普通针毛蕨黄酮类成分原芹菜素的血浆蛋白结合率的测定

目的:建立检测原芹菜素(protoapigenone)在人与鼠血浆药物浓度的高效液相色谱法(HPLC),测定原芹菜素在人与鼠血浆的蛋白结合率。方法:采用平衡透析法,结合HPLC测定原芹菜素在人与鼠血浆的蛋白结合率。结果:原芹菜素人血药透析袋内外平衡时间约为10h,在低、中、高(200,500,1000μg.L-1)质量浓度下,其血浆蛋白结合率为(90.5±1.2)%,(89.6±1.7)%,(91.4±1.4)%;鼠血药透析袋内外平衡时间约为6h,在低、中、高(200,500,1000μg.L-1)质量浓度下,鼠血浆蛋白结合率为(80.7±2.2)%,(81.1±1.8)%,(81.9±1.3)%。结论:原芹菜素在人、鼠血浆蛋白结合率之间差异有显著性(P<0.01),但同一样品低、中、高浓度间,蛋白结合率差异无显著性(P>0.05)。原芹菜素与人、鼠血浆蛋白具有较强的结合。

普通针毛蕨中原芹菜素与其糖苷对PDK-1/AKT途径的拮抗效应

目的:揭示原芹菜素与其糖苷之间的拮抗作用,并在分子水平上阐明这两个化合物对于PDK-1介导的AKT磷酸化的拮抗作用。方法:首先建立普通针毛蕨的HPLC指纹图谱,并确定目标化合物含量。而后通过免疫印迹实验,采用组合模式给药,证实了这两个化合物对于PDK-1介导的AKT磷酸化的拮抗作用。再后通过CETSA实验进一步证实了这两个化合物对PDK-1蛋白的竞争性结合行为,最后采用分子对接给予这种拮抗作用图像化的解释。结果:普通针毛蕨提取物中原芹菜素和原芹菜素葡萄糖苷的摩尔浓度分布为1.249μmol·L^-1和0.928μmol·L^-1。在该浓度下原芹菜素的抗肿瘤增殖效果可以被原芹菜素葡萄糖苷所抑制,且原芹菜素所介导的PDK-1下调也可以被原芹菜素葡萄糖苷所拮抗。同时CETSA实验进一步证实了这个两个化合物与PDK-1的竞争性结合。结论:本研究揭示了一个原芹菜素的拮抗因素,并为原芹菜素葡萄糖苷含量控制提供了依据。

民族药翠绿针毛蕨质量标准的研究

目的:建立翠绿针毛蕨药材质量标准,为进一步开发利用提供基础。方法:采用性状、显微鉴别法对该药材性状、显微特征进行描述;按照《中国药典》2015年版方法对水分、总灰分、酸不溶灰分进行测定;采用TLC定性鉴别;采用HPLC测定原芹菜素的含量,Amethyst C18-P色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温:25℃,检测波长:262 nm,以甲醇的水溶液作为流动相,梯度洗脱程序为0 min(30∶70)-40 min(100∶0),流速:1.0 mL/min。结果:翠绿针毛蕨显微特征明显,专属性良好;TLC斑点清晰,分离度良好;水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的平均值分别为11.1%,4.0%,2.0%,14.5%。含量测定原芹菜素与相邻峰完全分离,线性关系良好,加样回收率(n=6)为98.9%,RSD为1.9%,测定药材中原芹菜素含量范围为10.55~11.13 mg/g。结论:建立的方法可用于翠绿针毛蕨药材的质量控制。