雌性大鼠去卵巢模型中脑神经内分泌信号异常传导的机理

目的比较正常大鼠和去卵巢大鼠脑内主要神经信息分子的种类和含量,以观察生理和病理状态下,神经内分泌信号传导通路的异同,初步探讨卵巢(雌激素)对神经内分泌信号传导机制。方法观察大鼠脑组织神经元细胞病理形态,运用高效液相色谱-荧光检测器定量检测不同脑区及血清中肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)及高香草酸(HVA)的含量变化。结果脑组织HE染色显示OVX组大鼠脑内神经元退化比假手术组明显。与假手术组相比,OVX组大鼠的NE、E含量降低,差异具有统计学意义的区域分别为海马和血清;HVA在丘脑中含量比假手术组升高;DA含量在皮质区比假手术组下降。与假手术组比较,OVX组在海马和小脑区5-HT含量上升,而5-HIAA含量下降;在皮质、丘脑和血清中,OVX组5-HT含量较假手术组下降,而5-HIAA含量升高。结论去卵巢大鼠的雌激素水平低下状态可能引起脑组织携带的主要信息分子(经典神经递质、氨基酸类递质)释放或合成发生异常,因此去卵巢模型大鼠可以作为一种神经内分泌信号异常的载体,为围绝经期综合征的信号传导的研究提供了一种新的思路和方法。

姜黄葛根白芍片对去卵巢大鼠模型骨密度的影响研究

目的研究姜黄葛根白芍片对去卵巢大鼠模型骨密度的影响,探讨其增加骨密度的作用。方法采用去卵巢的方法建立大鼠骨质疏松模型,用不同浓度的姜黄葛根白芍片灌胃剂量组动物,12周后检测其骨密度、股骨恒重和骨钙含量,观察骨组织病理形态,评价其增加骨密度的作用。结果与模型组对比,姜黄葛根白芍片低、中、高剂量组大鼠的骨密度和股骨恒重均显著增加,中、高剂量组的骨钙含量显著高于模型组,各剂量组骨组织的病理组织学指标与模型组相比有显著性改善。结论姜黄葛根白芍片具有增加大鼠骨密度和骨钙含量的作用,并且能够改善骨组织的病理形态,对治疗临床绝经后骨质疏松症有一定作用。

五加丹方对去势模型大鼠血清性激素及下丘脑弓状核Kiss-1、GPR54、GnRH基因表达的影响

目的:探讨五加丹方对去卵巢大鼠血清中FSH、E2及下丘脑弓状核组织匀浆Kiss-1、GPR54、GnRH·RNA表达的影响,进一步探讨五加丹方对绝经综合征的作用机制。方法:将64只成年期雌性大鼠随机分为7组,空白组、模型组、中药对照组、西药对照组各10只,五加丹方高、中、低剂量组各8只。除空白组外,其余各组均手术去势。各组灌胃给药每日1次,正常组及模型组给予等剂量生理盐水灌胃每日1次,实验过程中空白组大鼠灌胃死亡1只。连续给药4周后,腹主动脉取血并处死大鼠,脑立体定位留存下丘脑弓状核组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)含量,PCR技术检测各组大鼠下丘脑弓状核Kiss-1、GPR54、GnRH mRNA表达水平。结果:(1)与空白组比较,模型组FSH水平明显升高(P<0.01),E2水平明显下降(P<0.01)。与模型组比较,西药对照组血清E2水平明显升高(P<0.01),五加丹方高剂量组、中剂量组、中药对照组血清E2水平也明显升高(P<0.05)。各给药组血清FSH含量均下降,五加丹方高剂量组与西药对照组下降明显(P<0.01),中药对照组、五加丹方中剂量组、低剂量组也明显降低(P<0.05)。(2)与空白组比较,模型组Kiss-1 mRNA、GPR54 mRNA、GnRH mRNA表达均明显上升(P<0.01);与模型组比较,五加丹方高剂量组、中剂量组、西药对照组的Kiss-1 mRNA、GPR54 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,五加丹方高剂量组、西药对照组GnRH mRNA表达明显下降(P<0.01);五加丹方中剂量组明显降低(P<0.05)。结论:五加丹方可以改善去势模型大鼠的血清性激素水平,可以降低去势模型大鼠下丘脑弓状核Kiss-1、GPR54、GnRH mRNA的过高表达,这可能是五加丹方临床治疗绝经综合征的生殖内分泌机制。

