细胞信号肽酶复合体亚基1与牛病毒性腹泻病毒复制的相关性分析

旨在探明信号肽酶复合体亚基1(signal peptidase complex subunit 1,SPCS1)影响牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的作用。使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向SPCS1基因的sgRNA,克隆至慢病毒载体lentiCRISPR v2,连同包装质粒pSPAX2和pMD2.G转染至人胚肾细胞HEK-293T中,包装慢病毒并感染MDBK细胞,用嘌呤霉素筛选5代后获得敲低SPCS1蛋白后稳定表达的细胞,用Western blot检测SPCS1蛋白表达的情况;使用荧光定量PCR和免疫荧光分析检测BVDV感染SPCS1蛋白敲低细胞不同时间后5′非翻译区(untranslated region,UTR)mRNA的水平和双链RNA(double-stranded,dsRNA)积累,利用倒置显微镜观察BVDV致细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况,根据Reed-Muench方法测定病毒滴度变化情况。结果:Western blot检测SPCS1蛋白表达量明显下降,成功构建SPCS1敲低(knockdown,KD)细胞;BVDV感染SPCS1 KD细胞后与对照Scramble相比,BVDV 5′UTR mRNA水平和dsRNA量均显著性降低(P<0.01),CPE现象推迟并减弱,子代病毒滴度显著性下降(P<0.01),最高降低95.8%。SPCS1敲低后显著性影响BVDV复制,为BVDV防控新技术的建立提供理论依据。

产新德里金属β-内酰胺酶-1醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体碳青霉烯酶、外膜孔蛋白和外排泵相关基因检测

目的研究临床分离的产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)醋酸钙-鲍曼不动杆菌(Acb)复合体耐碳青霉烯类药物的机制。方法通过VITEK-2 compact全自动微生物分析仪鉴定、42℃生长实验、聚合酶链反应(PCR)检测OXA-51-like基因,rpoB基因序列测定对收集的耐碳青霉烯类Acb复合体进行菌种鉴定。利用PCR筛查是否携带NDM基因,通过测序确定NDM型别并进一步检测其他碳青霉烯酶相关基因、外膜孔蛋白基因和外排泵基因。利用DiversiLab细菌DNA指纹图谱分析系统对产NDM-1的Acb复合体进行基因分型。结果共筛选出10株产NDM-1的Acb复合体,其中5株为Pittii不动杆菌,3株为Nosocomialis不动杆菌,2株为鲍曼不动杆菌。在5株Pittii不动杆菌中,2株检出OXA-58-like基因,5株检出外膜孔蛋白oprD基因和外排泵adeI,adeK基因,4株检出adeJ基因。3株Nosocomialis不动杆菌中均检出外膜孔蛋白carO和oprD基因以及外排泵adeB,adeI,adeJ和adeK基因。2株鲍曼不动杆菌中均检出外膜孔蛋白carO基因以及外排泵adeB,adeI,adeJ和adeK基因,1株检出外膜孔蛋白oprD基因,1株检出OXA-23-like基因。鲍曼不动杆菌、Pittii不动杆菌和Nosocomialis不动杆菌基因分型结果均分为两型。结论在福建省Pittii不动杆菌中同时检出NDM-1和OXA-58-like基因,在鲍曼不动杆菌中同时检出NDM-1和OXA-23-like基因。本地分离的Nosocomialis不动杆菌与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药可能与AdeIJK外排泵及NDM-1酶作用有关;Pittii不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药则可能是由外膜孔蛋白CarO缺失、AdeIJK外排泵及NDM-1酶共同作用的结果。

