原钙黏蛋白7的结构和功能及与肿瘤的关系

钙黏附蛋白是一类钙依赖性的黏附分子,是一种细胞跨膜糖蛋白,介导正常组织、肿瘤组织中细胞-细胞间的黏附作用,原钙黏蛋白(protocadherin,PCDH)是其最大的亚家族。PCDH广泛分布于中枢神经系统,根据基因结构分为非成簇原钙黏蛋白和成簇原钙黏蛋白。PCDH7属于非成簇PCDHs家族,在人类基因组中定位于4p15,主要在人类的脑和心脏中表达,具有与经典钙黏附蛋白相似的作用,介导细胞之间的识别和黏附。在多种肿瘤中均检测到不同程度PCDH7的异常表达,PCDH7可能与肿瘤的增殖、侵袭、转移和预后相关。本文对PCDH7的基因结构和功能与肿瘤的关系作一综述。

羊骨胶原钙螯合肽酶解工艺的研究

本试验采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶四种蛋白酶酶解羊骨胶原蛋白,以酶解液中游离钙含量为试验指标,采用正交实验以及极差分析法确定了酶解羊骨蛋白获得胶原钙螯合肽的最佳用酶和酶解工艺条件。试验结果表明:胃蛋白酶为最佳用酶,最佳酶解工艺条件为:酶解时间6h,底物浓度为0.2kg/L,酶用量为1900U/g,酶解温度37℃,最适pH值3.0。酸性条件有利于钙的溶出。

曲古抑菌素A通过上调原钙黏蛋白9表达抑制人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响,及其可能的分子机制。方法体外常规培养SGC-7901细胞至对数生长期,给予不同浓度TSA(5、10、20、40、80、160 nmol/L)处理48 h,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,脂质体介导法将人原钙黏蛋白9(PCDH9)真核表达质粒转染SGC-7901细胞并筛选出稳定表达的细胞系,Transwell实验检测迁移率和侵袭率,RT-PCR法检测PCDH9 mRNA表达水平,免疫印迹法(Western blotting)检测PCDH9、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达水平。结果 TSA在80 nmol/L以上时对人胃癌SGC-7901细胞活力有显著的抑制作用(P<0.05);而在较低浓度下(5~20 nmol/L)可剂量依赖性地抑制人胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平(P<0.05),上调E-cadherin和PCDH9蛋白表达水平(P<0.05),上调PCDH9 mRNA表达水平(P<0.05);PCDH9高表达也可抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭(P<0.05),上调E-cadherin蛋白表达并下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达(P<0.05)。结论 TSA可在体外抑制胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭,这可能与其促进PCDH9基因表达,继而下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关。

吡柔比星调控原钙黏蛋白10的表达对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡诱导的作用机制研究

目的探讨吡柔比星(THP)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 2014年4月-2019年3月在郴州市第一人民医院实验室进行实验。应用终浓度为0.1mg/L、1mg/L、2.5mg/L、5 mg/L吡柔比星处理多发性骨髓瘤细胞KM3,记为THP 0.1mg/L组、THP 1 mg/L组、THP 2.5mg/L组、THP 5mg/L组;未经任何处理的KM3细胞作空白对照(Con)组;转染pcDNA3.1为pcDNA3.1组,转染pcDNA3.1-PCDH10为pcDNA3.1-PCDH10组,转染si-NC后用1 mg/L的THP处理为THP 1 mg/L+si-NC组,转染si-PCDH10后用1 mg/L的THP处理为THP1 mg/L+si-PCDH10组。MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot法检测蛋白表达。结果不同浓度THP处理后,KM3细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著降低,p21、Bax、PCDH10蛋白的表达水平显著升高(P <0.05);过表达PCDH10后,KM3细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著降低,p21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);抑制PCDH10表达后,THP处理的KM3细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低,Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,p21、Bax蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论吡柔比星可抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控PCDH10表达相关。

原钙黏蛋白20研究进展

原钙黏蛋白（protocadherin，Pcdh）是由Shintaro等在使用钙黏蛋白细胞外（extracellular cadherin，EC）结构域来鉴定钙黏蛋白家族新成员时，意外发现了编码钙黏蛋白EC域的PCR扩增产物片段，这些钙黏蛋白的EC结构域与经典钙黏蛋白的EC结构域明显不同，于是就称它们为原钙黏蛋白。

