生物学功能和信号通路以及FBN1表达与胃癌患者生存期的关系。方法应用生物信息大数据挖掘技术分析癌症基因组图谱数据库(TCGA)中人胃癌癌组织和癌旁正常组织中FBN1 mRNA表达水平。应用蛋白相互作用数据库STRING构建FBN1基因相关蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络并对蛋白网络中的编码基因进行功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析。根据胃癌组织中FBN1 mRNA表达水平的中位数将胃癌患者分为高表达组(n=126)和低表达组(n=118),采用Cox回归模型比较FBN1高表达组与低表达组患者总生存期(OS)和无疾病进展生存期(DFS)。结果FBN1 mRNA在胃癌癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。FBN1基因PPI网络中共有21个蛋白和143个相互作用关系,各蛋白平均相互作用指数为0.816,网络中各个蛋白功能富集明显(P<0.05)。FBN1基因生物学过程主要富集于翻译后蛋白质修饰、解剖结构发育等;细胞组分主要富集于内质网内腔、细胞外基质和内质网等;分子功能主要富集于细胞黏附分子结合和整合素结合等;KEGG分析显示,FBN1基因KEGG主要富集于细胞外基质受体相互作用、黏着及胃肠道肿瘤等。FBN1 mRNA表达与CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞及树突状细胞浸润呈正相关(r=0.248、0.412、0.665、0.353、0.412,P<0.05)。FBN1高表达组患者的OS和DFS均显著短于低表达组(P<0.05)。结论FBN1基因在胃癌组织中表达水平显著升高,且高表达患者的OS和DFS显著短于低表达患者。FBN1基因编码蛋白功能富集明显。

原纤维蛋白1在胃癌组织中的表达及与预后的关系

目的:探讨胃癌组织中原纤维蛋白1(FBN1)表达水平,及与胃癌患者临床病理特征和预后的相关性。方法:采用免疫组织化学SP法对100例胃癌组织及配对癌旁组织中FBN1的表达水平进行检测,分析FBN1蛋白在胃癌和癌旁组织的表达情况,以及FBN1蛋白高表达与胃癌患者临床病理特征的关系。对FBN1蛋白不同表达情况胃癌患者的生存时间进行分析。使用Cox回归分析影响胃癌患者术后生存的独立危险因素。结果:胃癌组织中FBN1蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌组织中FBN1蛋白高表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期显著相关(均P<0.05);而与患者年龄、性别、分化程度无明显相关性(均P>0.05)。FBN1蛋白高表达患者生存时间显著低于FBN1蛋白低/阴性表达患者(P<0.05)。Cox回归分析显示,FBN1蛋白高表达、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、低分化以及淋巴结转移均为影响胃癌患者术后生存的独立危险因素。结论:FBN1蛋白在胃癌组织中的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期密切相关,并可作为胃癌患者术后生存时间的评估指标。

血清原纤维蛋白-1对头颈部动脉夹层的诊断价值

目的探讨血清原纤维蛋白-1在头颈部动脉夹层(cervicocerebral artery dissection,CAD)诊断中的临床应用价值。方法连续性收集本院神经内科住院且确诊为CAD的患者55例作为CAD病例组,CAD组根据发病时间是否≥15 d分为急性期CAD组和非急性期CAD组;同期选取性别、年龄相匹配的体检科健康受检者30例作为对照组,收集两组的人口学资料及血清标本,采用酶联免疫吸附试验测定两组之间血清原纤维蛋白-1水平并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清原纤维蛋白-1对CAD的临床诊断价值。结果CAD组与对照组年龄、性别、糖尿病、吸烟史比较差异均无统计学意义(P>0.05)。两组间高脂血症、高血压的发生率有统计学差异(P<0.05),且Logistic回归分析高血压与CAD的发生呈正相关(P<0.05),而高脂血症与其呈负相关(P<0.05)。CAD组、急性期CAD组、非急性期CAD组、对照组的血清原纤维蛋白-1水平分别为[(50.75±11.65、55.81±8.98、40.35±9.50、39.06±8.58)ng/ml],其中CAD组血清原纤维蛋白-1水平显著高于对照组且差异有统计学意义(P<0.05);急性期CAD组的血清原纤维蛋白-1水平与非急性期CAD组、对照组之间的差异均有统计学意义(P<0.001),非急性期CAD组的血清原纤维蛋白-1水平与健康对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析显示血清原纤维蛋白-1对急性期CAD的诊断效能较高,其诊断临界值为46.62 ng/ml,敏感度为0.86,特异度为0.83,曲线下面积(AUC)为0.91(95%CI 0.845~0.982,P<0.0001)。结论血清原纤维蛋白-1对急性期头颈部动脉夹层的诊断有一定的临床应用价值。