凝血指标与PDGF-BB、ET-1在不同严重程度子痫前期中的水平及对妊娠结局的预测价值

目的 探讨凝血指标[部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)]与血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、内皮素-1(ET-1)在不同严重程度子痫前期(PE)孕妇中的水平及对妊娠结局的预测价值。方法 选取2021年1月至2023年3月该院收治的PE孕妇118例作为研究对象,根据病情严重程度分为PE组(71例)与重度PE组(47例);另选取同期在该院产检的健康孕妇59例作为对照组。对比3组APTT、PT、FIB、D-D、PDGF-BB、ET-1水平;分析APTT、PT、D-D、FIB、PDGF-BB、ET-1水平与PE严重程度的相关性。PE患者均随访至分娩,并根据妊娠结局将其分为妊娠结局良好组和妊娠结局不良组;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析APTT、PT、D-D、FIB、PDGF-BB、ET-1对PE患者妊娠结局的预测效能;分析APTT、PT、D-D、FIB、PDGF-BB、ET-1对妊娠结局的影响。结果 重度PE组与PE组APTT、PT短于对照组,FIB、D-D、PDGF-BB、ET-1水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);而重度PE组APTT、PT短于PE组,FIB、D-D、PDGF-BB、ET-1水平高于PE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,APTT、PT与PE严重程度呈负相关(r=-0.505、-0.513,P<0.05),而FIB、D-D、PDGF-BB、ET-1水平与PE严重程度呈正相关(r=0.559、0.607、0.618、0.642,P<0.05)。118例PE患者均完成了随访,其中妊娠结局良好组92例,妊娠结局不良组26例。妊娠结局不良组APTT、PT短于妊娠结局良好组,FIB、D-D、PDGF-BB、ET-1水平高于妊娠结局良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,APTT、PT、FIB、D-D、PDGF-BB、ET-1预测PE患者妊娠结局不良的曲线下面积分别为0.849、0.767、0.828、0.768、0.743、0.763,最佳截断值分别为29.39 s、11.85 s、5.44 g/L、0.93 mg/L、116.29 ng/L、2.24 mg/L;以ROC曲线获取的最佳截断值为分界值分为低值与高值,其中APTT、PT低值PE患者妊娠结局不良的风险是高值患者的15.231、7.411倍;FIB、D-D、PDGF-BB、ET-1高值PE患者妊娠结局不良的风险是低值患者的7.398、4.861、4.565、6.300倍。结论 APTT、PT、FIB、D-D、PDGF-BB、ET-1与PE病情程度显著相关,可作为PE患者妊娠结局的独立预测因子。

关节软骨细胞复合胶原海绵异位构建组织工程化软骨组织的可能性

目的观察兔关节软骨细胞与胶原海绵在体外复合培养以及体内植入后异位成软骨情况。方法采用酶消化法分离、培养幼兔关节软骨细胞,取第三代细胞以3×107/ml密度均匀接种于胶原海绵中,分别通过倒置显微镜和扫描电镜观察软骨细胞在载体材料上生长增殖情况;将体外培养10d的软骨细胞/胶原海绵复合物植入裸鼠背部皮下,术后12周取材,进行大体观察和HE染色。结果软骨细胞均匀分布于胶原海绵的孔壁和网眼内,并可分泌基质样物;复合培养物体内植入12周后可以形成新生透明软骨组织。结论胶原海绵可以作为软骨细胞生长的支架载体,异位构建出组织工程化软骨组织。

血红素氧合酶系统对一氧化碳中毒后体外培养少突胶质细胞Nogo-A的影响

背景:鉴于Nogo-A蛋白及其受体Ng R分别表达于中枢神经系统的少突胶质细胞与神经元,而一氧化碳中毒迟发性脑病患者颅脑影像学上白质脱髓鞘突出,推测Nogo-A蛋白及NgR系统参与急性一氧化碳中毒脑损害,可能与一氧化碳中毒迟发性脑病关系密切。内源性一氧化碳(CO)是机体重要的气体信使分子之一,主要是由血红素氧合酶代谢产生的,其对Nogo-A体系的影响目前亦未见报道。目的:采用外源性CO处理体外培养少突胶质细胞,并用锌原卟啉9抑制血红素氧合酶系统活性,观察少突胶质细胞Nogo-A在mR NA及蛋白质水平的表达情况。方法:将体外培养的少突胶质细胞分为对照组、CO组和锌原卟啉9组。CO组和锌原卟啉9组细胞置于含体积分数1%CO的密封室内培养。锌原卟啉9组细胞在CO处理前,预先在培养液中加入10μmol/L锌原卟啉9。首先比较培养6,24和48 h时细胞中Nogo-A mR NA和蛋白的表达水平,检测表达水平最高时CO组和锌原卟啉9组细胞中Nogo-A mR NA和蛋白表达水平的差异。结果与结论:CO组细胞中Nogo-A mR NA和蛋白的表达水平均高于对照组,且都在培养24 h时表达水平最高。培养24 h时锌原卟啉9组细胞中Nogo-A m RNA和蛋白表达水平均高于CO组。提示排除在体情况中一氧化碳中毒所致的缺氧的影响,单纯外源性CO可诱导体外培养少突胶质细胞Nogo-A m RNA及蛋白表达水平增加;血红素氧合酶系统可抑制Nogo-A m RNA及蛋白的表达水平。