肾癌组织中原钙黏蛋白-10甲基化状态及临床意义

目的探讨肾癌组织中原钙黏蛋白-10(PCDH10)甲基化状态及临床意义。方法收集78例肾癌患者的癌组织标本及其中38例癌旁正常肾组织标本;采用甲基化特异性PCR法检测组织PCDH10甲基化情况,分析肾癌组织PCDH10甲基化状态与患者临床特征及预后的关系。结果肾癌组织PCDH10甲基化阳性率(73.1%)明显高于癌旁正常组织(21.1%),差异有统计学意义(P<0.05)。肾癌组织PCDH10甲基化阳性与患者性别、年龄无关,差异均无统计学意义(均P>0.05);与肿瘤T分期、Fuhrman分级、淋巴结转移有关,差异均有统计学意义(均P<0.05)。肾癌患者PCDH10甲基化阳性组5年总生存率(73.7%)明显低于甲基化阴性组(95.2%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾癌组织PCDH10甲基化阳性率较高,与肾癌的发生、发展及患者预后不良相关。

原钙黏蛋白10的研究进展

原钙黏蛋白10(protocadherin 10,PCDH10),是一种表达于细胞膜表面的钙黏蛋白,属于原钙黏蛋白家族中的一员。最先发现在中枢神经系统中起作用,随着研究的深入,其参与肌动蛋白组装、参与认知功能的调节及抑癌等不为人知的功能逐渐被发掘出来。笔者将PCDH10的研究最新进展进行综述。

原钙黏附蛋白7在脂多糖诱导的肾小管上皮细胞焦亡中的作用

目的 探讨原钙黏附蛋白7(PCDH7)是否参与脂多糖(LPS)刺激引起的肾小管上皮细胞(HK-2)焦亡过程。方法 构建LPS刺激HK-2损伤模型,使用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测细胞中PCDH7、NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)、caspase-1、和IL-1β蛋白的表达变化。MTT法测定细胞活力,TUNEL法确定细胞焦亡率,ELISA法检测细胞分泌TNF-α、IL-6水平,全自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果 与Control组比较,LPS组细胞生存率下降,细胞凋亡率升高,炎症因子TNF-α和IL-6水平升高,细胞损伤指标LDH含量明显升高,PCDH7的蛋白和mRNA表达明显下调,细胞焦亡指标NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白和mRNA表达明显上调(P均<0.05)。结论 LPS通过下调PCDH7的表达,促进肾小管上皮细胞发生明显细胞焦亡损伤。

原钙黏素-LKC在结直肠癌中的表达及意义

应用RT-PCR法检测结直肠癌中原钙黏素-LKC mRNA的表达。结果显示,原钙黏素-LKC表达与结直肠癌的临床分期、淋巴结转移呈负相关,与细胞分化程度呈正相关,与肿瘤大小无明显相关性。提示检测结直肠癌中原钙黏素-LKC的表达水平,有助于预测结直肠癌进程和淋巴结转移的诊断,以及评估结直肠癌患者的预后。

原钙黏蛋白19基因突变致限于女性的癫痫伴智力低下临床特点分析

目的分析以限于女性的癫痫伴智力低下为临床特点的原钙黏蛋白19(PCDH19)基因突变的临床及遗传学特点。方法回顾分析1例PCDH19基因突变致癫痫伴智力低下女性患儿的临床资料。结果1岁11个月女性患儿,癫痫发作并存在热敏感,发作有丛集性,形式多样,伴智力落后、孤独症样表现。基因测序发现PCDH19新发突变。发作间期脑电图见右侧额中央及中线区少量尖波。头颅磁共振无明显异常。抗癫痫药物治疗效果差。结论限于女性的癫痫伴智力低下发作有热敏感、丛集性特点,早期行癫痫基因检测有助于明确诊断,提供遗传咨询。

原钙黏蛋白家族在中枢神经系统发育过程中的表达特点及功能

原钙黏蛋白(Pcdh)家族是钙黏蛋白超家族中最庞大的1个亚家族,在哺乳动物中,已发现有70多个家族成员。根据基因组结构的差异,Pcdh家族可分为成簇Pcdh(Pcdh-α、Pcdh-β和Pcdh-γ)和非成簇Pcdh(Pcdh-δ和solitary Pcdh)。Pcdh主要在中枢神经系统中表达,所以被认为在神经构筑及通路的形成过程中起重要作用,异常表达与一些神经类疾病的发生有关,因此具有十分重要的研究价值,但目前对其功能和机制知之甚少。本文总结了Pcdh在中枢神经系统的表达模式及其潜在的功能,为后续研究Pcdh在中枢神经系统的功能和机制提供基础信息。