原纤维蛋白1基因新突变导致单纯性晶状体异位

目的 研究我国单纯性晶状体异位家系的致病基因 ,并确定基因突变。方法 对单纯性晶状体异位一家系进行临床研究和系谱分析。采集家系中 7例患者和 3例健康成员的静脉血 ,提取基因组DNA。通过连锁分析确定致病基因的染色体位点后 ,应用聚合酶链反应 (PCR)扩增原纤维蛋白(FBN) 1基因外显子 ,直接测序确定致病的基因突变。采用PCR和限制性内切酶法进行群体分析。结果 单纯性晶状体异位患者的FBN1基因外显子 6发生了错义突变 ,cDNA 6 4 0位的鸟嘌呤被腺嘌呤取代 (G6 4 0A) ;对应的甘氨酸改变为丝氨酸 (G2 14S)。突变后EagⅠ内切酶位点消失。家系中健康成员和5 0名正常人均未发现该突变。结论 FBN1基因新突变G6 4 0A (G2 14S)是该家系单纯性晶状体异位的致病基因突变。

Marfan综合征两种原纤维蛋白1基因突变

目的对14例Marfan综合征（Marfan syndrome，MFS）患者的原纤维蛋白1（fibrillin 1，FBNI）基因和转化生长因子β受体2（transforming growth factor beta receptor typeⅡ，TGFBR2）基因进行突变筛查。方法应用变性高效液相色谱法对MFS患者FBNl的65个外显子和TGFBR2基因的7个外显子进行突变筛查，对变性高效液相色谱图形异常的PCR扩增片段用DNA测序鉴定突变位点及性质，并用限制性片段长度多态性方法进一步证实突变。结果在MFS患者FBNl基因中发现两种突变。两种基因突变是新的FBNl置换突变（Intron29＋4A〉T）和再发的FBNl无义突变（8080C〉T）。结论FBNl的Intrort29＋4A〉T和8080C〉T可能是MFS患者的发病原因。

腹股沟直疝及斜疝患者腹横筋膜原纤维蛋白-1、转化生长因子β1、类赖氨酰氧化酶1的表达研究

目的比较原纤维蛋白-1(Fibrillin-1)、转化生长因子β1(TGFβ1)及类赖氨酰氧化酶1(LOXL1)在腹股沟直疝及斜疝患者腹横筋膜组织的表达,探讨腹股沟直疝的发病机制。方法用免疫组化和Western blot方法检测在我院行疝修补术患者(直疝19例,斜疝23例)腹横筋膜组织中Fibrillin-1、TGFβ1及LOXL1的表达情况。并对两者相关性进行分析。结果腹股沟直疝患者腹横筋膜组织Fibrillin-1、TGFβ1及LOXL1的含量显著低于斜疝患者(P<0.05);直疝腹横筋膜Fibrillin-1与TGFβ1(P<0.05),LOXL1与TGFβ1的表达呈正相关(P<0.05)。结论腹股沟直疝患者腹横筋膜组织Fibrillin-1、TGFβ1及LOXL1存在异常表达,并且相互作用共同参与了腹股沟直疝的发生。

