低剂量雌激素与中药联合用药有效防治大鼠去卵巢所致骨质丢失

目的 探讨低剂量雌激素与中药复方壮骨肾宝 (ZGSB)联合用药防治大鼠去卵巢所致的骨质疏松。方法 4月龄SD大鼠行双侧卵巢切除术 ,建立骨质疏松动物模型。对照组行假手术。每组 8只 ,共分 6组 ,假手术组 (Sham)和去卵巢组 (OVX)均用蒸馏水 (溶剂对照 )灌胃 ,其余分别为 :OVX +1 7α 炔雌醇 1 0 0 μg·kg 1 ·d 1 (高剂量雌激素组 ) ;OVX +1 7α 炔雌醇 30 μg·kg 1 ·d 1 (低剂量雌激素组 ) ;OVX +壮骨肾宝 1 0 0mg·kg 1 ·d 1 ;(壮骨肾宝组 )和OVX +1 7α 炔雌醇 30 μg·kg 1 ·d 1 +壮骨肾宝 1 0 0mg·kg 1 ·d 1 (联合用药组 ) ,灌胃给药。所有动物给药时间为 1 0周 ,实验结束前 ,行体内双荧光标记 ,实验结束后 ,取胫骨近端松质骨不脱钙硬组织包埋 ,用骨组织形态计量学对骨的静态参数和动态参数进行图像分析及统计。结果 去卵巢后大鼠体重增加 ,子宫重量减轻 ,骨量减少 ,呈现高转换型的骨质疏松表现。雌激素高、低两组均可对抗去卵巢后出现的骨质疏松 ,但低剂量组作用较弱 ,两组均有刺激子宫作用。壮骨肾宝能部分增加去卵巢后大鼠的骨量 ,以促进骨合成为主 ,对破骨细胞的抑制作用较弱。低剂量雌激素与壮骨肾宝联合用药预防去卵巢大鼠骨质疏松的作用较佳 ,比单用雌激素或单用中药的效果明显 。

骨质宁胶囊对去卵巢所致大鼠骨质疏松的实验研究

绝经后骨质疏松症（PMOP）是高龄妇女的常见病，主要由绝经引起的骨质疏松症与卵巢合成的激素降低有关。其特征是全身性的骨量减少及骨组织的微结构的改变，以致骨脆性增高，易于骨折。去卵巢诱导大鼠骨质疏松的模型较好地模拟了成年女性雌激素缺乏引起的反应，本实验采用此模型，研究骨质宁胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度及血清生化指标的影响，以探讨其作用的机制。

去卵巢所致骨质疏松大鼠骨压缩与冲击力学性能实验研究

目的研究正常鼠和去卵巢所致骨质疏松大鼠骨的压缩、冲击力学性质。方法选用280~320g,10月龄Wistar雌性大鼠20只,随机分为正常对照组10只,模型组10只。对模型组大鼠于0w摘除其卵巢。正常对照组和模型组大鼠饲养14w后,以腹主动脉放血法处死大鼠。取大鼠股骨进行压缩实验,取大鼠胫骨进行冲击实验。结果得出了大鼠股骨压缩力学性能指标和大鼠胫骨冲击力学性能指标。结论模型组压缩和冲击力学性能指标显著降低。

补肾经验方对去卵巢所致大鼠骨质疏松的防治作用

目的探讨补肾经验方对去卵巢所致大鼠骨质疏松的防治作用。方法雌性SD大鼠40只,去卵巢复制骨质疏松病理模型,随机分为空白对照组、模型组、雌激素组和补肾经验方组。空白组与模型组均灌胃生理盐水,2 m L/d;雌激素组灌胃给予戊酸雌二醇0.1 mg/(kg·d);补肾经验方组灌胃给予中药复方15 g/(kg·d),给药时间持续2个月。观测补肾经验方对去卵巢所致大鼠骨强度、长骨骨骼形态学分析和血清雌二醇(E2)、骨钙素(OPG)的影响。结果雌激素和补肾经验方组大鼠骨强度、长骨骨小梁密度和血清雌二醇(E2)、骨钙素(OPG)均有不同程度的改善,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论补肾经验方能够改善去卵巢所致大鼠骨质疏松,其抗骨质疏松可能与增加骨钙素OPG水平有关。