CYP2C9及VKORC1基因多态性对心脏瓣膜置换术后华法林个体剂量差异的研究

目的研究湖北地区汉族人细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)基因和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因多态性分布特点及其对华法林稳态剂量的影响。方法收集2012年3—8月湖北地区汉族临床使用华法林的患者108例作为华法林组,选择同期健康受试者85名为对照组。采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测CYP2C9和VKORC1基因型,并比较不同基因型华法林稳态剂量。结果两组基因型频率和等位基因频率分布比较差异无统计学意义(P>0.05)。华法林组中CYP2C9基因*1/*3型较*1/*1型华法林稳态剂量小,VKORC1基因AA型较GA型华法林稳态剂量小(P<0.05,P<0.01)。除了检测的3个多态位点,还发现了50多个变异位点。结论在湖北地区汉族人群中,存在CYP2C9和VKORC1基因多态性,且不同基因型患者间华法林稳态剂量存在差异,华法林基因相关变异位点需要进一步证实。

CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林个体化用药的临床研究

目的：探讨细胞色素P450同工酶2C9（CYP2C9）及维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1（VKORC1）基因多态性对华法林个体化用药的影响。方法110例临床初次和维持口服华法林抗凝治疗的患者，记录患者的年龄、性别、身高、体重和服用华法林5-7 d后每次国际标准化比值（INR）的测定值， INR达到目标值时华法林的总用量以及华法林的日均用量。同时检测CYP2C9＊1、＊2、＊3位点和VKORC1-1639 AA、AG、GG位点基因型。结果对于初次口服华法林的患者， CYP2C9＊2或＊3基因型患者在抗凝治疗初期易发生INR值超过治疗窗（INR〉3.0）；而VKORC1-1639 AG或GG基因型患者INR达标时间明显延长，并且INR达标时所服用的华法林总剂量和日均剂量均高于AA基因型患者。结论 CYP2C9和VKORC1基因检测对于指导患者华法林的个体化用药具有一定的临床意义。

肝细胞癌中癌-睾丸抗原SSX2与SCP-1mRNA表达的研究

目的检测癌-睾丸抗原滑膜肉瘤X断裂点2(SSX2)与联会复合体蛋白1(SCP-1)在肝细胞癌组织中的表达。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对45例肝细胞癌组织和相应癌旁肝组织中SSX2与SCP-1的mRNA进行检测。结果在肝细胞癌组织中SSX2 mRNA表达阳性率28.9%(13/45),SCP-1mRNA表达阳性率22.2%(10/45),相应的癌旁肝组织均无表达,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。SSX2与SCP-1的mRNA表达与AFP阳性率、HbsAg阳性率、肿瘤大小、有无肝硬化情况和病理分级等无相关性(P>0.05)。SSX2 mRNA与SCP-1 mRNA表达的相关性分析提示两者无相关性(P>0.05)。结论 SSX2与SCP-1在HCC中呈低频率的表达。

