血清组蛋白去乙酰化酶9在颅内动脉瘤患者中表达及与颅内动脉瘤发生发展的相关性

目的探讨血清组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)在颅内动脉瘤(intracranial aneurysm,IA)患者中的表达水平以及与IA发生发展的相关性。方法收集2019年2月至2021年2月滨州医学院烟台附属医院收治的IA患者88例作为观察组,根据颅内动脉瘤是否破裂分为IA未破裂组38例,IA破裂组50例,另外选取滨州医学院烟台附属医院同期健康体检者80例作为对照组;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测IA患者血清HDAC9的水平;采用酶联免疫吸附法检测两组肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。结果观察组HDAC9、IL-6、TNF-α水平高于对照组,差异有显著性(P<0.05);Pearson相关性分析血清HDAC9水平与IL-6、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。IA破裂组血清HDAC9、IL-6、TNF-α水平高于IA未破裂组,差异有显著性(P<0.05)。影响IA破裂的单因素分析显示,IA破裂组高血压、血管痉挛发生率及HDAC9高表达比例显著高于IA未破裂组(P<0.05)。多因素logistic回归分析IA破裂的影响因素,结果显示高血压、血管痉挛、HDAC9是IA破裂的影响因素(P<0.05)。结论HDAC9在IA患者血清中表达上调,且与IA的发生和发展密切相关。

垂体同源盒2和组蛋白去乙酰化酶9基因多态性与缺血性脑卒中MRI表现的关系

目的探讨垂体同源盒2(PITX2)基因位点rs6843082、rs2200733和组蛋白去乙酰化酶9(HADC9)基因位点rs2107595多态性与缺血性脑卒中MRI影像学表现的关系。方法收集631例缺血性脑卒中患者的头颅MRI影像资料,包括病灶部位、数目、大小及对周围组织的影响。采用Sequenom基因分型技术检测所有患者外周血基因位点rs6843082、rs2200733和rs2107595的基因分型,并运用PLINK软件分析基因多态性位点(加性模型、显性模型、隐性模型、等位基因模型)与MRI表现的关联性。结果 rs6843082的加性模型、显性模型、等位基因模型与缺血性脑卒中发生在枕叶均有关联(P<0.05);rs2200733的隐性模型与缺血性脑卒中发生在枕叶、显性模型与缺血性脑卒中发生在颞叶均有关联(P<0.05);rs2107595的显性模型与缺血性脑卒中发生在丘脑及顶叶、隐性模型与缺血性脑卒中发生枕叶在均有关联(P<0.05)。3个基因位点多态性与病灶数目、病灶大小以及病灶对周围组织的影响均无关联(P>0.05)。结论 PITX2和HADC9基因多态性可能与缺血性脑卒中的MRI病灶部位相关。

组蛋白去乙酰化酶9基因单核苷酸多态性与缺血性卒中的相关性

目的探讨组蛋白去乙酰化酶9（HDAC9）基因单核苷酸多态性与缺血性卒中（IS）亚型的相关性。方法回顾性纳入IS患者202例,按照低分子肝素Org10172治疗急性卒中试验（TOAST）分型,将IS患者分为大动脉粥样硬化型卒中（LAA）149例和小动脉闭塞型卒中（SAO）53例。纳入同期年龄、性别相匹配的健康体检者201名。采用聚合酶链式反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）,对所有受试者HDAC9基因rs11984041、rs2107595位点进行基因分型,并对基因型与IS的相关性行多因素Logistic回归分析。结果 （1）所有受检对象中,rs11984041位点检出的基因型均为CC型,rs2107595位点共检测出CC、CT、TT 3种基因型。（2）LAA组、SAO组、对照组3组间显性模型（CT＋TT、CC）基因型频率和等位基因频率差异有统计学意义（χ2=8.635,P=0.013;χ2=10.309,P=0.006）;而3组间CC、CT、TT基因型频率和隐性模型（CC＋CT、TT）基因型频率差异均无统计学意义（校正后均P〉0.017）;与对照组比较,LAA组等位基因频率差异有统计学意义（χ2=7.446,P=0.006）;显性模型中,LAA组CT＋TT（65.1%,97/149）与对照组（52.2%,105/201）基因型频率差异有统计学意义（χ2=5.800,P=0.016）。（3）多因素Logistic回归分析显示,性别、高血压、吸烟、高水平低密度脂蛋白胆固醇及rs2107595位点显性模型CT＋TT基因型与LAA型IS相关（显性模型CT＋TT的OR=1.909,95%CI：1.055~3.454,P=0.033）。结论除脑血管病危险因素如性别、高血压、吸烟、高水平低密度脂蛋白胆固醇外,HDAC9基因多态性也可能与LAA型IS相关,rs2107595位点CT＋TT基因型可能是LAA型IS的独立危险因素。