柚皮素对去卵巢所致大鼠骨质疏松症的影响

目的观察柚皮素对去卵巢所致大鼠骨质疏松症的治疗作用。方法 50只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柚皮素低、中、高剂量组,每组10只。假手术组施行假手术,其余4组均行卵巢摘除术,术后4周开始灌胃给予35、70、140 mg/kg柚皮素。12周后分别检测5组大鼠血清雌二醇(E2)、孕激素(P)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP),尿液钙(Ca)、磷(P)及脱氧吡啶啉(DPD)、骨密度(GMD)、股骨三点弯曲应力、L5腰椎抗压缩载荷及骨小梁形态变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠体重明显增加,子宫脏器系数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);柚皮素低、中、高剂量组大鼠体重较模型组明显降低,子宫脏器系数较模型组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),并呈剂量依赖性。与假手术组比较,模型组大鼠血清E2、P明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);柚皮素低、中、高剂量组大鼠血清E2、P较模型组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性。与假手术组比较,模型组大鼠血清TRACP及尿液Ca、P、DPD明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);柚皮素低、中、高剂量组血清TRACP及尿液Ca、P、DPD较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖性。与假手术组比较,模型组大鼠血清ALP明显增加,BGP明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);柚皮素低、中、高剂量组大鼠血清ALP较模型组明显降低,BGP较模型组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性。与假手术组比较,模型组大鼠BMD明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);柚皮素低、中、高剂量组大鼠BMD较模型组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性。与假手术组比较,模型组大鼠股骨三点弯曲应力、L5腰椎抗压缩载荷明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);柚皮素低、中、高剂量组大鼠股骨三点弯曲应力、L5腰椎抗压缩载荷较模型组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性。与假手术组比较,模型组大鼠骨小梁面积百分数、骨小梁数、骨小梁厚度明显降低,骨小梁分离度明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);柚皮素低、中、高剂量组大鼠骨小梁面积百分数、骨小梁数、骨小梁厚度较模型组明显增加,骨小梁分离度较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖性。结论柚皮素对去卵巢所致大鼠骨质疏松症具有良好的治疗作用。

二至丸对去卵巢所致AD小鼠学习记忆功能的影响

目的:探讨二至丸对去卵巢所致AD模型小鼠学习记忆的影响。方法:小鼠去卵巢后6周开始给药,假手术组与模型组灌胃等容量的蒸馏水,二至丸高、低剂量组分别灌胃二至丸混悬液2g生药/kg、1g生药/kg,阳性对照组隔天皮下注射苯甲酸雌二醇0.02mg,每日1次,连续32d。给药20d后八臂迷宫,Y迷宫检测小鼠学习能力。HE染色和尼氏染色观察海马形态学,免疫组化法检测海马Aβ含量。结果:与假手术组相比,模型组小鼠在Y迷宫中正确交替率明显降低;在八臂迷宫进入有效臂所需的总时间、总错误次数明显上升,首错前正确数降低;与模型组比较,二至丸给药组小鼠正确交替率明显提高,进入有效臂所需的总时间与总错误次数明显下降,首错前正确升高。二至丸可增加海马CA1区细胞总数,减少坏死细胞数;减少海马CA1区Aβ阳性细胞数。结论:二至丸能够改善去卵巢AD小鼠的学习记忆能力,可能与其神经元保护作用和减少Aβ沉积有关。

去卵巢所致老年痴呆模型的研究探讨

阿茨海默病又称老年痴呆,是一种神经退行性疾病,目前去卵巢所致老年痴呆模型(OVX)已被广泛应用于实验研究。本文对OVX模型的制作方法、行为学、组织病理学和生化学等方面,集合近20年的文献,对其发展进行阐述。