创伤性骨折患者Fib、APTT、D-D、GSP、EGF及TGF-β1的变化及意义

目的 探究创伤性骨折后患者Fib、APTT、D-D、GSP、EGF及TGF-β1的变化及意义。方法 2019年2月至2021年5月作为本次研究的时间区间,选取创伤性骨折患者共100例为实验组,于同期选取健康体检者50例,为对照组。比较两组患者Fib、APTT、D-D、GSP、EGF及TGF-β1水平的差异性,同时采用Pearon相关性分析法分析Fib、APTT、D-D、GSP、EGF及TGF-β1水平与创伤性骨折患者的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Fib、APTT、D-D、GSP、EGF及TGF-β1指标对创伤性骨折的诊断价值。结果 实验组Fib、D-D水平显著高于对照组,APTT显著少于对照组,比较差异具有统计学意义(P<0.05)。入院时,实验组GSP、EGF、TGF-β1水平显著高于对照组,比较差异具有统计学意义(P<0.05);术后2周,实验组GSP水平与对照组比较有显著差异(P<0.05),实验组EGF、TGF-β1水平与对照组比较无显著差异(P>0.05)。Pearson相关性分析表明,患者APTT、Fib、D-D、GSP、EGF、TGF-β1水平与创伤性骨折呈正相关。ROC分析结果显示,APTT、Fib、D-D、GSP、EGF、TGF-β1及六项联合指标诊断创伤性骨折ROC曲线下面积AUC分别为0.843、0.849、0.889、0.800、0.785、0.907、0.928。可知,六项联合指标诊断创伤性骨折的价值高于单项指标,其敏感度、特异度分别为90.0%、92.0%。结论 创伤性骨折后患者Fib、D-D、GSP、EGF及TGF-β1水平均显著升高,APTT水平降低,且以上指标与创伤性骨折有着密切关系,同时可作为创伤性骨折的诊断指标。

CYP2C19和VKORC1基因多态性在指导华法林个体化用药中的价值

探讨CYP2C19、VKORC1基因多态性对华法林个体化用药的影响。方法 2019年1月~2020 年12月选取我院服用华法林抗凝的100例住院患者,检测 CYP2C19 *1、*2、*3 位点和VKOR C1-1639 AA 、AG 、GG 位点基因型,对患者的年龄、性别、身高、基础INR值、ALB值、ALT值和INR首次达标的时间,INR达标后华法林的总用量以及日均用量的信息进行收集整理。结果 VKORC1基因方面:排除CYP2C19基因型差异的干扰,VKORC1-1639AA与VKORC1-1639 AG /GG 基因型患者相比, INR首次达标的天数短(P<0.05),且基因型AA患者INR指标合格时,需要的华法林的总量高以及日平均用量均少于基因型AG/GG患者(P<0.05);CYP2C19方面:排除VKORC1基因型差异的干扰, CYP2C19*2/*3基因患者相比CYP2C19*1基因患者,无论是首次达标天数还是华法林总量均是最低;若两种基因型同时变异的患者与基因型为野生型患者比较,INR初次达标天数略有延长,所需的华法林总量也有所增加。结论 CYP2C19 和 VKORC1基因检测对于指导患者华法林的临床个体化用药具有一定价值,减少不良出血事件的发生概率,增加患者使用华法林的安全性。

维生素B_(1)在中枢认知功能中的作用研究进展

维生素B_(1),又称为硫胺素,是影响脑能量代谢的关键物质。硫胺素的代谢物焦磷酸硫胺素是糖酵解、三羧酸循环及磷酸戊糖旁路的三种关键酶(丙酮酸脱氢酶复合体、α-酮戊二酸脱氢酶复合体和转酮醇酶)的辅因子。脑内硫胺素水平以及硫胺素依赖酶的活性和表达会影响脑内能量代谢,进而影响中枢神经系统的认知功能。补充硫胺素对中枢神经认知功能异常有改善作用。本文对近年来相关的研究进展进行综述,以阐明脑内硫胺素缺乏及硫胺素依赖酶的功能与表达的损伤对中枢认知功能的影响,为脑能量代谢障碍的相关研究提供参考。

