超滤法测定甲基原薯蓣皂苷的血浆蛋白结合率

目的:测定甲基原薯蓣皂苷的血浆蛋白结合率。方法:采用超滤法结合高效液相色谱-串联质谱联用法(HPLC-MS-MS)对甲基原薯蓣皂苷与大鼠血浆以及健康人血浆的蛋白结合率进行测定。结果:甲基原薯蓣皂苷与大鼠血浆在20.0,100,200μg.mL-1下的血浆蛋白结合率分别为(94.6±0.16)%,(91.6±0.35)%,(86.10±0.60)%。甲基原薯蓣皂苷在以上3个浓度下与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为(82.11±5.12)%,(84.54±0.32)%,(88.52±1.02)%。结论:甲基原薯蓣皂苷与血浆蛋白具有较强的结合。

甲基原薯蓣皂苷对人肝微粒体中7种CYP450酶活性的影响

目的研究甲基原薯蓣皂苷对CYP450酶的7种亚型酶活性的影响。方法将MPD和CYP450酶7种亚型的特异性探针底物咖啡因（CYP1A2）、右美沙芬（CYP2D6）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、s-美芬妥因（CYP2C19）、氯唑沙宗（CYP2E1）、香豆素（CYP2A6）及咪达唑仑（CYP3A4）与人肝微粒体进行孵化反应，采用HPLC和LeMS／MS法测定对应的7种代谢产物（1，7-二甲基黄嘌呤、去甲右美沙芬、4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素和1-羟基咪达唑仑）的浓度，通过与对照组比较，确定MPD对以上7种酶活性的影响。结果MPD在1～10μmol·L^-1时对7种酶均无明显抑制作用，在100／μmol·L^-1时对CYP2D6有抑制趋势，但对其他6种酶无抑制作用，均无统计学意义（P〉0．05）。结论MPD在与以上6种酶（CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9和CYP2A6）代谢的药物联合用药时，发生药物相互作用的可能性较小。

HPLC测定不同产地粉萆薢中原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷含量

目的 采用高效液相色谱法（HPLC）测定不同产地粉萆薢中原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷含量.方法 采用Agilent C18 色谱柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长208 nm,柱温30 ℃,进样量20 μL.结果 原薯蓣皂苷在1.73～8.64 μg（r=0.999 1）范围内线性关系良好,平均回收率为101.98%（RSD=1.53%）;薯蓣皂苷在1.03～8.20 μg（r=0.999 6）范围内线性关系良好,平均回收率为101.60%（RSD=2.41%）.10 个不同产地粉萆薢中原薯蓣皂苷含量在0.89%～2.24%之间,薯蓣皂苷含量在0.75%～3.22%之间.结论 该方法操作简便,定量准确,重复性好,可作为粉萆薢药材质量控制方法.

甲基原薯蓣皂苷含量的高效液相色谱法测定

建立了测定甲基原薯蓣皂苷（MPD）含量的高效液相色谱法。以甲醇制样，采用氨基柱（200mm×4．6mm，5μm），以乙腈-水（体积比90：10）流动相等度洗脱，流速1.2mL·min^-1，柱温35℃，检测波长208nm；MPD在0．1008～1．008g·L^-1范围内线性关系良好（r=0．9998，n=6）；精密度实验的RSD为2．4％（n=6），重复性实验的RSD为1．6％（n=5），平均回收率为98．4％。3批MPD原料的批内平均含量均不少于92．89％（n=5），批间平均含量为93．78％（n=3）。

甲基原薯蓣皂苷静脉注射给予大鼠后体内代谢物的LC-MS^n分析

采用液相色谱-多级离子阱质谱法(LC-MSn)法,检测大鼠生物样本中的甲基原薯蓣皂苷(MPD)及其代谢产物,以推测MPD在大鼠体内的代谢途径。对大鼠静脉注射给予40 mg/kg的MPD,并收集尿液、血浆、胆汁和粪便等样本,经固相萃取(SPE)净化提取后,采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇(B)-水(A)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min。采用正负离子检测。在生物样本中共检测到14个代谢产物。通过与对照品的色谱行为和多级质谱特征相比对,鉴定了其中6个代谢产物,分别为Protodioscin(M3),26-O-β-D-Glucopyrannosyl-(25R)-furan-5-ene-3β,22α,26-trihydroxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2 or 4)-β-D–glucopyranoside(M5),MPD(M0),Pseudoprotodioscin(M7),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside(M9),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside(M10)和Dioscin(M11)。根据已有对照品的质谱裂解规律,用LC-MSn法推测了另外5个代谢物。其中Protodioscin(PD)和Dioscin是两个主要的代谢产物,其对应的生成途径是MPD在大鼠体内的主要代谢途径。代谢反应总体以一相代谢为主,主要是水解脱糖,同时检出2个二相代谢产物;代谢物结构变化主要发生在糖上,母核均无明显变化。