组蛋白去乙酰化酶9在骨髓间充质干细胞衰老过程中的表达

背景:骨髓间充质干细胞在体外培养传代过程中存在细胞老化现象,但其机制尚不明确。组蛋白去乙酰化酶可以使组蛋白脱乙酰化而使染色质处于浓缩状态,进一步关闭基因。目的:探讨骨髓间充质干细胞衰老过程中组蛋白去乙酰化酶9的表达模式。方法:通过生物信息学挖掘技术分析组蛋白去乙酰化酶在骨髓间充质干细胞中的表达;通过体外传代培养骨髓间充质干细胞,β-半乳糖甘酶染色和qRT-PCR方法检测其衰老状态,qRT-PCR、Western blot及免疫荧光技术检测组蛋白去乙酰化酶9的表达模式。结果与结论:①数据挖掘、生物信息学分析显示在骨髓间充质干细胞衰老过程中,所有组蛋白去乙酰化酶亚型中,只有组蛋白去乙酰化酶9呈现高表达;②骨髓间充质干细胞在传至10代时可表现明显的衰老状态,如β-半乳糖甘酶染色阳性细胞最为明显,衰老相关基因表达上调;③组蛋白去乙酰化酶9的表达与数据挖掘结果一致,呈现上调;组蛋白去乙酰化酶9在年轻骨髓间充质干细胞的胞核与胞浆中均有表达,但其在胞核中的表达较低,衰老骨髓间充质干细胞胞浆中几乎不表达组蛋白去乙酰化酶9,而其在胞核中的表达增加;④结果表明,组蛋白去乙酰化酶9在骨髓间充质干细胞衰老过程中具有重要的作用,但其衰老表型与组蛋白去乙酰化酶9发挥作用的分子机制尚待进一步研究。

组蛋白去乙酰化酶9在肿瘤中的作用

组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)属于组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)Ⅱa亚型,在体内通过催化组蛋白3(H3)、组蛋白4(H4)和非组蛋白的去乙酰化,改变染色体的结构,调节基因的转录。研究表明HDAC9表达异常与肿瘤关系密切,但不同肿瘤中HDAC9的表达和功能不同,最终造成促癌或抑癌的相反结果,具体机制尚不明确。当前利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylases inhibitors,HDACIs)的表观遗传治疗已成为热点,研制特异性HDACIs并与化疗、放疗以及免疫治疗相结合已成为未来的方向,但靶向针对HDAC9的治疗研究非常有限。本文就HDAC9在肿瘤中的作用进行综述。