藜麦复合物调控SIRT1/PGC-1α通路改善糖尿病小鼠肝细胞损伤

目的基于SIRT1/PGC-1α通路探讨不同藜麦含量的藜麦复合物对糖尿病小鼠肝损伤的防治作用。方法将23只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(ZC,n=6)、模型组(MX,n=6)、藜麦复合物1组(LM1,n=6)、藜麦复合物2组(LM2,n=5)。采用高脂饮食联合链脲佐菌素诱导建立2型糖尿病小鼠模型。给药12周后,全自动生化仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)含量,并计算胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,IRI)。免疫组化及Western blot测定肝脏组织中沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)蛋白的表达水平;HE染色检测肝脏病理变化。结果与ZC组比较,MX组ALT、AST、TC、FBG含量及IRI均升高(P<0.01或P<0.05),TG、FINS含量均有升高趋势(P>0.05)。与MX组比较,LM1组AST、TG、FBG、FINS含量及IRI明显降低(P<0.01或P<0.05);LM2组ALT、AST、FBG、FINS含量及IRI明显降低(P<0.01或P<0.05)。病理结果显示MX组小鼠肝细胞呈明显脂肪病变,局灶性坏死并伴有炎性细胞浸润;LM1和LM2组可见脂肪空泡和炎性细胞不同程度上明显减少,细胞坏死损伤减轻,肝细胞病变程度显著轻于MX组,其中LM2组改善最明显。免疫组化与Western blot结果均显示,与ZC组比较,MX组肝脏组织SIRT1及PGC-1α蛋白表达水平明显降低(P<0.01或P<0.05));与MX组比较,LM1及LM2组PGC-1α蛋白表达明显升高(P<0.01或P<0.05)。免疫组化结果显示,LM1组SIRT1的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论藜麦复合物可能通过促进SIRT1/PGC-1α的表达来改善胰岛素抵抗和糖脂代谢紊乱,从而减轻糖尿病肝损伤,且含量更高的藜麦复合物治疗效果更为显著。

O型谷胱甘肽转移酶1通过抑制泛素化促进MHCII表达

目的研究谷胱甘肽转移酶omega1(GSTO1)如何调控骨髓来源的树突状细胞(BMDCs)的功能。方法利用流式细胞仪和共聚焦显微镜检测GSTO1缺陷及GSTO1抑制剂处理的BMDCs表面MHCII分子的表达。将BMDCs与来自OTII小鼠的CD4 T细胞在OVA存在下共培养,并检测IFN-γ的产生。利用流式细胞仪检测GSTO1抑制剂处理的BMDCs中MHCII分子的循环和内化。实时定量PCR检测GSTO1抑制剂处理的BMDCs中MHCII分子的转录水平。Western blot检测GSTO1抑制剂处理的BMDCs中MHCII分子的总蛋白质水平。免疫共沉淀技术检测GSTO1抑制剂处理后MHCII分子的泛素化水平。结果GSTO1缺陷或GSTO1抑制剂不影响BMDCs的增殖和凋亡,但会降低细胞膜上抗原递呈分子MHCII分子的表达。GSTO1缺陷或GSTO1抑制剂处理的BMDCs活化CD4 T细胞的能力受损。在GSTO1抑制剂处理的BMDCs中,MHCII分子的循环和内化过程正常。GSTO1抑制剂不影响MHCII分子的转录,但会降低其总蛋白质水平。另外,在GSTO1抑制剂处理的BMDCs中,MHCII的泛素化水平增加,蛋白酶体抑制剂MG132能够恢复GSTO1抑制剂处理后BMDCs的细胞膜MHCII表达水平。结论这些数据表明,BMDCs中的GSTO1通过抑制MHCII分子的泛素化,促进MHCII的表达,从而提高CD4 T细胞的激活能力。

异柠檬酸脱氢酶1突变在胶质瘤免疫治疗中的研究进展

胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤,其恶性程度高、侵袭性强且预后差,目前亟需新的治疗方法。随着基因测序技术和分子生物技术的发展,研究者发现异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变在低级别胶质瘤和继发性胶质母细胞瘤中普遍存在。IDH1突变与胶质瘤的发生发展密切相关,是一个值得关注的潜在治疗靶点,可为胶质瘤的治疗提供新的方向。本文概述了异柠檬酸脱氢酶(IDH)家族的生理功能、IDH突变在胶质瘤形成中的意义、IDH1突变与胶质瘤免疫治疗及预后的关系,以及IDH1突变作为主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原可能产生的作用。