反相高效液相色谱法测定胡芦巴中原薯蓣皂苷的含量

目的用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定胡芦巴中原薯蓣皂苷的含量。方法采用HPLC法,色谱柱为Li-chrospher C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-水（8∶92,V/V）,检测波长为203 nm。结果含量测定的线性范围为0.108～1.296μg,回收率为96.37%,RSD为1.78%（n=6）。结论该法简便,灵敏准确,可用于胡芦巴中原薯蓣皂苷的质量控制。

不同性别及去花对穿龙薯蓣中薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷和总皂苷含量的影响

目的:探讨不同性别及去花对薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷含量的影响。方法:采用高效液相色谱法和比色法,测定不同时期穿龙薯蓣根茎中薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷和总皂苷的含量。结果:雌性植株薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷和总皂苷的含量显著高于雄性,雌性去花后含量明显降低,与雄性植株接近。结论:三者具有相似的季节积累规律,各发育时期含量变化不大。

穿山龙中原薯蓣皂苷的提取工艺研究

目标:优选穿山龙中原薯蓣皂苷的提取工艺.方法:采用正交试验法,以提取液中原薯蓣皂苷的含量作为指标,研究了提取溶媒、料液比、提取时间、提取次数四种因素对原薯蓣皂苷的提取影响;考察5种不同型号的大孔树脂对原薯蓣皂苷的吸附性能.结果:溶媒是提取原薯蓣皂苷的主要因素,最佳提取工艺为A3D2B3C2,AB-8型大孔树脂对原薯蓣皂苷的吸附性能最佳.结论:该工艺能较好的富集原薯蓣皂苷,具有一定的工业应用前景.

HPLC法测定采光方式对穿龙薯蓣薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷含量的影响

目的:探讨穿龙薯蓣无支架、树枝支架、木杆支架和网状支架等不同采光结构对药材质量的影响,从而确定适宜栽培方法。方法:HPLC法测药材中薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷含量。结果:薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷总含量分别是3.04%、3.95%、5.33%和4.86%,而野生穿龙薯蓣含量为4.04%。质量提高与光照强度增加有关。结论:网状支架提高穿龙薯蓣的质量,为其他藤本类药材栽培提供良好借鉴。

大孔吸附树脂纯化胡芦巴中原薯蓣皂苷的研究

以原薯蓣皂苷的含量作为考察指标,优选性能最佳的大孔吸附树脂,确定大孔吸附树脂分离纯化葫芦巴中原薯蓣皂苷的最佳工艺参数。结果表明:HP-20型大孔吸附树脂具有对原薯蓣皂苷最佳的分离纯化性能,工艺参数为:树脂药材质量比为8∶1,上柱吸附体积流量为4BV/h,树脂柱径高比为1∶12;洗脱剂流速为10BV/h,洗脱剂为70%乙醇,洗脱剂用量定为3BV。该分离纯化工艺稳定、可靠,分离纯化效果良好,可为实际生产实践提供理论依据。

伪原薯蓣皂苷对Ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞COX-2表达的影响及机制研究

为探究伪原薯蓣皂苷对Ox-LDL诱导的内皮细胞COX-2表达的影响。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入伪原薯蓣皂苷预处理细胞24 h,再以氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导HUVEC细胞表达COX-2;采用Real-time PCR和western blot分别检测了COX-2的mRNA和蛋白表达水平,以及与COX-2炎症信号通路相关的激酶活性。结果显示,伪原薯蓣皂苷剂量依赖的下调COX-2的表达,同时抑制p38MAPK的激酶活性。这些结果表明,伪原薯蓣皂苷可能通过抑制TLR2/p38MAPK通路而抑制内皮细胞炎症介质COX-2的表达,提示其对内皮细胞的抗炎效应。