重组特立帕肽注射液对去卵巢所致大鼠骨质疏松模型的药效学观察

目的观察重组特立帕肽注射液对去卵巢大鼠骨质疏松治疗作用,并对市售原研产品复泰奥进行比较。方法选择60只雌性SD大鼠,依据动物的体质量、骨密度分为Sham组和双侧去卵巢(OVX)组,OVX组动物切除双侧卵巢;手术8周后,对OVX组再随机分为6组,分别接受赋形剂或不同剂量受试药及复泰奥治疗,连续治疗8周;取各组动物第L1~L4截段进行BMD检测,取L4腰椎和左股骨进行生物力学评价。结果治疗结束时赋形剂亚组BMD显著低于假手术组及受试药和复泰奥各组,相同剂量的受试药物和复泰奥均无显著性差异。结论重组特立帕肽注射液可显著改善去卵巢动物的BMD及腰椎最大荷载,受试药和复泰奥的药效表现相似。

跑台运动对去卵巢应激大鼠海马自噬诱导细胞凋亡的影响

背景:围绝经期抑郁症大鼠海马区细胞凋亡与自噬失衡,与认知功能下降密切相关,有氧运动能否通过促进海马自噬降低细胞凋亡从而改善围绝经期抑郁症大鼠的学习记忆能力目前尚不清楚。目的:探讨4周中等强度跑台训练改善去卵巢结合慢性应激大鼠学习记忆能力的可能机制。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、去卵巢应激组和去卵巢应激运动组,每组10只。除假手术组大鼠外,其余3组大鼠摘除卵巢建立围绝经期模型,后2组再运用慢性不可预测性应激构建抑郁症模型,造模后去卵巢应激运动组大鼠接受4周中等强度跑台运动。在运动及应激结束后采用悬尾实验及糖水偏爱实验测试大鼠抑郁样行为,采用八臂迷宫实验测试大鼠学习记忆行为,Western blot检测大鼠海马中AMPK、mTOR、ULK1和凋亡因子Caspase-3及自噬标志物LC-3Ⅱ、Beclin-1的蛋白表达。结果与结论:①与假手术组相比,去卵巢组及去卵巢应激组大鼠悬尾实验中静止时间延长,糖水偏爱实验中糖水摄入量及糖水偏爱率下降;②与假手术组相比,去卵巢组大鼠工作记忆错误次数、参考记忆错误次数和完成时间均显著增加,去卵巢应激组上述指标增加更显著;③与去卵巢应激组相比,去卵巢应激运动组大鼠工作记忆错误次数、参考记忆错误次数和完成时间均显著减少;④与假手术组相比,去卵巢组及去卵巢应激组大鼠海马组织中凋亡因子Caspase-3蛋白表达显著升高,自噬相关因子Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白表达显著降低,AMPK和ULK1蛋白表达显著降低,而mTOR蛋白表达升高,去卵巢应激组上述指标变化更为显著;⑤与去卵巢应激组相比,去卵巢应激运动组大鼠海马组织中凋亡因子Caspase-3蛋白表达显著降低,自噬相关因子Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白表达显著升高,AMPK和ULK1蛋白表达显著升高,mTOR蛋白表达显著降低。结果表明,4周中等强度跑台运动可能通过AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路促进细胞自噬,减少细胞凋亡,进而增强去卵巢抑郁模型大鼠的学习记忆能力。

