用非离子去垢剂抽提获得的小游仆虫皮层细胞骨架的构形

由扫描电镜术显示 ,应用非离子去垢剂抽提获得的小游仆虫 (Euplotesgracilis)皮层细胞骨架是由非纤毛区皮层骨架、纤毛器骨架及其附属纤维等构成的三维结构网架。各类细胞骨架以纤维物质为基本成分组成纤维网、纤维层、纤维束和纤维薄片等不同形态单元。其中 :非纤毛区皮层骨架以表面纤维网和表膜下纤维层为形态单元位于细胞的外周层 ;纤毛器骨架中的口围带骨架、口侧膜骨架、额腹横棘毛骨架按各自的分布图式在皮层内定位 ,成为主要的皮层骨架结构。尽管这些纤毛器骨架显示不同的形态 ,但却具有相同的建构特征 ,即都是由纤毛器的毛基体、纤毛器托架和骨架附属纤维相互联系镶嵌在一起形成的相对独立的结构单元。分析推测 ,游仆虫皮层表面纤维网使细胞表面形成区域化结构 ,它也可能与细胞表面各部分的联系及其细胞与环境的相互作用有关 ;纤毛器骨架中各个纤毛器的毛基体复合结构可能对纤毛器托架和骨架附属纤维等起到微管组织中心的作用。

去垢剂在膜蛋白纯化和结晶中应用的研究进展

解析膜蛋白结构并研究其功能是当前生物学领域最前沿的研究热点之一。但是由于膜蛋白疏水结构域的存在,蛋白在水相环境中容易聚合,造成其纯化乃至结晶过程有较大困难,是膜蛋白结构解析的最主要瓶颈之一。去垢剂作为一种双极性分子,是目前解决膜蛋白纯化与结晶问题的关键材料,它能在水相环境中维持膜蛋白构象的稳定,因此在膜蛋白纯化和结晶中得到了广泛的应用。讨论了去垢剂理化性质、膜蛋白纯化和结晶中去垢剂的选择及一些新兴去垢剂的发展等问题。

四种去垢剂对棉铃虫微粒体细胞色素P450的增溶与变性作用

为分离纯化棉铃虫的细胞色素P4 5 0 ,比较了 4种去垢剂对棉铃虫微粒体P4 5 0的增溶与变性作用。结果表明 :CHAPS( 3_[( 3_cholamidopropyl)_dimethylammonio]_1_propanesulfonate)能有效地增溶中肠和脂肪体微粒体P4 5 0 ,而LubrolPX(聚氧乙烯十二烷基乙醇醚 )、Emulgen 91 1 (聚氧乙烯壬基苯酚醚 )和胆酸钠的增溶效果较差 ;CHAPS对中肠和脂肪体微粒体P4 5 0的最适增溶浓度分别为 0 5 %和 0 5 %～ 0 8% ;终浓度为 0 5 %时 ,4种去垢剂对中肠和脂肪体微粒体P4 5

去垢剂在膜蛋白研究中的应用

去垢剂是同时具有亲水极性基团和疏水非极性基团的双极性分子,能够使脂膜解体释放膜蛋白,并在溶液中为去膜状态下的膜蛋白提供疏水环境,维持和保护膜蛋白的疏水跨膜结构,在膜蛋白的结构和功能研究中有重要的意义。去垢剂的双极性和理化特性,如临界胶束浓度能够极大影响去垢剂和膜蛋白间的相互作用。在膜蛋白研究中,需要充分利用去垢剂的结构和特性:一方面,需要利用去垢剂代替脂质分子支持和稳定去膜状态下膜蛋白的结构和功能;另一方面,需要控制去垢剂和膜蛋白的相互作用,以满足膜蛋白结构研究如蛋白质结晶试验的要求。简要介绍了去垢剂在膜蛋白研究中的最新应用进展,涉及去垢剂在膜蛋白离体表达、分离和纯化、以及结构研究中的应用。