组蛋白去乙酰化酶9在香烟烟雾暴露所致肺气肿小鼠中的作用

目的:观察组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)在香烟烟雾暴露所致肺气肿小鼠中的作用。方法:HDAC9^(-/-)C57BL/6与野生型小鼠各20只,随机等分为4组,即:HDAC9^(-/-)对照组、HDAC9^(-/-)烟熏组与野生型对照组、野生型烟熏组;烟熏组小鼠香烟烟熏24周建立肺气肿模型,HE染色观察小鼠肺组织病理学改变;免疫磁珠分选CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测Treg细胞中HDAC9 mRNA相对表达量;免疫组化法检测小鼠肺组织内叉头状转录因子p3(Foxp3)蛋白表达量,RT-qPCR法检测肺组织白介素-1β(IL-1β)mRNA表达水平。结果:野生型对照组与HDAC9^(-/-)对照组肺泡结构正常,无炎症细胞浸润;野生型烟熏组气道壁和肺泡间隔可见炎细胞增多,肺泡壁断裂明显,肺泡腔扩大;HDAC9^(-/-)烟熏组肺泡间隔部分断裂,但较野生型烟熏组减轻,未见明显炎细胞浸润。与野生型对照组比较,野生型烟熏组Treg细胞中HDAC9 mRNA表达增多(P<0.01)。与野生型对照组比较,野生型烟熏组肺组织中Foxp3表达减少,HDAC9^(-/-)对照组Foxp3表达增多(P<0.01);与HDAC9^(-/-)对照组比较,HDAC9^(-/-)烟熏组Foxp3表达减少(P<0.01);与野生型烟熏组比较,HDAC9^(-/-)烟熏组Foxp3表达增多(P<0.01)。与野生型对照组比较,野生型烟熏组肺组织中IL-1βmRNA的表达量增高(P<0.01);与野生型烟熏组比较,HDAC9^(-/-)烟熏组肺组织中IL-1βmRNA的表达量降低(P<0.01)。结论:香烟烟雾暴露下,HDAC9基因缺失小鼠肺内Foxp3表达增多、IL-1β炎症介质表达减少,提示HDAC9^(-/-)小鼠体内Treg细胞功能增强,可能与肺气肿病情减轻有关。

组蛋白去乙酰化酶9基因rs73307079位点与烟雾病发生风险的关系

目的探讨烟雾病(MMD)患者组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)基因rs73307079位点与MMD发生风险的关系及该位点不同基因型对HDAC9基因表达的影响。方法选择2019年9月至2020年12月于新乡医学院第一附属医院神经内科及神经外科就诊的54例MMD患者为MMD组,另选择53例性别、年龄与MMD组匹配的健康体检者作为对照组。取所有受试者空腹外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应法扩增HDAC9基因rs73307079位点DNA片段并测序,应用Chromas软件分析所有受试者的HDAC9基因rs73307079位点基因型。采用二元logistic分析多重遗传模型(加性、显性、隐性、超显性)下HDAC9基因rs73307079位点不同基因型与MMD发生风险的关联性。采用实时定量聚合酶链式反应法检测HDAC9基因mRNA相对表达量。结果MMD组和对照组受试者rs73307079位点均存在TT、TC、CC 3种基因型及T、C 2种等位基因。MMD组受试者TT基因型频率显著低于对照组(P<0.05),TC基因型频率显著高于对照组(P<0.05);2组受试者的CC基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05);2组受试者的T、C 2种等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。在加性遗传模型下,TC基因型携带者发生MMD的风险显著高于TT基因型携带者(P<0.05),CC基因型携带者与TT基因型携带者的MMD发生风险比较差异无统计学意义(P>0.05);在显性遗传模型下,TC+CC基因型携带者发生MMD的风险显著高于TT基因型携带者(P<0.05);在隐性遗传模型下,CC基因型携带者与TT+TC基因型携带者的MMD发生风险比较差异无统计学意义(P>0.05);在超显性遗传模型下,TC基因型携带者发生MMD的风险显著高于TT+CC基因型携带者(P<0.05)。MMD组患者中rs73307079位点TT、TC、CC基因型患者的HDAC9 mRNA相对表达量分别为1.173±0.642、1.123±0.203、1.045±0.386,两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论HDAC9基因rs73307079位点基因型多态性与MMD的发生存在关联,但不影响HDAC9基因表达水平,该位点的TC基因型携带者具有较高的MMD发病风险。

组蛋白去乙酰化酶9表达与恶性肿瘤预后相关性的Meta分析

目的分析组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)表达水平与恶性肿瘤预后的相关性。方法计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library、中国期刊全文数据库和万方数据库,搜集HDAC9表达对恶性肿瘤预后相关性的病例对照研究,检索时限均为建库至2019年3月。筛选文献并提取数据,使用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入8篇病例对照研究,Meta分析结果显示,HDAC9高表达与性别(OR=0.87,95%CI=0.22~3.40,P=0.84)、TNM分期(OR=0.55,95%CI=0.20~1.52,P=0.25)、无进展生存期(HR=1.10,95%CI=0.97~1.26,P=0.14)无关,但与淋巴结转移(OR=2.25,95%CI=1.18~4.29,P=0.01),总生存期(HR=2.51,95%CI=1.11~5.66,P=0.03)和无事件生存期(HR=10.61,95%CI=1.26~86.90,P=0.03)显著相关。结论HDAC9的高表达是恶性肿瘤病人不良预后的危险因素。