海洋骨胶原肽对去卵巢大鼠体重以及胰腺细胞凋亡和组织病变的影响

目的探讨海洋骨胶原肽(MOP)对去卵巢大鼠体重和胰腺细胞凋亡和组织病变的影响。方法将70只SD大鼠随机分为7组:假手术组(A组),去卵巢对照组(B组),去卵巢后加MOP 0.375g/kg干预组(C组),去卵巢后加MOP 0.75g/kg干预组(D组)。去卵巢后加MOP 1.5 g/kg干预组(E组),去卵巢后加MOP 3.0g/kg干预组(F组),去卵巢后加MOP6.0g/kg干预组(G组)。3个月后检测各组大鼠的体重,然后处死大鼠分离摘取胰腺,常规石蜡包埋切片后进行HE染色和TUNEL凋亡检测,观察胰腺组织的病理变化和胰腺细胞的凋亡情况。结果B组3个月后体重增加值明显高于其他组。G组的体重增加值明显低于其他组。HE染色结果:A组未见明显病理改变。其他各去卵巢大鼠组胰腺都可见不同程度的炎症细胞浸润、脂肪变性和坏死等病理表现。TUNEL标记胰腺细胞凋亡数比较:A组显著低于其他6个去卵巢大鼠组(P<0.01);去卵巢大鼠组间比较:B、C、D组都显著高于E、F、G组(P_(B,C)<0.01,P_D<0.05)。而E、F、G组之间没有显著性差异。结论肥胖症的发生以及胰腺细胞凋亡和炎症性坏死或脂肪变性可能是绝经期妇女发生胰岛素抵抗(IR)和糖代谢异常的病理基础。较低剂量(1.5g/kg)MOP就能明显抑制去卵巢大鼠胰腺细胞凋亡,保护胰腺组织减轻炎症损伤变性坏死;较高剂量(6.0g/kg)MOP能明显抑制去卵巢大鼠体重增加。MOP可望应用于绝经期妇女骨质疏松症、IR和心血管疾病的防治。

补肾中药组方对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治效果及机制

目的 建立原发性骨质疏松症(POP)动物模型，研究不同剂量补肾中药组方对去卵巢大鼠(OVX)骨质疏松的防治效果及其影响机制，为防治骨质疏松症(OP)提供安全、有效且经济的药物。方法 (1)经过药物筛选和专家咨询制定补肾中药组方；(2)通过卵巢摘除建立POP，并通过病理检查和骨密度测定来判定模型建立；(3)研究补肾中药不同剂量对去卵巢大鼠OP的防治效果(测定其对骨密度。

毓宫合剂对双卵巢切除后大鼠作用的实验研究

目的:观察复方中药毓宫合剂对卵巢切除术后大鼠血清E2含量、子宫重量、组织结构的影响,并探讨其治疗机理。方法:切除大鼠双侧卵巢,分组给以生理盐水、乙烯雌酚、毓宫合剂4周,然后测定血清E2含量、称取子宫湿重、观察子宫组织结构。结果:生理盐水组血清E2含量明显低于其它各组(P<0.01),毓宫合剂组与乙烯雌酚组间无差异;毓宫合剂组大鼠子宫重量增加(P<0.01),子宫平滑肌细胞增生肥大,子宫及子宫内膜发育。结论:毓宫合剂能够升高去卵巢大鼠血清E2含量,促进子宫及子宫内膜发育。

强肾片对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

探索强肾片对去卵巢致大鼠骨质疏松的影响。方法:切除卵巢建大鼠骨质疏松模型,测定强肾片给药后,骨密度,骨的生物力学特征和生化指标的变化。结果:强肾片增加去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、骨矿含量和雌激素水平,降低血清骨钙素,增加股骨重量、骨强度,骨钙含量和骨小梁直径。结论:强肾片对去卵巢大鼠骨质疏松有对抗作用。