去垢剂法提取脂质筏及鉴定

目的:建立一种用去垢剂提取脂质筏的方法。 方法:依据脂质筏在4℃时不溶于去垢剂的特性,用去垢剂 处理去除细胞器和细胞核碎片的细胞膜成分,溶解非脂质筏成分,再用蔗糖密度梯度离心法将去垢剂不溶组分分 离出来。用窖蛋白 1(caveolin 1)作为脂质筏的特异性标记,Western blot分析检测caveolin 1的表达。 结果:在离 心管15%～20%蔗糖溶液界面处可见一条白色的闪亮环带,Westernblot结果显示DAB染色后在相对分子质量 24000处可见棕色条带。 结论:去垢剂法是一种简单、有效提取脂质筏的方法,成功分离脂质筏是研究它参与信 号转导过程的首要条件和基础。

新型去垢剂HEDP的合成与应用

笔者用冰醋酸、三氯化磷和水一步法合成了HEDP,用自制的HEDP与氢氧化钠溶液反应合成了HEDP的钠盐。

去垢剂在膜受体蛋白纯化中的应用

膜受体蛋白质几乎都属于细胞膜的内在蛋白质或整合蛋白质,通过其非极性化的氨基酸残基与膜脂质双分子层的中央疏水部分相互作用而结合于细胞膜中,以往对膜受体分类未能反映受体蛋白质的性质和特征。例如药理学根据配体而分类,然而乙酰胆碱受体(AChR)

去垢剂NP-40在提取胃癌中性糖脂中的应用

随着肿瘤鞘糖脂抗原研究的深入,胃癌组织中性糖脂的变化已引起人们的重视,但提取中性糖脂的方法主要是用甲醇一氯仿抽提、Folch分配、硅胶柱层析纯化的方法。

离体灌注新型去垢剂用于组织工程人工肺构建实验

目的评价一种新型去垢剂十二烷基醚硫酸钠(SLES)经主支气管途径用于制备脱细胞肺支架的效果,并自制简易生物反应器来评价种植细胞的效果,探索构建组织工程人工肺的可行性。方法取SD大鼠肺,利用Langendorff系统经主支气管灌注0.1%SLES等溶剂制备脱细胞肺支架,在支架内种植A549细胞,生物反应器内培养3 d,评价指标包括HE染色、DAPI染色、DNA含量测定。结果经主支气管途径灌注SLES可以有效的去除肺内细胞,无残留的细胞及细胞核,DNA含量去除率达到96.27%,种植A549细胞培养3 d,细胞在支架内均匀生长,DNA含量达到正常肺的64.67%。结论新型去垢剂SLES可以制备出较为理想的脱细胞肺支架,自制的生物反应器可以有效地促进种植细胞的生长。

新型亲和去垢小柱净化-液相色谱-串联质谱法分析水稻叶片蛋白质组

采用亲和去垢小柱净化,建立了水稻叶片蛋白质组的纳升液相色谱-串联质谱分析方法。水稻叶片蛋白质分别采用酚提取法结合十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)裂解,裂解液经亲和去垢小柱净化,酶解肽段用纳升液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱(nanoLC-LTQ/Orbitrap MS)分析,相关数据库检索鉴定。比较了超滤辅助样品制备法(FASP法)、亲和去垢小柱法和丙酮沉淀法对SDS去除效率及对蛋白质鉴定结果的影响。结果表明:3种方法均有较好的SDS去除效果(去除效率均大于95%);尽管3种方法鉴定的蛋白质种类具有一定的互补性,但以亲和去垢小柱法鉴定的蛋白质数目最多,为563种,远多于FASP法和丙酮沉淀法的196和306种;此外,亲和去垢小柱法适合于各种相对分子质量和不同pI值蛋白质的净化,而FASP法和丙酮沉淀法中不同相对分子质量和pI值蛋白质均有类似程度的损失。采用本文建立的方法,一次进样分析可鉴定出水稻叶片蛋白质多达588种;肽段匹配数≥2的296个蛋白质的生物学功能主要分为结合活性、酶活性、转移运输活性和结构组成等。该蛋白质分析方法可为开展水稻蛋白质组学研究提供技术参考。