应用变性高效液相色谱检测马凡综合征原纤维蛋白1突变

目的应用变性高效液相色谱（DHPLC）结合DNA测序法检测分析马凡综合征（MFS）原纤维蛋白1（fibrillin-1）基因（FBN1）突变状况。方法提取22例MFS患者全血DNA，PCR增扩FBN1的65个外显子，用DHPLC筛查DNA突变，对DHPLC图形异常的PCR产物用DNA测序分析突变分布。结果在9例MFS患者FBN1中发现10种突变。其中有4种错义突变[5015G〉C（C1672S）、5309G〉A（C1770Y）、7241G〉A（A2414G）与7769G〉A（C2590Y）]，4种无义突变[3295G〉T（E1099X）、4307insTCGT（G1441X）、4621C〉T（R1541X）与8080C〉T（A2694X）]，2种剪切位点突变（IVS29＋4A〉T与IVS50＋1G〉A）。结论DHPLC结合DNA测序法是一种快速有效的FBN1突变检测法，可用于MFS的基因诊断。

原纤维蛋白-1和弹性蛋白在女性盆腔器官脱垂患者阴道前壁的表达及意义

目的探讨原纤维蛋白-1(Fibrillin-1)和弹性蛋白(Elastin)在女性盆底器官脱垂(POP)患者阴道前壁结缔组织中的表达及与疾病发生的关系。方法选择资料完整的90例因POP行手术治疗患者的阴道前壁组织标本为观察组,其中Ⅱ°脱垂30例,Ⅲ°脱垂30例;同期选30例非POP患者的阴道前壁组织为对照组。采用免疫组化法和逆转录-PCR(RT-PCR)法检测两组Fibrillin-1和Elastin的表达。结果 Fibrillin-1和Elastin在观察组的表达均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Fibrillin-1和Elastin的表达在观察组Ⅱ°脱垂及Ⅲ°脱垂中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。Fibrillin-1和Elastin在表达上呈正相关(r=0.957,P<0.01)。结论 Fibrillin-1表达的减少导致Elastin的表达减少,从而引起了盆底弹性纤维组织的破坏及缺失,其可能参与了盆底器官脱垂的发生、发展。

原纤维蛋白1 C末端的系统发育和活性位点预测生物信息学分析

人前原纤维蛋白1(profibrillin-1,FBN1)经过弗林蛋白酶(furin)酶切后得到成熟的原纤维蛋白-1和C末端多肽白脂素(asprosin),白脂素是新发现的参与调解糖代谢的热点激素。本研究采用整合生物信息学方法,对FBN1 C末端的系统发育和白脂素的功能位点进行分析,探究白脂素在糖代谢相关疾病发生中的分子机制。从UniProt数据库中搜索物种FBN1序列信息并进行比对;通过blastp方法检索脊椎动物FBN1 C末端氨基酸,构建进化树和进化轨迹,进行系统发育生物信息学分析;运用I-TASSER构建白脂素三级结构预测模型;运用COFACTOR和COACH法进行白脂素的配体活性位点分析。本研究发现:脊椎动物FBN1 C末端具有Furin酶识别位点(R-X-K/X-R)的高保守性,进化树结果显示FBN1 C末端蛋白有26个高保守位点,白脂素活性位点预测为“4RL”和“MAN”。本研究首次揭示原纤维蛋白1 C末端蛋白可能在脊椎动物中广泛存在,分析了白脂素的功能和结构的关系,为其在糖代谢性疾病中的功能机制研究和治疗提供新的思路。

原纤维蛋白-1 mRNA和蛋白在子宫肌瘤组织中的表达

目的：探讨原纤维蛋白-1(fibrillin-1,FBN-1)mRNA和蛋白在子宫肌瘤组织中的表达及其与月经周期的关系。方法：50份子宫肌瘤及同源正常子宫平滑肌组织标本在术中被采集。根据月经周期及子宫内膜组织病理学检查分为增生期、分泌期及萎缩期。采用实时荧光定量PCR、Western blot分析及免疫组织化学方法检测FBN-1 mRNA和蛋白的表达。结果：免疫组织化学染色显示FBN-1在子宫肌瘤及正常子宫平滑肌组织的细胞外基质中均有较丰富的表达。FBN-1 mRNA和蛋白在增生期和分泌期中的子宫肌瘤组织中的表达均明显高于同源正常子宫平滑肌组织(P＜0．01,P＜0．05；P＜0．01,P＜0．05),而在绝经期中的子宫平滑肌瘤及正常子宫平滑肌组织的表达无明显差异。结论：FBN-1可能与子宫肌瘤的发生机制有关,并可能受激素调节的影响。