阴道萎缩大鼠模型的建立及在药效评价中的应用

目的建立适宜筛选阴道用制剂药效学的动物模型,给予相应药物并评价监测药物治疗效果的生物学指标。方法采用大鼠双侧卵巢摘除术(ovariectomy,OVX)建模,观察OVX后15~21 d大鼠动情周期、子宫湿重和阴道组织形态学,判断术后阴道萎缩模型建立成功的最佳时间。SD雌性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、药物1组、药物2组和溶剂对照组,每组10只。药物1组、药物2组和溶剂对照组每日分别阴道给予普罗雌烯软膏、更宝芬和等质量溶剂,连续14 d。末次给药后3 d测定大鼠体质量和子宫湿重,HE染色法分析阴道组织形态学,免疫组织化学法检测雌激素受体蛋白α(estrogen receptors-α,ERα)表达。结果OVX后21 d已造成明显阴道萎缩,适宜进行后续实验。OVX后17~21 d无动情周期变化,术后21 d阴道上皮厚度显著降低(P<0.05),阴道褶皱变少,无鳞状上皮细胞覆盖;体质量上升(P<0.05),子宫湿重下降(P<0.05)。药物1组和药物2组阴道萎缩症状明显改善,给药组大鼠体质量较模型组下降(P<0.05),阴道组织形态学受损情况得到改善,组织ERα蛋白表达增加(P<0.05),子宫/体质量比上升(P<0.01),但子宫内膜厚度未明显增加(P>0.05)。结论大鼠OVX模型适宜用作筛选阴道用制剂,阴道组织形学态、子宫内膜厚度、子宫/体质量比可作为监测药物疗效的指标。

阿仑膦酸钠对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度及骨张力的影响

目的观察阿仑膦酸钠(ALN)去卵巢骨质疏松大鼠的防治效果,为临床治疗骨质疏松用药方案的选择提供依据。方法 3个月龄雌性SD大鼠,随机分组后去卵巢后造成骨质疏松模型,大鼠分为5组,正常组、假手术组、模型组、钙剂组(对照组)、阿仑膦酸钠片组(治疗组),分别灌胃给药90d。取右股骨测其骨密度(BMD),取左股骨观察其骨张力的。结果 ALN和钙剂治疗均可提高骨质疏松大鼠的骨密度,改善股骨的骨张力。ALN较钙剂更能明显提高骨质疏松大鼠的骨密度和增强其骨张力。结论 ALN有明确的治疗骨质疏松的作用。

17β雌二醇和α玉米赤霉醇影响大鼠血液凝固和纤维蛋白溶解功能

为探讨 17β雌二醇及植物雌激素α玉米赤霉醇对去势大鼠凝血及纤溶功能的影响 ,并对二者的作用进行比较分析。选用 36只健康成年雌性Wistar大鼠 ,随机分为 4组 (每组均为 9只 ) :假手术对照组 ;去卵巢组 ;去卵巢 +补充 17β雌二醇组 ,去卵巢 14天后肌注 17β雌二醇 (1mg kg ,3天注射一次 ,共 35天 ) ;去卵巢 +补充α玉米赤霉醇组 ,去卵巢 14天后肌注α玉米赤霉醇 (1mg kg ,3天注射一次 ,共 35天 )。实验结束后大鼠经颈总动脉采血 ,分离血浆。用凝固法测定血浆凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间。用全自动生物化学分析仪测定血浆纤维蛋白原水平。用酶联免疫吸附法测定血浆组织因子水平。组织型纤溶酶原激活剂及纤溶酶原激活剂抑制物活性测定均采用发色底物法。结果发现 ,去卵巢组大鼠与对照组相比 ,凝血酶原时间明显缩短 ,而纤维蛋白原 ,组织因子等均明显升高 ,组织型纤溶酶原激活剂活性明显降低 ,而纤溶酶原激活剂抑制物活性明显升高 ;补充 17β雌二醇组或α玉米赤霉醇后 ,除纤溶酶原激活剂抑制物活性下降不明显外 ,大鼠的其他上述指标均与对照组接近 ,而与单纯去卵巢组有显著性差异。各组间活化部分凝血活酶时间的变化尚无统计学差异。以上结果表明 ,大鼠去卵巢后 ,内源性雌激素水平下降 。