组蛋白去乙酰化酶9对肾小球发育的调控

目的:研究组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase,hdac9)缺失对肾小球发育的影响.方法:利用全胚胎原位杂交检测斑马鱼hdac9在受精后24h、36h、48h、60h、72h的表达分布;应用基因编辑技术CRISPR/Cas9构建hdac9基因敲除模型;透射电镜观察hdac9基因敲除对肾脏超微结构的影响;利用全胚胎原位杂交检测hdac9敲除后对肾脏祖细胞和足细胞标志物表达的影响;在hdac9基因敲除斑马鱼中,回输hdac9 mRNA以恢复hdac9缺失的表型.结果:全胚胎原位杂交检测发现hdac9在斑马鱼前肾发育阶段高峰度表达,即受精后24h开始表达,直至肾小球发育完成hdac9表达消失;透射电镜观察发现hdac9基因敲除导致肾小球发育障碍,肾脏祖细胞标志物(lhx1a,pax2a,mafba和wt1b)和足细胞标志物(podocin和nephrin)表达均显著抑制;在hdac9基因敲除斑马鱼中回输hdac9 mRNA可明显恢复hdac9基因敲除的表型.结论:hdac9在肾小球发育阶段表达,为肾小球发育所必需的,可能具有调控肾脏祖细胞增殖以及祖细胞向足细胞分化的功能.

组蛋白去乙酰化酶9基因多态位点rs2107595与冠状动脉粥样硬化的关联研究

目的 探究组蛋白去乙酰化酶9（histone deacetylase 9，HDAC9）基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）rs2107595与冠状动脉粥样硬化严重程度的相关性。 方法 收集1 172例接受冠状动脉造影的患者静脉外周血标本，采用高分辨率溶解曲线方法（HRM）测定rs2107595基因型，并用Gensini评分判定冠状动脉粥样硬化严重程度。 结果 Gensini得分高低在SNP rs2107595 不同基因型组间存在显著差异（GG vs AG vs AA：29（19.5～63） vs 36（19.6～73.1） vs 35（21～69）, P =0.012）。单因素Logistic回归分析显示AA基因型和AG基因型均与Gensini得分风险增高相关（AA vs GG：OR=1.63,95% CI =1.09～ 2.43 ， P =0.018；AG vs GG：OR=1.57,95% CI =1.23～2.00， P =0.001）。多因素Logistic回归分析显示SNP rs2107595基因型、体重、糖尿病和高脂血症是Gensini得分风险增高的独立风险因素。SNP rs2107595与冠心病发病风险的相关性在超重亚组、糖尿病亚组、高脂血症亚组中显著增高。 结论 rs2107595多态性可能是冠状动脉粥样硬化发生、发展的一个危险因素。

组蛋白去乙酰化酶9基因rs3757720单核苷酸多态性与冠心病阳性相关性研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)基因rs3757720单核苷酸多态性(SNP)与冠心病阳性相关性。方法选取自2014年6月至2017年4月沈阳军区总医院收治的1 101例冠状动脉疾病(CAD)患者作为冠心病组,同期体检的891例无心血管疾病的健康人作为健康组。采用连接酶检测反应测定HDAC9基因SNP rs3757720的基因分型,比较两组等位基因的频率以及HDAC9 SNP与CAD发生风险之间的等位基因和基因型关联分析。结果冠心病组中rs3757720 T等位基因频率为10. 9%,显著高于健康组的4. 5%(OR=1. 234,95%可信区间1. 147～1. 327,P=0. 025)。调整了潜在的混杂因素,如年龄、性别、高血压、糖尿病、吸烟状况及血脂水平后,CAD与A等位基因携带者相比较(OR=2. 344,95%可信区间2. 051～2. 523,P=0. 019),携带TT纯合子和AT杂合子的受试者易感性显著增加。结论 HDAC9基因的SNP rs3757720与CAD的发生有独立相关性,HDAC表达增加可能对TT+AT基因型的CAD的发生具有促进作用。