雌激素上调体外培养的子宫肌瘤平滑细胞中原纤维蛋白-1的表达

目的探讨卵巢激素是否影响体外培养的子宫肌瘤平滑肌细胞中(Fibrillin-1,FBN-1)mR-NA和蛋白的表达。方法10份子宫肌瘤及同源正常子宫平滑肌组织标本在术中被采集,游离的子宫肌瘤平滑肌细胞及同源正常子宫平滑肌细胞在含有10%的胎牛血清DMEM培养基中培养。在细胞达到70%融合时继续用无血清培养基培养48h,然后加入递增剂量的17β雌二醇(17-βestrodioal,E2)(0、0.1、1、10ng/ml)或E210ng/ml联合加入递增剂量的孕激素(0、1、10、100ng/ml)继续培养48h。采用实时荧光定量PCR、Western blot及荧光免疫组织化学方法探查FBN-1 mRNA和蛋白在体外培养的子宫肌瘤平滑肌细胞中的表达。结果免疫荧光组织化学染色显示FBN-1在子宫肌瘤平滑细胞及正常子宫平滑肌细胞中均有表达;E2呈剂量依赖性增加子宫肌瘤平滑细胞中FBN-1 mRNA和蛋白的表达,尤其在E2浓度增加为10ng/ml时,与对照组相比差异显著(P<0.05,P<0.01);而在E2联合不同剂量的孕激素的情况下对子宫平滑肌瘤细胞FBN-1 mRNA和蛋白表达无影响。结论雌激素增加体外培养的子宫肌瘤平滑细胞中FBN-1 mRNA和蛋白的表达。

腹主动脉瘤组织原纤维蛋白-1表达水平及其对患者生存结局的影响

目的探讨腹主动脉瘤组织原纤维蛋白-1(FBN1)表达水平及其对患者生存结局的影响。方法收集45例腹主动脉瘤(AAA)患者主动脉瘤组织和29例正常腹动脉血管壁组织,免疫组织化学染色检测组织基质金属蛋白酶(MMP9)、FBN1蛋白表达定位,蛋白质免疫印迹法检测组织FBN1、MMP9蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测组织FBN1、MMP9 mRNA表达水平。对45例AAA患者进行随访,分析FBN1表达与患者病理资料及生存结局的关系。结果 FBN1、MMP9主要表达于动脉瘤组织巨噬细胞或平滑肌细胞,主动脉瘤组织FBN1、MMP9蛋白阳性表达率86.7%、93.3%均高于正常动脉壁组织34.5%、48.3%(χ~2=21.467,19.450,P<0.001)。主动脉瘤组织FBN1、MMP9 mRNA相对表达量分别为(1.89±0.19)和(2.29±0.31),正常动脉壁组织分别为(0.79±0.15)和(1.32±0.12),主动脉瘤组织FBN1、MMP9 mRNA相对表达量高于正常动脉壁组织(t=26.317,t=16.061,P<0.001),差异有统计学意义;主动脉瘤组织FBN1、MMP9蛋白表达量分别为(1.08±0.11)和(1.02±0.10),正常动脉壁组织分别为(0.29±0.06)和(0.39±0.07),主动脉瘤组织FBN1、MMP9蛋白表达量高于正常动脉壁组织(t=35.376,t=19.548,P<0.001)。对照组FBN1与MMP9表达无相关性(P>0.05),AAA组FBN1与MMP9表达呈成正相关(r=0.861,P<0.05),差异有统计学意义。主动脉瘤破裂及瘤体直径>8.0 cm患者FBN1表达水平高于瘤体直径≤8.0 cm者,差异有统计学意义(P=0.047)。FBN1阴性患者5年生存率为87.2%,FBN1阳性患者5年生存率为48.1%,FBN1阴性组5年生存率高于阳性组(χ~2=17.081,P<0.05)。结论腹主动脉瘤组织FBN1表达显著升高,FBN1表达越高,患者生存率越低,FBN1可以作为AAA患者生存结局的评估指标之一。