中等强度运动对去卵巢大鼠骨组织自噬水平的影响

背景:运动是防治骨质疏松症的有效方式,但仍不清楚其影响绝经后骨质疏松的机制是否与骨自噬水平改变有关。目的:观察运动经细胞自噬对去卵巢大鼠骨组织形态和力学性能的影响,从自噬的角度来探讨运动对去卵巢大鼠骨量的作用机制。方法:建立去卵巢大鼠模型,进行为期24周的中等强度有氧运动干预。实验后使用ELISA法测定血清雌二醇水平,micro-CT检测胫骨皮质骨、松质骨骨密度以及骨微结构,三点弯曲实验检测胫骨生物力学指标,透射电镜观察自噬体,Western blot分析LC3、ATG7蛋白表达。结果与结论:①去卵巢安静组大鼠血清雌二醇水平显著低于假手术安静组和去卵巢运动组(P<0.01);②各组大鼠体质量均增加,且去卵巢安静组>去卵巢运动组>假手术安静组>假手术运动组;③各组大鼠骨密度、骨量均显著增加(P<0.01),但去卵巢安静组增加程度明显低于其他组,去卵巢运动组增加程度明显高于去卵巢安静组;④与假手术安静组相比,假手术运动组大鼠的胫骨松质骨骨密度显著增加(P<0.01),去卵巢安静组和去卵巢运动组显著降低(P<0.01);⑤去卵巢安静组大鼠骨体积分数、骨小梁数量、松质骨骨密度显著低于去卵巢运动组(P<0.05),骨小梁厚度极显著低于去卵巢运动组(P<0.01),骨小梁模式因子、骨小梁分离度、结构模型指数显著高于去卵巢运动组(P<0.01);⑥与去卵巢安静组相比,去卵巢运动组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和ATG7蛋白的相对表达量显著增加(P<0.05);与假手术安静组相比,假手术运动组大鼠骨组织中自噬体数量增加(P<0.05);与去卵巢安静组相比,去卵巢运动组大鼠骨组织中自噬体数量增加(P<0.05)。由此可见,中等强度跑台运动可通过提高去卵巢大鼠血清雌二醇水平和骨组织自噬水平,改善其胫骨松质骨的骨微结构和骨生物力学性能,增加骨量。

酒花提取物调控Wnt/β-catenin信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠的作用及机制研究

目的探讨酒花提取物对去卵巢骨质疏松大鼠的作用及机制。方法将60只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(戊酸雌二醇,0.105 mg·kg^(-1))和酒花提取物低、中、高剂量组(65.625、131.120、196.875 mg·kg^(-1)),每组10只。除假手术组外,其余各组大鼠均切除双侧卵巢,术后灌胃给药,每日1次,连续给药90 d。采用HE染色法观察大鼠骨组织病理形态变化,测定骨形态计量学参数,计算骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和骨小梁面积百分数(Tb.Ar);测定大鼠骨组织生物力学指标:最大载荷、弹性模量、断裂强度;采用ELISA法测定大鼠血清雌激素(E_(2))、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP5b)、骨钙素(OC)、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)含量;采用全自动生化仪测定大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)含量;采用RT-PCR及Western Blot法检测大鼠胫骨组织OPG、RANKL、ERα、ERβ、Wnt16、β-catenin mRNA及蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠胫骨骨小梁断裂,骨髓腔变大,呈现骨质疏松结构;胫骨Tb.N、Tb.Th、Tb.Ar明显降低(P<0.05),Tb.Sp明显升高(P<0.05);股骨的最大载荷、弹性模量和断裂强度均明显降低(P<0.05);血清E_(2)含量明显降低(P<0.05),TRACP5b、OC、ALP、BALP含量均明显升高(P<0.05);胫骨组织的OPG、OPG/RANKL、ERα、ERβ、β-catenin、Wnt16 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.05),RANKL mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组及酒花提取物高剂量组的上述指标均明显回调(P<0.05)。结论酒花提取物对绝经后骨质疏松症具有一定的防治作用,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路,进而调控OPG/RANK/RANKL信号通路有关。