HDAC9沉默抑制新生大鼠海马神经元氧糖剥夺/再灌注损伤

目的:研究组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的新生大鼠海马神经元损伤的影响及其机制,为研究新生儿缺氧缺血性脑损伤奠定基础。方法:体外培养新生SD大鼠海马神经元,建立OGD/R损伤模型。用real-time PCR和Western Blot分别检测HDAC9 m RNA和蛋白表达;转染HDAC9 si RNA沉默其表达,并将细胞分为空白对照组、OGD/R组、OGD/R+scramble si RNA组和OGD/R+HDAC9 si RNA组;MTT法测定神经细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒检测LDH漏出率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测细胞Bax、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达。此外,用JAK2抑制剂AG490预处理细胞,评价JAK2/STAT3通路在HDAC9沉默对海马神经元OGD/R损伤中的作用。结果:HDAC9在OGD/R损伤的在新生大鼠海马神经元细胞中高表达(P<0.05);转染HDAC9 si RNA后,细胞HDAC9表达降低(P<0.05);在OGD/R诱导的海马神经元细胞中,下调HDAC9的表达能够显著提高细胞活性,降低LDH渗出率,减少神经细胞凋亡,下调Bax表达,上调Bcl-2表达,上调p-STAT3的表达(P<0.05),此外,AG490部分逆转HDAC9沉默对新生大鼠海马神经元细胞OGD/R损伤的抑制作用(P<0.05)。结论:HDAC9沉默通过JAK2/STAT3通路抑制新生大鼠海马神经元OGD/R损伤。

广东汉族人群HDAC9基因单核苷酸多态性位点rs2240419与缺血性卒中及其中医证候易感性的关联性研究

目的探讨广东汉族人群蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)基因单核苷酸多态性位点rs2240419与缺血性卒中(IS)及其中医证候易感性的关系。方法采用前瞻性研究方法 ,运用Sanger基因分型技术对外周静脉血中HDAC9基因位点rs2240419多态性进行基因分型,并通过自行设计的研究对象观察表(CRF表)进行记录后建立数据库,最后导入SPSS 17.0软件进行统计分析。结果①共纳入184例缺血性卒中患者(IS组)及116例健康人(对照组);②rs2240419位点共检测出CC、CT、TT 3种基因型,基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P=0.936);③对IS组研究对象进行辨别证候,风证141例,火证13例,痰证121例,血瘀证149例,气虚证82例;④HDAC9基因位点rs2240419的多态性与缺血性卒中的关联性差异无显著性(P>0.05);⑤HDAC9基因位点rs2240419的多态性与中医证候易感性(风证、痰证、血瘀证)的关联差异无显著性(P>0.05)。结论广东汉族人群HDAC9基因SNP位点rs2240419可能与缺血性卒中的发病及其中医证候易感性无关,但是并不能据此就明确否认该基因位点的多态性与缺血性卒中及其中医证候的易感性不存在关联性。不排除是本研究与所参考的研究在研究对象、干扰因素控制等方面的研究方案不同,或者本研究自身存在的局限与不足导致阴性结果的产生,仍然需要更多大样本的研究来进一步明确。

MicroRNA-196a靶向调节HDAC9对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

目的 探究微小RNA(miR)-196a靶向调节组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。方法将MC3T3-E1细胞分为对照组(Cont)组、诱导组、miR-196a-mimics-NC组、miR-196a-mimics组、miR-196a-inhibitor-NC组、miR-196a-inhibitor组、miR-196a-mimics+pCMV-HDAC9-NC组、miR-196a-mimics+pCMV-HDAC9组,根据分组转染后进行成骨诱导。定量荧光PCR检测MC3T3-E1细胞中miR-196a、HDAC9表达量;试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色观察矿化程度;Western blot检测HDAC9、ALP、Runt相关转录因子2(Runx2)、胶原蛋白I(COL1)、骨桥蛋白(OPN)、Histone H3、Histone H3(acetyl K9、K14和K23)表达量。结果 与Cont组相比,诱导组MC3T3-E1细胞中miR-196a表达、ALP、Runx2、COL1、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化程度及Histone H3 K9、K14、K23位点乙酰化水平增高(P<0.05),HDAC9 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。转染miR-196a-mimics可明显增加miR-196a表达,降低HDAC9表达,并增加ALP、Runx2、COL1、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化程度及Histone H3乙酰化,转染miR-196a-inhibitor则作用相反。miR-196a可靶向下调HDAC9表达,过表达HDAC9可部分逆转miR-196a mimics对MC3T3-E1细胞成骨分化的促进效应。结论 miR-196a可靶向下调HDAC9表达,增加组蛋白乙酰化水平,促进MC3T3-E1细胞成骨分化。