热休克对肌原纤维蛋白-1在成纤维细胞中表达水平的影响

目的:观察热休克后,人成纤维细胞中肌原纤维蛋白-1mRNA的表达水平及培养上清中蛋白质含量的变化,以探讨热休克后人体皮肤真皮组织中肌原纤维蛋白-1表达下降的可能机制,并建立皮肤光老化修复的体外试验模型。方法:将人成纤维细胞加热至43℃,30min后恢复常规培养,分别于24h,48h及72h收集细胞,以Northernblot方法及Westernblot方法分别检测成纤维细胞表达肌原纤维蛋白-1mRNA的水平及培养上清中的蛋白含量。结果:热休克后24h及48h,成纤维细胞中肌原纤维蛋白-1mRNA表达水平明显下降,72h略有回升。培养上清中肌原纤维蛋白-1的蛋白质含量变化与此相似。结论:热休克后,人体皮肤真皮组织中肌原纤维蛋白-1的表达降低,与成纤维细胞转录、合成及分泌肌原纤维蛋白-1的水平下降密切相关,提示该体外试验模型可用于进一步研究热休克对肌原纤维蛋白-1的调控机制,也可用于评价皮肤光老化治疗药物的疗效。

纤维蛋白原激活剂抑制剂1基因、血管紧张素Ⅱ1型受体基因多态性与肺源性心脏病的关系

目的研究纤维蛋白原激活剂抑制剂-1(PAI-1)基因和血管紧张素Ⅱ1型受体(AGTR1)A1166C多态性与肺源性心脏病(简称肺心病)的关系。方法选取肺心病患者60例,正常对照组40名。采用聚合酶链反应(PCR)和PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)酶切技术,检测2组人群PAI-1基因的4G/5G型多态性和AGTR1基因的多态基因型。结果(1)肺心病组和正常对照组均检测到PAI-1基因的4G/4G、5G/5G及4G/5G3种基因型,肺心病组3种基因型的频率分别为0.15、0.28和0.57,正常对照组为0.13、0.15和0.72,两组比较差异无显著性(2χ=2.91,P>0.05);4G、5G等位基因频率差异无显著性(P>0.05),4G型与非4G型构成差异也无显著性(P>0.05);(2)肺心病患者中,女性和男性组PAI-1基因型构成差异无显著性(P>0.05),4G/5G等位基因频率差异有显著性(P<0.05),4G/4G型与非4G/4G型基因型构成差异无显著性(P>0.05);(3)肺心病组和正常对照组AGTR1 A1166C基因型构成和等位基因频率差异无显著性(P>0.05)。结论PAI-1基因4G/5G多态性和AGTR1基因A1166C多态性与肺心病发生无明显相关性。

马凡综合征患儿原纤维蛋白-1基因突变筛查的研究

目的探讨马凡综合征(MFS)患儿原纤维蛋白-1基因(FBN1)的新发突变并分析其基因型与表型的关系,为MFS患儿提供基因诊断依据。方法选取我院2010年1月—2011年12月收治的8例MFS患儿,行超声心动图、心电图和胸部X线检查,并提取外周血DNA,利用聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SSCP)和DNA测序技术,与FBN1突变数据库及健康儿童FBN1的DNA进行对比,确定突变位点和类型。结果发现1例新发错义突变c.2638G>A和1例新发PTC突变c.IVS30+1A>G,1例已知MFS的错义突变c.3349T>C。结论 PTC突变c.IVS30+1A>G和错义突变c.2638G>A、c.3349T>C可能是MFS的致病原因,应用PCR-SSCP-DNA测序方法能为儿童MFS基因诊断提供依据。