中等强度跑台运动对去卵巢大鼠骨量和肠道菌群影响的研究

目的:研究中等强度跑台运动对去卵巢大鼠肠道菌群的影响,探讨肠道菌群与骨量之间的相关性。方法:60只雌性3月龄SPF级Sprague-Dawley大鼠,随机分为去卵巢组(OVX组)、去卵巢运动组(OVX+EX组)和假手术组(SHAM组),运动结束后采用双能X线骨密度仪测定体成分和骨密度,Micro-CT扫描股骨观察骨微结构,16S rRNA高通量测序分析肠道菌群的变化。结果:(1)与SHAM组相比,OVX组大鼠体重、脂肪含量显著上升,肌肉含量、骨密度均显著降低,骨小梁微结构破坏严重;与OVX组相比,OVX+EX组大鼠体重和脂肪含量显著降低,肌肉含量和第4腰椎骨密度显著升高,股骨骨密度显著升高,OVX+EX组大鼠骨小梁数目增加且连续性提高。(2)与SHAM组相比,OVX组大鼠α多样性增加,厚壁菌门/拟杆菌门(F/B)显著降低,普雷沃氏菌的相对丰度增加,颤螺菌属、瘤胃球菌属、阿克曼菌属和粪球菌属的相对丰度降低;与OVX组相比,OVX+EX组大鼠厚壁菌门/拟杆菌门的相对丰度显著升高,普雷沃氏菌的相对丰度降低,瘤胃球菌属的相对丰度显著增加。其中,普雷沃氏菌与骨量显著负相关,瘤胃球菌属与骨量显著正相关。结论:卵巢切除术改变了大鼠肠道微生物群的组成,中等强度跑台运动改善了去卵巢大鼠体成分和骨量,其机制可能通过调节大鼠肠道菌群中普雷沃氏菌、瘤胃球菌属的丰度实现。

基于去卵巢大鼠开展针灸治疗绝经后骨质疏松症的实验研究进展

绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是随着年龄的增长女性绝经后,骨吸收超过骨形成,导致骨量减少、骨脆性升高、骨组织显微结构退化,临床表现为易发生骨折的一种代谢疾病[1-2]。以往研究表明PMOP主要是由于雌激素水平的下降导致[3-4],但近年来已有越来越多的研究发现PMOP的发病涉及骨免疫异常、慢性炎性反应、骨髓微循环障碍等多方面、多通道因素调控[5]。目前,在国内外治疗PMOP方面,药物治疗仍是最常用的方法。然而,长期持续使用这些药物往往会产生一定的毒副作用[6]。针灸作为一种高效的、无毒副作用的疗法已大量应用于临床治疗PMOP,且取得较佳疗效[7-9]。一项纳入16项研究涉及1585例PMOP患者在内的系统评价表明针灸治疗在改善PMOP骨痛、提高临床有效率等方面具有较好疗效[10],为针灸治疗PMOP提供临床证据。

青娥方对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨青娥方对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将72只3月龄SPF级雌性SD大鼠分为假手术组、模型组和青娥方组,每组24只。大鼠均按40 mg/kg腹腔注射2%戊巴比妥钠溶液麻醉,于下腹部正中作切口,模型组和青娥方组均切除双侧卵巢,假手术组切除卵巢周围少量脂肪组织后立即关腹,缝合伤口。造模1周后,假手术组和模型组予2 mL0.9%氯化钠溶液灌胃,青娥方组按浸膏量0.42 g/(kg·d)予青娥方药液灌胃,每日1次,连续灌胃12周。3组分别于干预4、8、12周后各处死8只并取材。Masson染色法观察股骨颈形态;检测股骨骨密度和骨生物力学指标最大载荷;ELISA法检测血清PI3K、Akt含量;qPCR和Western blot检测腰椎PI3K、Akt和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)mRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果 与假手术组比较,模型组干预第4周腰椎Akt mRNA相对表达水平明显升高(P<0.05);第12周股骨最大载荷明显降低(P<0.05);第8、12周股骨骨密度明显降低(P<0.05),腰椎PI3K mRNA相对表达水平均明显升高(P<0.05),PI3K蛋白表达量明显升高(P<0.05);第4、8、12周血清PI3K、Akt含量均明显升高(P<0.05),腰椎Akt、GSK3β蛋白表达量均明显升高(P<0.05),GSK3β mRNA相对表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,青娥方组干预第4周腰椎Akt mRNA相对表达水平和蛋白表达量明显降低(P<0.05);第12周股骨最大载荷明显升高(P<0.05),血清Akt含量均明显降低(P<0.05),腰椎Akt蛋白表达量明显降低(P<0.05);第8、12周股骨骨密度明显升高(P<0.05),腰椎PI3K、GSK3β mRNA相对表达水平均明显降低(P<0.05),PI3K蛋白表达量明显降低(P<0.05);第4、8、12周血清PI3K含量明显降低(P<0.05)。结论青娥方可改善去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度及骨生物力学性能,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。

