马凡综合征患儿原纤维蛋白-1基因突变筛查的研究

目的探讨马凡综合征(MFS)患儿原纤维蛋白-1基因(FBN1)的新发突变并分析其基因型与表型的关系,为MFS患儿提供基因诊断依据。方法选取我院2010年1月—2011年12月收治的8例MFS患儿,行超声心动图、心电图和胸部X线检查,并提取外周血DNA,利用聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SSCP)和DNA测序技术,与FBN1突变数据库及健康儿童FBN1的DNA进行对比,确定突变位点和类型。结果发现1例新发错义突变c.2638G>A和1例新发PTC突变c.IVS30+1A>G,1例已知MFS的错义突变c.3349T>C。结论 PTC突变c.IVS30+1A>G和错义突变c.2638G>A、c.3349T>C可能是MFS的致病原因,应用PCR-SSCP-DNA测序方法能为儿童MFS基因诊断提供依据。

肝豆状核变性患者FBN1基因甲基化及蛋白表达水平与临床病理特征的相关性研究

目的探讨原纤维蛋白-1(fibrillin-1,FBN1)基因甲基化及蛋白表达水平与肝豆状核变性患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2013年2月至2016年2月79例肝豆状核变性患者肝病变组织为研究对象(肝豆状核变性组),选取其肝脏正常组织(距离病变组织>2 cm)作为正常对照组。采用直接测序法检测肝组织中FBN1基因甲基化水平,采用免疫组织化学法检测肝组织FBN1蛋白表达水平,收集患者年龄、性别、肝豆状核变性家族史、病程及天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、铜蓝蛋白(ceruloplasmin,CP)、尿铜(urine copper,u-Cu)水平等基线资料;采用卡方检验分析肝豆状核变性患者FBN1基因甲基化及蛋白表达水平与临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法分析肝豆状核变性患者FBN1基因甲基化及蛋白表达水平与预后的关系;采用多因素Cox回归分析影响肝豆状核变性患者预后的因素。结果肝豆状核变性组FBN1蛋白阳性表达率显著高于正常对照组,而FBN1基因甲基化率显著低于正常对照组(P<0.05)。FBN1基因甲基化及蛋白表达与性别、病程及AST、ALT水平无相关性(P>0.05),与年龄、肝豆状核变性家族史及CP、u-Cu水平有相关性(P<0.05)。FBN1蛋白阳性表达肝豆状核变性患者5年生存率低于FBN1蛋白阴性表达患者(χ^(2)=6.269,P<0.05),而FBN1基因甲基化肝豆状核变性患者5年生存率高于FBN1基因非甲基化患者(χ^(2)=5.281,P<0.05)。FBN1蛋白阳性表达是影响肝豆状核变性患者死亡的独立危险因素(P<0.05),FBN1基因甲基化是影响肝豆状核变性患者死亡的保护因素(P<0.05)。结论FBN1基因非甲基化及蛋白高表达可能与肝豆状核变性的发生、发展及预后有关。

多发性内分泌腺瘤病1型合并马凡综合征家系的临床研究

目的通过分析1例多发性内分泌腺瘤病1型(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN1)合并马凡综合征(Marfan syndrome,MFS)患者的临床特征,进一步对该家系进行基因检测明确其致病基因,为临床诊断及遗传咨询提供理论依据。方法收集1例诊断为MEN1合并MFS先证者的病例资料,并对家系3名成员行全外显子测序(whole-exome sequencing,WES),对致病基因行Sanger验证。结果高通量测序结果提示先证者及其儿子MEN1基因上发现新的致病性杂合变异c.125dup,先证者及其儿子原纤维蛋白1(fibrillin-1,FBN1)基因上发现新的致病性杂合变异c.4621C>T。结论本研究报告了同时患有包括MEN1和MFS的患者及其家系,扩展了MEN1和MFS致病基因突变谱,为该家系的后续遗传咨询及治疗选择提供了理论依据。

纤维蛋白原相关蛋白1-淋巴细胞活化基因3与长链非编码RNA-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3共调控增强CD8^(+)T细胞抑制肝细胞癌肿瘤生长

目的体外研究协同抑制纤维蛋白原相关蛋白1(FGL1)-淋巴细胞活化基因3(LAG-3)与长链非编码RNA(lncRNA)-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)双免疫逃逸通路,联合增强T淋巴细胞活性,显著抑制HCC肿瘤细胞恶性增殖和肿瘤生长的效用及机制。方法构建敲除、稳定转染的5组人肝癌细胞株HepG2、HepG2-FGL1-KO、HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)、HepG2-LAG-3-KO、HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-),并以此构建5组细胞株移植瘤免疫系统人源化小鼠成瘤模型。通过质量细胞计数法测定淋巴细胞CD8+T亚群表达水平,并测定肿瘤生长大小体积变化。采用t和χ^(2)检验。结果实验期间,5组中位肿瘤生长速率分别为149、136、81、75、68 mm^(3)/d。5组中位肿瘤体积分别为1.18、0.91、0.37、0.45、0.29 g。与HepG2组比较HepG2-FGL1-KO组和HepG2-LAG-3-KO组动物瘤体积显著小于HepG2组(t=7.582,P<0.05),HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组动物肿瘤体积又显著小于单独敲除组(t=3.953,P<0.05)。同时,5组中位CD8+T细胞亚群表达量分别为2.1×107、2.9×107、3.8×107、7.7×107、13.2×107。HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组CD8+T细胞亚群表达活性显著高于FGL1和LAG-3单抑制组(t=2.988,P<0.05),而两个单抑制组的CD8+T细胞亚群表达活性又显著高于HepG2对照组(t=6.416,P<0.05)。结论单一免疫检查点的抑制对于遏制肿瘤逃避免疫杀伤存在局限性,多个免疫检查点因子信号通路联合抑制相较于单一通路的单控,将显著调控细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活和对肿瘤细胞的敏感性毒性表达。

马方综合征临床实验室基因诊断

目的建立马方综合征(MFS)临床实验室基因诊断流程, 对MFS家系进行临床实验室基因诊断。方法利用二代高通量测序对2020年1月至12月到阜外华中心血管病医院(河南省人民医院心脏中心)就诊的2个MFS家系患者FBN1基因进行测序分析, 然后利用Sanger测序验证二代高通量测序结果, 同时对家系正常人及100名健康人进行突变位点Sanger测序以明确家系中FBN1基因致病性突变, 并于2个家系孕妇孕中期指导其进行产前诊断。结果 MFS临床实验室诊断显示2例MFS患者FBN1基因分别存在c.2560T>C 杂合突变、c.6772T>C杂合突变的致病性突变, 2个家系中正常人及100名健康人均未见此突变;产前诊断显示家系一胎儿存在FBN1基因c.2560T>C杂合突变, 为MFS患儿, 家系二胎儿FBN1基因未见突变, 建议继续妊娠, 产后随访结果与临床实验室诊断结果一致。结论成功建立了MFS临床实验室基因诊断流程, 对明确MFS临床诊断提供重要的参考依据。

马方综合征致缺血性卒中一例

马方综合征是一种常见的结缔组织疾病,患者可以出现心血管、眼部、骨骼体征,而合并脑梗死较少见,也是不明原因青年卒中少见病因的一种,早期的心脏彩色多普勒超声及全面的血管评估有助于提高临床诊断和治疗效果,早期干预可获得良好预后和生活质量。作者回顾性分析1例基因确诊的马方综合征导致的缺血性卒中的临床资料,并结合相关文献,分析探讨了马方综合征导致血管事件的可能原因。