原纤维蛋白1在猪耳软骨细胞工程化软骨组织中的表达及作用

目的探讨原纤维蛋白1(FBN1)在猪耳软骨细胞工程化软骨组织中的表达情况,以及过表达FBN1后对软骨细胞表型和细胞外基质表达的影响。方法取3只长枫杂交猪单侧耳廓软骨,提取软骨细胞扩增至第2代,以6.0×107/ml的密度(200μl)接种于直径为10 mm、厚2 mm的聚羟基乙酸-聚乳酸(PGA-PLA)支架材料上,体外培养5周,构建9块细胞材料混合物组织块;将6块细胞材料混合物植入3只裸鼠体内,每只2块,培养10周,构建工程化软骨组织6块。HE染色分别检测3块体外培养5周的细胞材料混合物及裸鼠体内培养10周后的组织工程化软骨形态;取3块2 cm×1 cm大小的另一侧猪耳软骨组织及3块1.0 cm×0.5 cm大小的工程化软骨组织提取RNA,通过qPCR检测二者FBN1 mRNA表达差异;取0.5 cm×0.5 cm大小的另一侧猪耳软骨组织及工程化软骨组织各3块,利用免疫组织化学染色检测二者FBN1在蛋白水平的表达及分布差异;在第2代猪耳软骨细胞中转染空载体质粒及FBN1过表达质粒,利用实时荧光定量PCR检测软骨细胞外基质相关基因的表达变化,实验重复3次。所得数据用Graph Pad Prism 6.0进行双尾非配对t检验分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果HE染色结果显示:体外培养5周时,工程化软骨组织中可见大量软骨细胞及小的软骨陷窝,体内培养10周后,工程化软骨组织中形成明显软骨陷窝;工程化软骨组织FBN1 mRNA的相对表达量(0.00141±0.00028)较正常猪耳软骨组织(0.00358±0.00034)显著降低,差异有统计学意义(t=4.913,P=0.008);正常组织中FBN1分布于软骨陷窝及软骨膜处,而工程化软骨组织中多分布于软骨膜处,越接近软骨组织中心越少;FBN1过表达组中FBN1 mRNA相对表达量为0.01803±0.00064,而空载体对照组为0.00613±0.00103,差异具有统计学意义(t=9.708,P<0.001);过表达FBN1后软骨细胞SOX9、COL2A1、ACAN等软骨相关基因的相对表达量与对照组相比分别增加了1.273±0.071、1.315±0.104、1.928±0.280倍,差异有统计学意义(t=3.874、3.311、3.044,P=0.018、0.001、0.038)。结论猪耳软骨工程化软骨组织中FBN1 mRNA表达量及蛋白表达量显著低于正常耳软骨组织;体外实验显示FBN1促进软骨细胞COL2A1、ACAN等软骨相关基因的表达。

基于TGF-β通路考察BMP4/FBN1对脊髓室管膜瘤增殖侵袭性的影响

目的基于TGF-β通路考察BMP4/FBN1对脊髓室管膜瘤(SCE)增殖侵袭性的影响及其相关机制。方法收集SCE患者肿瘤组织,同时收集正常组织作为对照,分为对照组、病例组。利用SCE患者肿瘤组织培养肿瘤细胞,并用携带FBN1 shRNA,BMP4 shRNA的慢病毒基因敲除FBN1或BMP4蛋白的表达。通过qRT-PCR和Western Blot检测肿瘤组织样本中FBN1和BMP4基因和蛋白表达水平。在BMP4低表达和FBN1低表达肿瘤细胞中通过qRT-PCR检测TGF-β基因表达水平;同时通过CCK-8细胞增殖实验与Transwell侵袭实验进一步检测敲低FBN1或BMP4蛋白的表达对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。结果与对照组相比,病例组BMP4和FBN1基因表达量升高(分别为P<0.05,P<0.01),蛋白表达量也升高(P<0.01);敲低FBN或BMP4蛋白不仅可下调SCE细胞中TGF-β基因的表达(分别为P<0.05、P<0.01),同时抑制了SCE细胞的增殖与侵袭能力(分别为P<0.05、P<0.01)。结论本研究基于TGF-β通路,考察关键分子BMP4/FBN1对SCE增殖侵袭性的影响,提示FBN1、BMP4与TGF-β之间可能存在相互作用,为临床治疗罕见病SCE提供可用的理论基础。