胃癌组织原钙黏蛋白10 mRNA表达水平与预后的相关性

背景与目的:编码原钙黏蛋白10(protocadherin-10,PCDH10)的PCDH10基因启动子甲基化与胃癌患者不良预后相关。但PCDH10表达水平与胃癌预后的关系不明确。该研究旨在分析PCDH10表达水平与胃癌预后及临床病理因素间的关系,寻找预测胃癌患者复发及死亡风险的指标。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)方法检测115对胃癌组织与相应癌旁组织PCDH10 m RNA的表达水平,分析PCDH10 m RNA的表达水平与预后及临床病理因素的关系。采用Logistic回归分析建立预测患者5年内复发或死亡风险的模型。结果:PCDH10 m RNA低表达组与非低表达组相比,无进展生存时间(progression-free survival,PFS)与总生存时间(overall survival,OS)显著延长(P值分别为0.046与0.033),淋巴结转移较少(P=0.001),TNM分期较早(P=0.001)。Cox单因素分析发现,Lauren分型、T分期、N分期、M分期及PCDH10 m RNA表达水平与PFS及OS显著相关。包含PCDH10作为参数的Logistic回归模型对胃癌患者术后5年内复发或死亡风险的预测效率与仅包含传统临床病理学参数的Logistic回归模型的预测效率相当。结论:PCDH10低表达胃癌患者淋巴结转移较少,TNM分期较早,预后较好,可以作为预测胃癌患者预后的辅助指标。基于PCDH10表达水平的Logistic回归模型可以在淋巴结转移情况不明时起到辅助判断患者预后的作用。

原钙黏附蛋白18b基因抑制对斑马鱼神经系统发育的影响

原钙黏附蛋白18b(Protocadherin18b,Pcdh18b)属于钙黏附蛋白家族成员.为了研究pcdh18b基因抑制对斑马鱼神经系统发育的影响,针对pcdh18b的翻译起始位点设计一个吗啡啉修饰的反义寡核苷酸抑制其表达,在斑马鱼受精卵一到二细胞期注射并且验证其有效性.注射后用原位杂交和吖啶橙染色检测神经系统的表型和标志基因的表达.pcdh18b下调使神经前体细胞的标志基因neurog1、神经元标志基因elavl3和神经胶质细胞标志基因gfap的表达均出现下调,中后脑边界的标志基因pax2a和wnt1表达减弱并出现神经管分叉现象,同时与后脑分节相关的基因krox20表达减少.吖啶橙染色显示pcdh18b下调后斑马鱼中脑、后脑及中后脑边界细胞凋亡增多.这些结果表明pcdh18b抑制导致了斑马鱼神经系统发育的异常。

原钙黏蛋白的研究现状及意义

原钙黏蛋白（protocadherin，Pcdh）大约在十年前由Shintaro等在使用经典钙黏蛋白（cadhefin，Cdh）细胞外（Extracellua，EC）结构域重复序列的简并引物PCR扩增鉴定Cdh家族新成员时，意外发现了编码CdhEC域的PCR扩增产物片段，这些Cdh的EC结构域与经典Cdh的EC结构域明显不同，于是就将它们称为Pcdh。

胶原钙维素对大鼠胶原代谢及骨组织的影响

用胶原钙维素水溶液给生长期大白鼠灌胃，观察其体重、尿羟脯氨酸含量、股骨干重、股骨中胶原及钙、镁、铁、锌等８种元素的含量，同时设阿胶灌胃及蒸馏水灌胃对照组。结果显示：胶原钙维素组和阿胶对照组的尿羟脯氨酸含量、股骨中胶原含量均高于正常对照组，且随灌胃时间延长而增高。胶原钙维素组大鼠股骨中钙、镁、铁及锌和阿胶对照组大鼠股骨中的铁也高于正常对照组。而胶原钙维素组和阿胶对照组间无明显差异。表明胶原钙维素能够促进大鼠体内胶原代谢和钙、镁、铁及锌的吸收，有壮骨作用。

原钙黏蛋白19基因突变相关癫痫的临床特点分析

目的分析原钙黏蛋白19(PCDH19)基因突变所致癫痫的临床特点及其预后。方法回顾分析2例PCDH19基因突变所致癫痫患儿的临床资料,并结合相关文献分析其临床特点。结果2例患儿均为女性,均语言发育迟缓,均不发热。抗癫痫药物对2例患儿效果较好。基因测序提示2例患儿的PCDH19基因为新发突变。结论PCDH19基因突变可来源于父母遗传以及新发突变,其所致癫痫起病常在婴儿期,多为女性。青春期后患者癫痫发作频率降低,但其智力无明显改善。