新型血栓标志物、D二聚体、纤维蛋白原降解产物联合检测在妊高症中的诊断价值研究

探讨联合检测新型血栓标志物凝血酶-抗凝血酶III复合物(TAT)、α2纤溶酶-纤溶酶抑制剂复合体(PIC)、血栓调节蛋白(TM)和组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合体(t-PAI-C)与D-二聚体(D-D)和纤维蛋白原降解产物(FDP)在妊高症中诊断价值。方法:检测120例妊高症孕妇及40例正常妊娠孕妇临产前血浆中的TAT、PIC、TM、t-PAI-C、D-二聚体和FDP含量,同时对两组孕妇的妊娠结局进行统计。结果:与正常妊娠的孕妇相比较,妊高症孕妇的TAT、PIC、TM、D-D和FDP均明显升高,但TAT、PIC和TM的升高程度与病情严重程度一致;重度妊高征组总异常妊娠率为71.43%,显著高于轻度组的7.12%和中度组的34.78%。结论:对妊高症孕妇进行TAT、PIC、TM、t-PAI-C、D-D和FDP的联合检测,可及时发现凝血系统和纤溶系统的激活,及早阻断异常妊娠的发生。

干扰素诱导表达的淋巴细胞抗原6复合体E和干扰素诱导蛋白1基因与系统性红斑狼疮患者病情活动性的关系

目的 探讨系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)中干扰素诱导表达的淋巴细胞抗原 6复合体E(LY6E)基因与干扰素诱导蛋白 1(IFIT1)基因的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动的相关性。方法 收集 14 4例SLE患者、2 7例非SLE患者与 5 9名正常对照人群的临床资料 ,取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA ,运用SYBRgreendyeⅠ实时定量聚合酶链反应 (PCR)在ABIPRISM 790 0H基因测序仪上检测患者组和对照组的LY6E和IFIT1mRNA定量表达水平 (以 -ΔΔCT值表示 )的差异 ,并与病情活动度进行分组比较 ,分析其意义。结果 ( 1)SLE患者总体的LY6EmRNA -ΔΔCT值 ( 5 5± 2 0 )显著高于非SLE患者 ( 3 4± 1 7,P =0 0 0 0 )和正常人 ( 4 5± 1 6 ,P =0 0 0 1)。 ( 2 )SLE活动组的LY6E和IFIT1的mRNA -ΔΔCT值 ( 6 2± 1 8,6 5±2 6 )均显著高于SLE非活动组 ( 4 4± 1 8,4 1± 2 6 ) (均P =0 0 0 0 )。 ( 3)SLE患者组的LY6E和IFIT1mRNA -ΔΔCT值与SLEDAI积分、符合SLE分类标准的条数之间有相关性 (P <0 0 0 1)。结论 作为干扰素诱导表达的基因 ,LY6EmRNA定量水平的升高对SLE患者的诊断有一定的特异性 ,LY6EmRNA和IFIT1mRNA的实时表达水平对SLE患者的病情活动度判断均有较大价值 。

原小檗碱类多靶点抗老年性痴呆症药理作用

原小檗碱是一类异喹啉生物碱,具有相同的药效基团。本研究检测了以小檗碱和四氢黄藤素为代表的原小檗碱多靶点抗AD效应及分子作用机制。以人神经母细胞瘤SH-SY5Y为研究对象,利用Western blot检测药物对细胞全长APP和BACE1蛋白水平的影响;ELISA技术检测细胞外可溶性淀粉样前体蛋白α(sAPPα)的分泌;酶活性检测试剂盒检测乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性。结果显示,药物处理细胞24 h后,二者均能显著地抑制BACE1蛋白的表达,并可使sAPPα的分泌显著增加,但未见细胞APP蛋白含量明显变化,同时对该细胞的AchE的活性具有显著的抑制作用。以上结果证明:原小檗碱生物碱药理活性涉及预防和减少Aβ沉积和增强乙酰胆碱对脑胆碱受体的作用,并通过细胞自身的代谢增加具有神经营养作用的sAPPα的分泌。提示此类化合物具有多靶点抗老年痴呆的潜能,通过结构优化改造,将有望获得副作用小的新一代抗AD有效药物。