PAI-1和TIMP-1基因在肾小管间质纤维化中的表达及HGF的干预作用

目的研究纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)和组织基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)基因表达与梗阻性肾病小管间质纤维化(TIF)进展的关系及肝细胞生长因子(HGF)的干预作用。方法60只Wistar大鼠随机分为4组正常大鼠组、假手术组、单侧输尿管梗阻组和HGF治疗组,分别于模型3d、7d、14d、21d处死大鼠。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测PAI-1和TIMP-1mRNA表达水平;底物酶谱法检测肾脏MMP2、9活性的变化,测定肾组织羟脯氨酸含量判断纤维化程度。结果梗阻肾组织PAI-1和TIMP-1mRNA表达显著高于对照组,并伴有明显的梗阻肾MMP2,MMP9活性低于和羟脯氨酸含量高于对照组,而21dHGF治疗组PAI-1和TIMP-1mRNA表达明显下调,MMP2,MMP9活性高于和肾组织羟脯氨酸含量少于对照组。结论PAI-1、TIMP-1mRNA表达增高是小管间质ECM降解减少的主要原因之一,也是造成TIF加重的重要因素,而HGF可拮抗这一进程,减轻小管间质纤维化。

宫颈癌组织FBN1基因甲基化状态与临床病理特征及预后的相关性研究

目的探究宫颈癌(cervical cancer,CC)组织原纤维蛋白-1(fibrillin-1,FBN1)基因甲基化状态与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2014年6月~2017年4月邯郸市第一医院诊治的98例CC患者为研究对象,收集经手术切除的CC组织、癌旁组织。甲基化特异性PCR法测定CC组织、癌旁组织FBN1基因甲基化状态;蛋白印迹法检测CC组织、癌旁组织FBN1蛋白表达水平;对CC患者进行为期5年的随访,记录患者生存情况;比较CC组织和癌旁组织FBN1基因甲基化发生率以及FBN1基因非甲基化组和FBN1基因甲基化组CC组织FBN1蛋白表达水平;分析CC组织FBN1基因甲基化状态与患者临床病理特征的关系、FBN1基因甲基化状态与患者预后的关系以及CC患者预后的影响因素。结果CC组织FBN1基因甲基化发生率(60.20%)高于癌旁组织(12.24%),差异有统计学意义(χ^(2)=48.785,P<0.05);FBN1基因甲基化组FBN1蛋白表达水平(0.61±0.12)低于FBN1基因非甲基化组(1.59±0.32),差异有统计学意义(t=21.401,P<0.05)。CC组织FBN1基因甲基化状态与患者TNM分期、高危型人乳头瘤病毒DNA(high risk-human papillomavirus DNA,HR-HPV DNA)、淋巴结转移相关(χ^(2)=7.578,8.140,7.814,均P<0.05);FBN1基因甲基化组CC患者5年累积生存率为38.98%,低于FBN1基因非甲基化组(76.92%),差异有统计学意义(χ^(2)=13.464,P<0.05)。HR-HPV DNA阳性[OR(95%CI):2.534(1.577~4.072)],有淋巴结转移[OR(95%CI):2.426(1.546~3.808)],TNM分期Ⅲ~Ⅳ期[OR(95%CI):2.702(1.633~4.471)]和FBN1基因甲基化[OR(95%CI):2.394(1.531~3.743)]是影响CC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论CC患者癌组织中FBN1基因甲基化水平较高,其与TNM分期、HR-HPV DNA和淋巴结转移等临床病理特征及预后相关,为临床诊治CC和评估CC患者预后提供新方向。

多发性内分泌腺瘤病1型合并马凡综合征家系的临床研究

目的通过分析1例多发性内分泌腺瘤病1型(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN1)合并马凡综合征(Marfan syndrome,MFS)患者的临床特征,进一步对该家系进行基因检测明确其致病基因,为临床诊断及遗传咨询提供理论依据。方法收集1例诊断为MEN1合并MFS先证者的病例资料,并对家系3名成员行全外显子测序(whole-exome sequencing,WES),对致病基因行Sanger验证。结果高通量测序结果提示先证者及其儿子MEN1基因上发现新的致病性杂合变异c.125dup,先证者及其儿子原纤维蛋白1(fibrillin-1,FBN1)基因上发现新的致病性杂合变异c.4621C>T。结论本研究报告了同时患有包括MEN1和MFS的患者及其家系,扩展了MEN1和MFS致病基因突变谱,为该家系的后续遗传咨询及治疗选择提供了理论依据。