金刚健骨片对去卵巢模型鼠TGF-β1及IGF-1表达的影响

目的:观察金刚健骨片对去卵巢大鼠骨组织中TGF-β1及IGF-1表达的影响,进一步探讨金刚健骨片治疗绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:将健康清洁级雌性SD大鼠40只随机分为5组,即假手术(A)组、金刚健骨片大剂量(B)组、金刚健骨片小剂量(C)组、雌激素(D)组、模型(E)组。所有大鼠常规饲料喂养,造模成功后使用对应药物灌胃治疗12周。治疗结束后处死大鼠采集第三腰椎为标本,采用免疫组化法检测TGF-β1及IGF-1在骨组织中的表达。数据使用SPSS16.0软件统计,检验水准α=0.05.结果:①TGF-β1在骨组织中的表达,B组、D组与E组比较差异有统计学意义(P<0.05);B组与D组比较其差异无统计学意义(P>0.05)。C组与E组比较其差异无统计学意义(P>0.05);C组、E组与A组比较其差异均有统计学意义(P<0.01)。②IGF-1各组间比较差异无统计学意义。结论:①金刚健骨片能使TGF-β1在骨组织中的表达增强,其治疗作用与雌激素治疗相仿,并能修复或者改善骨组织微细结构。②骨组织中IGF-1含量与雌激素关联不明显,金刚健骨片可略提高IGF-1的表达,但无统计学意义。

葛根素对去卵巢大鼠骨质疏松和血脂的作用

激素替代疗法（HRT）对绝经后骨质疏松防治效果肯定，但HRT使心血管疾病发生的相对风险增加22％，对脂代谢影响尚无定论，长期应用可引起子宫内膜癌和乳腺癌。一些植物雌激素具有选择性雌激素受体调节功能，与合成雌激素有相似的抗绝经后骨质疏松作用。葛根素属植物雌激素，有扩张血管、改善心脑供血和抗动脉粥样硬化的作用。近年的研究表明，葛根异黄酮可降低去卵巢大鼠肝内胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平，体外研究提示葛根素有抑制骨吸收的作用，但葛根素对去卵巢大鼠骨质疏松和血脂代谢的系统研究报道较少。我们对去卵巢大鼠模型给予葛根素，观察骨质疏松大鼠骨密度、骨生物力学指标和血脂的变化。

山茶籽茶麸醇提物对去卵巢阿尔茨海默病大鼠学习记忆和脑源性神经营养因子的影响

目的观察山茶籽茶麸醇提物对去卵巢阿尔茨海默病(Alzheimer'sDisease,AD)大鼠学习记忆、脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BNTF)的影响,为临床应用山茶籽茶麸醇提物防治雌激素缺乏女性AD提供实验依据。方法 5个月龄健康雌性大鼠96只,分成对照组、AD模型组、山茶籽+AD模型组、雌二醇(E2)+AD模型组,每组24只。山茶籽+AD模型组用药:山茶籽醇提取物的水溶灌胃,10ml·kg-1·d-1;E2+AD模型组用药:E2+AD模型组,皮下注射E2200μg/kg,2次/周。正常对照组和去卵巢AD模型组与给山茶籽用药组等体积生理盐水灌胃,10ml·kg-1·d-1。各实验组第4、8、12周分别取8只大鼠,称重后进行水迷宫实验,再麻醉大鼠取左心血5ml,处死取大脑。免疫组织化学染色的大脑组织切片用显微镜观察;右侧大脑用低温匀浆提取液BNTF分析。结果 AD模型组经水迷宫实验证明其学习记忆能力明显下降(P<0.01),脑组织海马CA1免疫组化染色BNTF阳性细胞计数明显减少,脑组织BNTF电泳带光密度值明显变小(P<0.01),山茶籽+AD模型组和E2+AD模型组的学习记忆能力明显提高(P<0.01),脑组织海马CA1免疫组化染色BNTF阳性细胞计数明显增加(P<0.01),脑组织BNTF电泳带光密度值明显增大(P<0.01)。结论山茶籽茶麸醇提物有雌激素样作用,可以增加AD模型大鼠脑组织BNTF含量,提高其学习记忆能力,对去卵巢AD模型大鼠有防治作用。