HDAC9通过下调PDE4b表达参与调控小鼠心肌肥厚

目的探讨心肌肥厚性重构可能分子机制。方法选取8周龄清洁级雄性C57小鼠18只,随机分为升主动脉缩窄术(TAC)组和对照组(SHAM组),每组9只。TAC组给予升主动脉缩窄术(TAC术)构建心肌肥厚模型。SHAM组给予假手术。术后4周,利用二氧化碳窒息处死实验小鼠,剖开胸腔后分离心脏组织,用于后续实验。H&E染色观察心脏组织结构;心室/体质量指数评估心室重构情况;荧光测定法测定心脏组织中组蛋白去乙酰化酶(HDACs)活性;qPCR检测MYH7、PDE4b、HDAC4、HDAC5及HDAC9的表达水平,Western blot检测PDE4b及HDAC9蛋白表达水平,ChIP-qPCR检测HDAC9与PDE4b启动子结合水平。结果与SHAM组相比,TAC组小鼠室间隔及左室壁明显增厚,心室/体质量指数明显升高(4.48±0.18 vs 5.50±0.23)(P<0.05),心肌肥厚标志物MYH7表达明显升高(0.91±0.04 vs 1.44±0.07)(P<0.05);PDE4b表达明显降低(mRNA水平0.75±0.09 vs 0.27±0.06;蛋白水平0.67±0.11 vs 0.34±0.05)(P<0.05);肥厚心肌组织中组蛋白去乙酰化酶活性显著增加(3.24±0.32 vs 5.03±0.58)(P<0.05),HDAC9表达显著升高(mRNA水平0.85±0.08 vs 1.35±0.07;蛋白水平0.77±0.10 vs 1.25±0.05)(P<0.05),而HDAC4、HDAC5表达与SHAM组无明显差异(P>0.05);HDAC9与PDE4b启动子结合水平明显升高(1.67±0.10 vs 2.47±0.20)(P<0.05)。结论心肌肥厚中HDAC9可能参与下调PDE4b表达,进而参与心室肌肥厚性重构。

沉默HDAC9对牙周膜干细胞增殖与成骨分化的影响

目的探讨沉默组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)对牙周膜干细胞(periodontal liga⁃ment stem cells,PDLSCs)增殖与成骨分化的影响。方法体外分离培养及鉴定PDLSCs,构建HDAC9的siRNA转染至PDLSCs中,实验分为阴性对照组(siNC组)和实验组(siHDAC9组),qRT⁃PCR检测干扰效果,流式细胞术检测细胞周期,CCK⁃8检测细胞增殖活性,Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear anti⁃gen,PCNA)的蛋白表达;qRT⁃PCR检测Runt相关转录因子2(runt⁃related transcription factor 2,RUNX2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的mRNA表达,Western blot检测RUNX2的蛋白表达,茜素红染色检测矿化结节形成。结果相较于siNC组,siHDAC9组HDAC9 mRNA表达降低(P<0.01)。siHDAC9组PDLSCs增殖指数大于siNC组(P<0.01),增殖活性强于siNC组(P<0.05),PCNA的蛋白表达高于siNC组(P<0.01)。siHDAC9组RUNX2、ALP的mRNA表达高于siNC组(P<0.05),RUNX2蛋白表达高于siNC组(P<0.01),矿化结节数多于siNC组。结论沉默HDAC9可促进PDLSCs的增殖与成骨分化。