米曲霉(Aspergillus oryzae)对原薯蓣皂苷的生物转化(英文)

目的:制备呋甾皂苷的生物转化产物。方法:利用米曲霉对原薯蓣皂苷(化合物1)进行转化,转化产物用大孔吸附树脂柱色谱,C18反相硅胶柱色谱,硅胶柱色谱以及高效液相色谱等进行分离纯化,通过光谱分析(FAB-MS,1HNMR,13CNMR)鉴定化学结构。结果:得到了5个转化产物,包括3个呋甾皂苷和2个螺甾皂苷。结论:米曲霉可以在保留原薯蓣皂苷的26-位葡萄糖的情况下水解3-位末端1→2鼠李糖生成次生呋甾皂苷(化合物4)。米曲霉也可以去掉原薯蓣皂苷的22-位羟基生成20(22)双键的呋甾皂苷产物(化合物3和5),并且继续水解26-位葡萄糖生成相应的螺甾皂苷(化合物2和6)。

穿山龙中原薯蓣皂苷杂质的分离与鉴定

目的对穿山龙Dioscorea nipponica Makino中原薯蓣皂苷所含杂质的化学成分进行研究。方法从穿山龙提取物中得到原薯蓣皂苷粗品,再采用大孔吸附树脂、制备HPLC法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分得3个杂质,经鉴定分别为黄山药皂苷H(dioscoreside H,1)、原纤细薯蓣皂苷(protogracillin,2)和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-呋甾烷-5-烯-3β,22ξ,26-三醇-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(26-O-β-D-glucopyranosyl-[25R]-furost-5-en-3β,22ξ,26-triol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl{1→4}-β-D-glucopyranoside,3)。结论化合物1和3为首次从穿山龙中分离得到。

伪原薯蓣皂苷对双侧卵巢切除诱导的apoE-/-小鼠心脏功能损伤的保护作用

目的探讨伪原薯蓣皂苷(PPD)对双侧卵巢切除(OVX)诱导的apoE-/-小鼠心脏功能损伤的保护作用。方法采用8周apoE-/-雌鼠进行双侧卵巢切除手术,并随机分为假手术组(sham)、OVX组、OVX后给予伪原薯蓣皂苷组(OVX加PPD)、OVX后给予17β-雌二醇组(OVX加E2)。手术后高胆固醇饮食12周,建立绝经后雌鼠心脏损伤模型,最后4周隔天给予伪原薯蓣皂苷(2 mg/kg,腹腔注射)或E2 (0.5 mg/kg,肌注)。检测血浆中载脂蛋白和血脂含量;组织学观察心脏形态;心电图和超声心动检测心功能指标;实时定量RT-PCR法检测心房利钠因子(ANF)及炎症因子表达水平。结果与sham组相比,OVX显著增加了血浆中总胆固醇(TG)的含量,给予伪原薯蓣皂苷可以有效抑制该作用[(115±9)、(68±8)mg/d L](P <0.05)。心脏形态、心电图和超声心动结果显示,OVX术后导致小鼠心肌肥厚和心脏功能紊乱,给予伪原薯蓣皂苷后,心率[(266±8)/min、(468±11)/min]、P-R间期[(0.071±0.001)、(0.057±0.002)s]、QRS间期[(0.031±0.003)、(0.018±0.002)s)]、左室舒张末期内径(LVIDd)[(4±0.07)、(3.59±0.06)mm]、左室收缩期内径(LVIDs)[(2.42±0.07)、(2.03±0.04)mm](P <0.05)等心功能指标都得到了有效恢复。与OVX组相比,给予伪原薯蓣皂苷降低了ANF的m RNA的表达水平[(4.06±0.71)、(2.64±0.23)],同时抑制了炎症因子TNF-α[(13.43±1.01)、(6.12±0.95)]、IL-1β[(5.03±0.97)、(2.45±0.57)]和IL-6[(7.41±0.92)、(5.85±0.65)]的m RNA表达(P <0.05)。结论伪原薯蓣皂苷能有效缓解OVX诱导的apoE-/-小鼠血脂紊乱及心脏功能损伤。其作用与雌激素受体通路及下游炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)和心肌肥厚的检测标志物ANF的m RNA的表达水平密切相关。