代谢组学探索复方二仙汤调节双侧去卵巢大鼠脂代谢紊乱特征

卵巢功能的永久性丧失造成的妇女更年期与脂质代谢紊乱密切相关,复方二仙汤临床上用于多种妇科疾病的治疗,对与卵巢功能的永久性停止有关的疾病有良好疗效,而其作用机制尚未明确。本研究采用代谢组学技术,以双侧去卵巢模型大鼠模拟更年期妇女的生理状态,探索不同绝经阶段脂质代谢特征以及二仙汤调节更年期脂代谢紊乱可能的代谢通路和机制。结果表明,双侧去卵巢模型大鼠发生肝脂代谢异常,与对照组比较,模型组肝脏油红O染色切片发生显著性变化。与模型组比较,复方二仙汤组能显著改善肝脂代谢。动态代谢组学分析结果表明二仙汤对双侧去卵巢模型引起的脂代谢紊乱具有实时调节作用。生物统计学分析找寻得到46个(6个甾体激素、3个鞘酯、11个甘油磷脂和26个甘油酯)血浆潜在生物标志物和32个(1个甾体激素、20个甘油磷脂和11个甘油酯)肝脏潜在生物标志物。分析差异代谢通路并构建了二仙汤显著调节的脂质代谢网络,为深入了解更年期状态下脂代谢紊乱渐进变化和复方二仙汤调节作用特点和机制提供了有价值的信息。研究遵守中国医学科学院药物研究所动物实验伦理委员会制定的规程并通过动物实验伦理审查(No.00000918)。

金刚健骨片对骨质疏松症模型大鼠骨组织OPG/RANKL/RANK系统影响的实验研究

目的:观察金刚健骨片对骨质疏松症模型大鼠体内OPG/RANKL/RANK系统表达的影响。方法:采用卵巢摘除法建立SD大鼠骨质疏松模型,设立假手术组、模型组(单纯去卵巢组)、雌激素组(尼尔雌醇组)和金刚健骨片组。造模成功后4周开始给药,给药12周后RT-PCR检测各组大鼠骨组织中OPG/RANKL/RANK mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组的OPG表达降低、RANKL表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,金刚健骨片组和雌激素组的OPG表达增高,RANKL表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);金刚健骨片组与雌激素组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);RANK的mRNA表达在各组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:采用卵巢摘除法成功建立大鼠骨质疏松模型;金刚健骨片可促进OPG在骨质疏松大鼠中的表达,抑制其RANKL的表达,这可能是金刚健骨片治疗骨质疏松症的作用机制之一。

锁阳乙酸乙酯部位对去卵巢痴呆大鼠学习记忆功能和海马神经元形态的影响

目的研究锁阳乙酸乙酯部位提取物对去卵巢大鼠行为学和突触形态的影响。方法 SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、阳性药组、锁阳乙酸乙酯部位组(锁阳组)。采用双侧去卵巢造成大鼠老年痴呆模型,手术后1周,阳性药组给予雌二醇,锁阳组给予锁阳乙酸乙酯部位提取物(33 mg/kg)灌胃,给药8周后,连续6 d用Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力的改变。然后灌注取材,采用HE染色、免疫组化生长相关蛋白(GAP-43)和超微透射电镜来观察大鼠海马区神经元形态的变化。结果锁阳组潜伏路程、穿越平台次数较模型组有明显的改善(P<0.01)。HE染色显示,锁阳组海马CA3区锥体细胞形态得到改善,排列整齐、均一、结构清晰。GAP-43免疫组化显示,锁阳组灰度值较模型组显著增高(P<0.01)。透射电镜观察显示,锁阳组海马神经细胞较模型组有变化,神经元细胞核结构清晰,核仁呈圆形居中央,胞质呈空泡。结论锁阳乙酸乙酯部位可以提高去势所致老年痴呆大鼠在Morris水迷宫中的学习记忆功能,并且可以促进大脑海马区GAP-43蛋白的含量,从而促进神经细胞突触的形成。