黄芪甲苷通过SIRT1/PGC-1α通路促进退变的髓核细胞增殖

目的探究黄芪甲苷对退变髓核细胞功能的影响及其作用机制。方法原代培养正常与退变髓核细胞并观察,免疫组化检测细胞中胶原蛋白Ⅱ(collagenⅡ)的表达;分别采用20、40、60、80μg/mL的黄芪甲苷处理细胞,通过CCK-8和MTT试剂盒检测细胞活力和增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1(PGC-1α)的表达及其乙酰化和磷酸化水平;比色法检测丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、β-galactosidase和三磷酸腺苷(ATP)的含量。结果与正常髓核细胞相比,退变髓核组织中坏死细胞更多,且collagenⅡ表达降低;细胞经不同浓度黄芪甲苷处理后,40μg/mL黄芪甲苷不仅能显著提高退变髓核细胞活力,促进细胞增殖并抑制其凋亡,而且能上调细胞中SIRT1、PGC-1α的蛋白表达和PGC-1α磷酸化水平,下调PGC-1α乙酰化水平,增加SOD和ATP含量,降低MDA和β-galactosidase含量。结论黄芪甲苷可能通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路促进髓核细胞的增殖和存活。

非诺贝特对心脏成纤维细胞胶原合成的影响及作用机制

目的过氧化物酶增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)具有心血管保护作用,但其对心肌纤维化的影响及作用机制尚不清楚。文中探讨PPARα激动剂非诺贝特(Fenofibrate)对糜酶诱导的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CF)胶原合成的影响及细胞内信号转导机制。方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CF,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平,Western blot检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/3及Smad7的蛋白表达水平。结果①非诺贝特浓度依赖性地抑制糜酶诱导的CF中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,其中50和100μmol/L组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平均较糜酶组显著减少(P<0.01)。②不同浓度的非诺贝特预处理组CF的TGF-β1蛋白表达水平呈浓度依赖性减少,其中50和100μmol/L组均较糜酶组明显减少(P<0.05,P<0.01)。③不同浓度的非诺贝特预处理后,p-Smad2/3蛋白表达水平呈递减趋势,Smad7蛋白表达水平呈递增趋势。结论 PPARα激动剂非诺贝特可抑制糜酶诱导的大鼠CF胶原合成,其机制可能与其下调TGF-β1和p-Smad2/3、上调Smad7蛋白表达有关。

CYP2C9、VKORC1基因多态性及患者临床特征对心脏瓣膜置换术后华法林稳态剂量的影响

目的研究湖北地区汉族人细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因型和临床特征与华法林稳态剂量的相关性。方法收集2012年3—12月在我院行心脏瓣膜置换术后临床使用华法林的患者131例,记录患者的年龄、身高、体重、国际标准化比值(INR)、华法林稳态剂量等指标。采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测CYP2C9和VKORC1基因型。对基因型及临床特征与华法林稳态剂量进行直线相关及多元回归分析。结果 131例中CYP2C9基因型检测有125例为*1/*1型、6例为*1/*3型、未发现*2突变,*1/*3型较*1/*1型华法林需求量少(P<0.05);VKORC1基因型检测有105例为AA型、25例为杂合子GA型、1例为纯合子GG型,AA型较GA型华法林需求量少(P<0.01)。相关性及多元回归分析均显示华法林稳态剂量与患者的年龄及不同的基因型有关。结论在湖北地区汉族人群中,存在CYP2C9和VKORC1基因多态性,同时华法林稳态剂量与年龄及不同的基因型有关。