HPLC法测定蒺藜提取物中原薯蓣皂苷

蒺藜，别名刺蒺藜、白蒺藜、硬蒺藜，为蒺藜科植物蒺藜Tribulus terrestris L．的干燥成熟果实，分布于全国各地，在长江以北最普遍。蒺藜味苦辛，性温，有平肝解郁、活血祛风、明目、止痒功能，用于头痛眩晕，目赤多泪，皮肤瘙痒，胸胁胀闷，经闭瘕瘕口。蒺藜中含有甾体皂苷。从蒺藜中提取的原薯蓣皂苷（protodioscin）能增强性欲，

核磁共振定量技术测定原薯蓣皂苷对照品的含量

目的:1H核磁共振定量技术测定原薯蓣皂苷的含量。方法:采用Bruker AVANCEII 500MHz超导脉冲傅里叶变换核磁共振波谱仪,以氘代吡啶为溶剂、TMS为内标,测定原薯蓣皂苷的核磁共振氢谱,通过样品定量峰与内标物质响应峰面积及质子当量重量,计算原薯蓣皂苷的含量。结果:以化学位移为δH 5.84处的氢信号作为定量峰,其含量测定的重复性、精密度、稳定性、耐用性的RSD值均小于2%。测得3批原薯蓣皂苷样品的绝对含量分别为98.56%、98.43%、98.63%。结论:在没有对照品的情况下,核磁共振内标法可用于原薯蓣皂苷的含量测定。

RP-HPLC同时测定穿山龙药材中原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷的含量

目的:建立测定产地黑龙江大兴安岭穿山龙供试品中水溶性皂苷含量的方法。方法:采用RP-HPLC,Diamonsil(钻石)C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温30℃。结果:原薯蓣皂苷浓度在50～500 mg·L-1、甲基原薯蓣皂苷在35～350 mg·L-1、伪原薯蓣皂苷质量浓度在15～150 mg·L-1与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9(n=6)。方法学考察中各项实验结果的RSD均<3%。结论:方法重复性好,具有良好的回收率,稳定性佳,为穿山龙药材的质量控制提供了参考。

伪原薯蓣皂苷联合运动对高脂血症大鼠肝脏脂代谢和抗氧化功能的影响

伪原薯蓣皂苷(pseudoprotodioscin, PPD)是盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis)中的一种甾体皂苷,可抑制胆固醇和甘油三酯合成。本研究考察了伪原薯蓣皂苷联合运动对高脂血症(HLP)大鼠肝脏脂代谢和抗氧化功能的影响。将大鼠分为C组、HLP组、E组、L-PPD组、M-PPD组、H-PPD组、E+H-PPD组,每组12只大鼠。C组为对照大鼠,其他组为高脂血症模型大鼠。C组和HLP组大鼠安静饲养。E组大鼠进行跑台运动。L-PPD组、M-PPD组、H-PPD组大鼠分别灌胃25、50、100 mg·kg-1·d-1的伪原薯蓣皂苷。E+H-PPD组大鼠在跑台运动前1 h灌胃100 mg·kg-1·d-1的伪原薯蓣皂苷溶液。干预时间为8周。分别检测各组大鼠的体重、血清脂代谢标志物(TC, TG, LDL-c, HDL-c, FFA)、肝脏抗氧化标志物(SOD, CAT和MDA)水平。通过HE染色观察大鼠肝脏形态。通过RT-qPCR检测肝脏SREBP1c、FAS、ABCA1、HMGCR、CYP7A1和ACC m RNA水平。通过Western blot检测肝脏Nrf2和Keap-1蛋白表达水平。结果显示,与E组和H+PPD组比较,E+H-PPD组大鼠的体重降低,血清TC、TG、LDL-c和FFA水平降低,血清HDL-c水平升高,肝脏空泡化脂滴减少,肝脏SOD和CAT水平升高,肝脏MDA水平降低,肝脏SREBP1c、FAS、HMGCR和ACC m RNA水平降低,肝脏ABCA1和CYP7A1 mRNA水平升高,肝脏细胞核Nrf2蛋白表达水平升高,肝脏Keap-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。本研究表明,伪原薯蓣皂苷联合运动可纠正高脂血症大鼠肝脏脂代谢紊乱并提高抗氧化功能。