葛根异黄酮通过调控LKB1/AMPK/PGC⁃1α信号通路对去卵巢大鼠心肌损伤的保护作用

目的研究葛根异黄酮对去卵巢大鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇组(0.1 mg/kg)和葛根异黄酮低、中、高剂量组(55、110、220 mg/kg)。模型组和各给药组大鼠切除双侧卵巢,假手术组大鼠仅切除卵巢周边小块脂肪组织。手术后2周开始给药,每天1次,每周6 d,连续灌胃给药16周。第16周末,通过PowerLab检测血流动力学[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均压(MBP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVMP)、等容收缩期左心室内压力最大上升和下降速率(±dp/dt_(max))];HE染色观察心脏组织病理变化;生化分析仪检测血浆中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及葡萄糖(Glu)水平;比色法检测心肌组织中三磷酸腺苷(ATP)水平;RT-qPCR法检测心肌组织中葡萄糖转运蛋白4(GLUT 4)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(CPT-1α)、酰基辅酶A-羧化酶(ACC)、肝激酶B1(LKB 1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活酶因子1α(PGC-1α)mRNA表达;Western blot法检测心肌组织中能量代谢相关蛋白LKB1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α表达。结果与模型组比较,葛根异黄酮组SBP、DBP、MBP、LVSP、LVMP降低(P<0.05,P<0.01),-dp/dt_(max)升高(P<0.05,P<0.01);去卵巢所致大鼠心肌纤维溶解、间隙增宽及炎性浸润情况得到改善;LDH、CK活性降低(P<0.05);心肌组织ATP水平升高(P<0.05,P<0.01);TC、TG、LDL-C及Glu水平降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平升高(P<0.05,P<0.01);心肌组织GLUT4、LDHA、CPT-1α、ACC、LKB1、AMPK、PGC-1αmRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);心肌组织LKB1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论葛根异黄酮对去卵巢所致的大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制与改善心肌组织能量代谢相关蛋白,调控LKB1/AMPK/PGC-1α能量代谢相关信号通路有关。

杜仲汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响及机制研究

目的探讨杜仲汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响及机制。方法将42只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组(戊酸雌二醇,0.09 mg·kg^(-1))、谷胱甘肽组(36 mg·kg^(-1))以及杜仲汤低、中、高剂量组(0.54、1.08、2.16 g·kg^(-1))。去卵巢模型大鼠复制成功后,按照设定剂量灌胃给药,灌胃体积为10 mL·kg^(-1),每日1次,连续给药200 d。采用生化试剂盒检测大鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)含量;ELISA法检测大鼠血清中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、骨保护素(OPG)含量;骨密度仪检测大鼠股骨骨密度;HE染色法观察大鼠胫骨组织病理变化;Western Blot法检测骨组织中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、OPG、一型胶原(COL1)蛋白表达水平;RT-PCR法检测骨组织中BMP-2、Runt相关转录因子2(RUNX2)mRNA表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠体质量增长值显著升高(P<0.01);血清GSH、OPG的水平显著降低(P<0.05,P<0.01),TRACP水平显著升高(P<0.01);骨密度明显降低(P<0.05);骨小梁结构不完整,出现明显断裂,小梁数稀疏且明显变薄;骨组织中BMP-2、OPG、COL1蛋白表达水平均显著下降(P<0.01),BMP-2、RUNX2mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,杜仲汤低、中、高剂量组大鼠体质量增长值均显著降低(P<0.05,P<0.01),血清GSH水平显著升高(P<0.01),骨小梁结构明显改善,骨小梁变粗,数量增加,骨组织中BMP-2、RUNX2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.01);杜仲汤中剂量组大鼠的血清OPG水平显著升高(P<0.01);杜仲汤低剂量组大鼠的血清TRACP水平显著降低(P<0.01),骨组织中COL1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);杜仲汤低、中剂量组大鼠的骨密度显著升高(P<0.01),骨组织中OPG蛋白表达水平明显升高(P<0.01);杜仲汤中、高剂量组大鼠骨组织中BMP-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论杜仲汤能提高去卵巢大鼠的骨密度,保护骨小梁完整性,对去卵巢大鼠骨质疏松症有一定防治作用,其机制可能与提高血清GSH、OPG水平,降低TRACP水平,上调BMP-2、OPG、COL1蛋白以及BMP-2、RUNX2mRNA表达,从而促进骨形成有关。