miR-377过表达对胶质母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移的影响及机制

目的探讨微小RNA-377(miRNA-377)过表达对胶质母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法常规培养胶质母细胞瘤细胞系A172、U373、U87、U251及正常脑胶质细胞系HEB。用qRTPCR法检测细胞中miR-377的表达。将U251细胞随机分为miR-377组、miR-CON组及Blank组,分别转染miR-377mimics、Scramble及空白对照,用qRT-PCR法检测转染效率。用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞凋亡能力,用细胞划痕实验检测细胞迁移能力。用Western blotting法检测细胞内组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)和E26转录因子1(ETS-1)蛋白表达。结果转染24 h,miR-377组miR-377相对表达量高于miR-CON组、Blank组(P均<0. 05),转染成功。与miR-CON组、Blank组比较,转染72、96 h miR-377组细胞增殖能力低(P均<0. 05),细胞凋亡率高(P均<0. 05),细胞划痕愈合率低(P均<0. 05)。miR-377组HDAC9、ETS-1蛋白相对表达量均低于miRCON组、Blank组(P均<0. 05)。结论 miR-377过表达可抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移,并促进其凋亡,其机制可能与下调HDAC9、ETS-1蛋白表达有关。

胃癌组织HDAC9蛋白高表达与病理特征及预后的关系

[目的]探讨胃癌组织中组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)蛋白高表达与病理特征及患者预后之间的相关性。[方法]回顾性选择128例胃癌患者作为研究对象,采用免疫组织化学染色法检测胃癌组织及癌旁正常组织中的HDAC9表达水平,分析HDAC9表达水平与临床病理参数之间的相关性。采用单因素和COX回归分析影响胃癌患者预后的独立危险因素。采用Kaplan-Meier法计算并比较HDAC9蛋白高表达组和低表达组远期预后和生存率。[结果]128例胃癌组织标本中有36例(28.12%)呈HDAC9蛋白低表达,92例(71.88%)呈HDAC9蛋白高表达。胃癌HDAC9蛋白表达水平与TNM分期、有无淋巴结转移、脉管侵犯、远处转移、肿瘤直径、Lauren分型、分化程度、浸润深度相关(P<0.05),而与性别、年龄、组织学分型无明显关系(P>0.05)。HDAC9低表达组的中位生存期(45.4个月,95%CI 33.7~56.2)高于HDAC9高表达组(39.3个月,95%CI 30.2~48.5),差异具有统计学意义(P=0.031)。COX回归分析结果显示肿瘤TNM分期、是否发生淋巴结转移、脉管浸润和远处转移、肿瘤直径、分化程度、浸润深度、Lauren分型均与、HDAC9蛋白高表达存在显著相关性(P<0.05),且均为影响胃癌患者预后的独立危险因素。[结论]HDAC9蛋白在胃癌组织中显著高表达,且其表达水平与肿瘤大小、分化程度以及淋巴结转移呈正相关,同时HDAC9高表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素,有望成为预测胃癌患者预后的新型生物标志物。

芥菜HDA9突变体构建及其与开花整合子SOC1、AGL24启动子互作

芥菜HDA9是去乙酰化酶家族成员,能通过开花信号整合子(SOC1、AGL24)调控开花时间,但其深入的分子调控机制仍不清楚。利用重叠延伸PCR将芥菜HDA9的3个关键活性位点(Asp172、His174和Asp261)分别突变为Ala,构建氨基酸位点突变体HDA9D172A、HDA9H174A和HDA9D261A。进一步将突变体融合到pGADT7载体,酵母单杂交表明,HDA9突变后仍能与开花整合子SOC1、AGL24的启动子结合。双荧光素酶系统深入检测发现,尽管HDA9D172A、HDA9H174A和HDA9D261A与SOC1、AGL24启动子的结合仍存在,但作用强度均显著减弱。由此暗示,芥菜HDA9的第172、174和261这3个关键活性位点可在一定程度上调节它与开花整合子的相互作用。这为HDA9开花分子调控及功能解析等深入研究奠定了基础。

丙戊酸与缺血性脑卒中相关研究进展

动脉粥样硬化和缺血性脑损伤是防治缺血性脑卒中所面临的两大难题,而细胞炎症损伤是它们的共同诱因。丙戊酸作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂,具有抑制细胞炎症因子释放及保护神经的作用,所以丙戊酸可能是防治缺血性脑卒中的潜在治疗药物。本文从组蛋白去乙酰化酶对缺血性脑卒中的影响以及丙戊酸的抗炎机制两个方面进行综述。