原钙黏蛋白δ在恶性肿瘤中的研究进展

钙黏蛋白超家族是一类介导钙依赖的细胞间黏附的跨膜糖蛋白,在组织结构和形态维持中发挥重要作用。原钙黏蛋白δ(δ-PCDHs)是钙黏蛋白超家族的成员,主要研究成果围绕在神经生物学领域,越来越多的研究表明其在恶性肿瘤发生发展中也起到重要作用。目前研究初步证明δ-PCDHs可以作为多种肿瘤的抑制基因,近年来其在恶性肿瘤中的致癌作用也已被发现。本文综述了近年来δ-PCDHs部分重要成员与人恶性肿瘤相关研究进展,介绍了其在不同恶性肿瘤中的异常甲基化情况、相关作用及机制,有望为恶性肿瘤的早期诊断、个体分子靶向治疗及预后评估提供新的思路和方案。

小鼠原钙黏蛋白的多样性分析及其亚型的克隆与表达

原钙黏蛋白(protocadherin)是广泛分布于中枢神经系统的一类跨膜蛋白,是钙黏蛋白家族中最大的亚族。成簇Pcdh基因包含3个串联的基因簇——Pcdhα、β、γ,其中Pcdhα和γ分别由14个和22个可变区及各自共同的恒定区组成。这种特殊蛋白结构决定了原钙黏蛋白各亚型在功能上既相似又不完全相同,为了系统研究原钙黏蛋白各个亚型的功能,本研究对原钙黏蛋白家族氨基酸序列保守性进行了系统性分析,并据此设计特异性的引物来完成原钙黏蛋白各个亚型的克隆;并以原钙黏蛋白α1基因为例,通过PCR方法成功将其从小鼠大脑中克隆并构建到带有Myc标签的真核表达载体pc DNA3.1上;利用脂质体转染方法将该基因成功表达于293T细胞。本研究结果将为后续其他亚型的克隆建立技术平台。

人肝癌细胞株HepG2中原钙粘附蛋白10基因异常甲基化及其与HBx蛋白的关系

目的研究原钙粘附蛋白10(PCDH10)启动子在人肝癌细胞株HepG2中的甲基化状态及与HBx调控的相关性。方法用逆转录PCR(RT-PCR)和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),检测去甲基化药物5-氮-2'-脱氧胞苷(Aza)联合组蛋白乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)处理前后,HepG2细胞中PCDH10基因的表达及启动子甲基化水平;用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)定位检测发生甲基化的CG位点。用MSP检测表达HBx基因的重组腺病毒感染HepG2细胞后PCDH10基因的表达及甲基化水平。结果 PCDH10基因在HepG2细胞株中表达沉默,其启动子发生明显甲基化,Aza可以部分去除PCDH10甲基化从而上调其mRNA表达水平。但HBx蛋白表达不影响HepG2细胞中PCDH10的甲基化程度。结论 PCDH10启动子异常甲基化使HepG2细胞内转录沉默,但其甲基化状态与HBx蛋白表达无关。

单细胞水平原钙黏蛋白基因簇的转录分析

原钙黏蛋白(protocadherin,Pcdh)基因簇由紧密相连的3个基因簇(Pcdhα、Pcdhβ和Pcdhγ)组成,其中α、β基因簇包含可变区外显子(C型和非C型)和恒定区外显子。这种独特的基因排列方式使Pcdh基因簇具有产生单细胞分子多样性的潜能。目前,在单细胞水平有关Pcdh基因簇转录表达的研究较少。为了探索单细胞Pcdh基因簇的转录表达模式,利用显微操作系统并结合RT-PCR方法,在单细胞水平分析了小鼠大脑皮层和人类神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH的Pcdhα和Pcdhβ基因簇表达模式。研究发现Pcdhα和Pcdhγ的C型和非C型亚型均是随机表达,每个单细胞表达不同组合的若干个Pcdh基因簇亚型。本研究表明,在小鼠大脑皮层及人类神经母细胞瘤的单个细胞中,Pcdh基因簇的转录表达都能够产生单细胞表面分子多样性。这为进一步揭示神经元中Pcdh基因簇表达调控的分子机理及其在大脑神经回路中的功能奠定理论基础。