蒙药塔布森-2对于去卵巢大鼠骨质疏松软骨细胞自噬的作用

目的:绝经后妇女的骨质疏松症是我国妇女的常见病,其发生与血清雌二醇含量的下降有关,表现为全身骨密度绝对值的下降。软骨是关节的缓冲结构,骨质疏松发生时,往往伴有软骨组织的一系列改变。本实验采取手术切除大鼠卵巢的方法来制造骨质疏松模型,来阐明复方蒙药塔布森-2干预骨质疏松的机制,蒙药塔布森-2抗骨质疏松体现了“补暖、补精-抑制赫依-固骨质、壮骨”的生物学效应。方法:选择6月龄SD系SPF级健康雌性大鼠。SD大鼠70只,随机分为7组,每组10只,分别为空白对照组,去卵巢骨质疏松模型组,蒙药塔布森-2高、中、低剂量组,中药对照组骨疏康组,阳性对照组己烯雌酚组。实验大鼠以浓度为7%的水合氯醛溶液(3 mL/kg)腹腔注射麻醉,由背部进入,完整摘除双侧卵巢,止血缝合。空白对照组仅将卵巢从腹腔提出而不切除(仅切除卵巢周围少量脂肪组织)。术后10周从两组分别随机选出10只大鼠采用双能X线骨密度仪进行检测骨密度,以验证造模是否成功。术后正常饲喂12周,从第13周开始,蒙药塔布森高、中、低剂量及阳性药物组和中药对照组分别给予相应药物灌胃,给药体积均为1 mL(100 g体质量·d)。模型组、空白对照组给予生理盐水灌胃,给药体积均为1 mL(100 g体质量·d)。连续给药12周。灌胃直至第24周期满,末次给药后活体测量全身骨密度。麻醉致死大鼠,打开大鼠右侧膝关节,用刀片小心刮下附着在膝关节骨表面的关节软骨,取材后制成石蜡切片用于HE染色观察;其余软骨组织-80℃冻存,用于Western Blot免疫印迹分析。数据使用SPSS19.0统计分析软件处理,每组数据用均数±标准差(均数±标准差)的形式统计,P<0.05认为差异有显著性。结果:对比于空白对照组,中药对照组骨疏康组,阳性对照组己烯雌酚组,蒙药塔布森-2高、中剂量治疗组,模型组、蒙药塔布森-2低剂量治疗组骨密度值降低、HE染色软骨细胞数量减少、WesternBlot免疫印迹分析软骨组织内GPR30、HSP60蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组,中药对照组骨疏康组,阳性对照组己烯雌酚组,蒙药塔布森-2高、中剂量治疗组之间比较,骨密度值、HE染色软骨细胞数量、WesternBlot免疫印迹分析软骨组织内GPR30、HSP60蛋白表达,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、蒙药塔布森-2低剂量治疗组之间比较,骨密度值、HE染色软骨细胞数量、WesternBlot免疫印迹分析软骨组织内GPR30、HSP60蛋白表达,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复方蒙药塔布森-2可以增强去卵巢绝经后骨质疏松大鼠的骨密度,抑制其骨丢失,复方蒙药塔布森-2具有明确的抗绝经后骨质疏松作用;探讨蒙药塔布森-2“补肾气、补暖、补精—抑制赫依—固骨质、壮骨”治疗骨质疏松症疗效机制,为蒙医药防治骨质疏松症研究提供新的思路。

