人羊膜缓释支架联合神经干细胞治疗脊髓损伤

目的探讨去上皮细胞羊膜（DMAM）构建药物缓释组织工程支架联合神经干细胞（NSCs）在大鼠脊髓全横断损伤模型中的治疗效果。方法取出生24h内的SD大鼠8只，剥离双侧海马分离、培养、纯化、鉴定NSCs备用。获取健康产妇羊膜，制备成DHAM。裁取两块DHAM4cm×4cm大小，吸取含5×10^9／LNSCs的细胞悬液分别种植其上。一块用2．5ml纤维蛋白黏合剂与18μg鼠神经生长因子的混合剂喷洒于其无细胞面，另一块单纯用18μg鼠神经生长因子喷洒于其无细胞面，卷成圆柱形支架后，分别制成DHAM药物缓释组织工程支架和无缓释功能的DHAM药物组织工程支架。将36只实验大鼠制作脊髓完全横断损伤模型，随机分为3组。A组为DHAM药物缓释组织工程支架移植组；B组为无缓释功能的DHAM药物组织工程支架移植组；C组为旷置缺损组。术后分别在1、2、4、8周对各组运动功能用脊髓损伤后后肢运动功能（BBB）评分系统进行评价。在第8周处死各组大鼠取材，行苏木素-伊红（HE）染色和镀银染色以及免疫组织化学染色观察形态学结果。结果术后8周，A组BBB评分达（11．63±0．58）分，明显高于其余两组（P〈0．05）。苏木素-伊红（HE）染色见A组大部分DHAM支架呈规则平行排列，DHAM支架内可见较多细胞存活生长。部分细胞发出丝状纤维沿DHAM支架间隙生长。B组DHAM支架不能保持平行排列的状态，呈波浪状或网状，细胞发出的丝状纤维混乱生长，缺乏方向。C组脊髓断端可见空洞形成。新长出的轴突杂乱交织在一起。神经元核抗原（Neun）抗体免疫组织化学染色显示部分存活的神经干细胞分化为神经元。镀银染色和神经丝蛋白-200（NF-200）抗体免疫组织化学染色证实支架内存活的细胞发出的丝状纤维为神经轴突。结论DHAM药物缓释支架联合NSCs组建的组织工程支架对大鼠脊髓缺损有良好的治疗潜力。