金水宝对去卵巢小鼠骨质疏松的保护作用及其机制

目的探讨金水宝对去卵巢小鼠骨质疏松的保护作用及其机制。方法将30只雌性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、金水宝组,每组10只。模型组和金水宝组小鼠采用去卵巢方法构建绝经后骨质疏松症模型,造模第10天开始,金水宝组给予金水宝悬液386 mg/kg灌胃,对照组和模型组给予等体积双蒸水灌胃,均1次/d,每周连续灌胃6 d,连续灌胃15周。采用micro-CT检测小鼠的股骨微结构(骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁分离度)及骨密度,采用ELISA法测定小鼠血清I型胶原C端肽(CTX-I)、I型原胶原N端前肽(PINP)、骨碱性磷酸酶(BALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平,采用Western blot法检测小鼠骨组织中低氧诱导因子-2α(HIF-2α)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠股骨微结构破坏,骨体积分数、骨小梁数量、骨密度均明显降低(P均<0.05),骨小梁分离度及血清CTX-I、PINP、BALP、TRAP水平和骨组织中HIF-2α、TRAF6蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,金水宝组小鼠股骨微结构破坏减轻,骨体积分数、骨小梁数量、骨密度均明显升高(P均<0.05),骨小梁分离度及血清CTX-I、PINP、BALP、TRAP水平和骨组织中HIF-2α、TRAF6蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论金水宝可有效改善去卵巢小鼠骨质疏松,机制可能与抑制HIF-2α/TRAF6信号通路,调节骨代谢相关。

力量训练改善去卵巢模型大鼠骨损伤的作用机制

背景:绝经后骨质疏松导致骨折风险明显增加,严重影响患者生活质量。运动疗法是骨质疏松患者重要的非药物手段和防治策略,其中力量训练是最佳方式,然而其具体生物学机制尚未确定。目的:探讨力量训练对去卵巢大鼠骨形态学、材料学和生物力学的影响,探讨细胞外基质重塑在其中的作用机制。方法:48只雌性SD大鼠依据随机数字表法分为假手术组、假手术运动组、去卵巢组和去卵巢运动组。去卵巢组和去卵巢运动组采用双侧卵巢摘除术建立绝经动物模型,假手术组和假手术运动组进行假手术。术后4周,假手术运动组和去卵巢运动组进行12周尾部负重爬梯训练,假手术组和去卵巢组在鼠笼内安静饲养。最后一次训练后分离双侧股骨和胫骨,右侧胫骨用于双能X射线骨密度仪测定以及生物力学、生物物理学和生物化学分析,左侧胫骨用显微计算机断层扫描进行骨微结构检测,右侧股骨行苏木精-伊红染色以及组织学观察,左侧股骨采用免疫印迹法和明胶酶谱法检测细胞外基质代谢相关因子的蛋白表达量或酶活性。结果与结论:①与假手术组比较,去卵巢组最大载荷和刚度下降(P<0.05),骨密度、骨矿密度、骨无机质含量、骨钙含量降低(P<0.05),骨水含量升高(P<0.05),骨小梁体积分数、骨小梁连接密度、骨小梁数量降低(P<0.05),骨小梁分离度、结构模型指数升高(P<0.05),骨组织脂肪细胞数量和横截面积增加(P<0.05),基质金属蛋白酶2活性下降(P<0.05),金属蛋白酶组织抑制物1和骨保护素蛋白表达升高(P<0.05)。②与去卵巢组比较,去卵巢运动组最大载荷、刚度、断裂载荷和弹性升高(P<0.05),骨密度、骨矿含量、骨矿密度、骨无机质含量、骨钙含量增加(P<0.05),骨水含量下降(P<0.05),骨小梁分离度、骨髓面积下降(P<0.05),骨小梁厚度、皮质骨体积分数、皮质骨面积分数、皮质骨厚度、皮质骨孔隙度增加(P<0.05),骨组织脂肪细胞数量和横截面积减少(P<0.05),基质金属蛋白酶2活性升高(P<0.05),金属蛋白酶组织抑制物1、Runt相关转录因子2、骨保护素蛋白表达下降(P<0.05)。结果表明,力量训练能够对雌激素缺乏所致的骨损伤起保护作用,表现为骨生物力学特性、骨组织成分和骨微结构改善,其机制与调控细胞外基质重塑有关。