构建组织工程瓣膜支架中3种去垢剂的比较

背景:目前,组织工程瓣膜去细胞支架的制备方法和效果各不相同,但总的来说,酶结合去垢剂法显示出一定的优势作用。目的:探讨脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通3种去垢剂结合酶消化法对于猪主动脉瓣膜脱细胞的效果以及去细胞后对支架的影响。方法:将新鲜猪主动脉瓣膜用抗生素溶液浸泡12h后,置于胰蛋白酶和EDTA溶液中12h,再分别用脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通进行处理,最后转入核酸酶溶液中浸泡12h,以达到去除内皮细胞和间质细胞的目的,常规苏木精-伊红染色观察内皮细胞是否除完全,Masson染色观察胶原纤维和弹力纤维损害程度,电子扫描显微镜观察纤维结构以评价效果。结果与结论:3种去垢剂结合酶消化法均能彻底去细胞,但脱氧胆酸钠对支架胶原纤维和弹力纤维的损害较轻微,十二烷基硫酸钠次之,曲拉通对支架的损害作用最大。提示脱氧胆酸钠结合酶消化法是一种较合理的组织工程瓣膜支架构建方法。

解冻后溶剂／去垢剂处理血浆4C保存6天凝血因子的稳定性

背景和目的为预防严重失血后凝血因子稀释或者弥漫性血管内凝血，输注新鲜冰冻血浆仍然是急救医学重要的支持治疗，然而解冻过程可能会阻碍它的使用。另外，一旦解冻后未能在规定的时间内输用，造成血浆的废弃，使得之前的工作成为无效功，也有违献血的初衷。本文作者研究了血浆解冻后溶剂／去垢剂(S／D)处理后，在4C下6天保存时期内，

不同去垢剂对琥珀酸脱氢酶溶膜效果的比较研究

比较了 3种溶膜剂 Triton X-1 0 0、Tween-2 0和脱氧胆酸钠对琥珀酸脱氢酶 ( SDH)的溶膜效果 .其中 Triton X-1 0 0的效果为最好 .并且 ,在 1 %的 Triton X-1 0 0溶液中

构建组织工程肺的三种去垢剂对比研究

目的:评价新型去垢剂十二烷基醚硫酸钠(SLES)用于制备脱细胞肺支架的效果,探索构建组织工程肺的可行性。方法:SD大鼠取肺,经主肺动脉插入16 G灌注针头,悬挂在Langendorff灌注台上,分别灌注三种去垢剂:传统去垢剂脱氧胆酸钠(SDC)和十二烷基磺酸钠(SDS)、新型去垢剂SLES,联合核酸酶应用液,制备出三种脱细胞肺支架。

去垢剂对单向免疫扩散法测定流感病毒疫苗血凝素含量的影响

目的研究单向免疫扩散法测定流感病毒亚单位疫苗不同生产阶段中间产品的血凝素含量实验中,去垢剂对检测结果的影响,寻找最佳裂解条件。方法以不同的去垢剂浓度和不同裂解时间分别对完整病毒和亚单位疫苗样本进行处理后,利用单向免疫扩散实验测定样本的血凝素含量,并对测定结果进行比较和分析。结果亚单位疫苗的单向免疫扩散沉淀圈在去垢剂Zwittergent浓度小于0.125%时随去垢剂浓度的增加而增大,当去垢剂浓度达到0.125%后不再继续增大;而完整病毒的沉淀圈在去垢剂浓度达到1%后才不再增大。以终浓度1%的去垢剂对完整病毒和亚单位疫苗分别处理30、60、120min后进行单向免疫扩散,测定结果比较差异无统计学意义。结论以终浓度1%的去垢剂Zwittergent对完整病毒或亚单位疫苗样本裂解30min后进行单向免疫扩散测定血凝素含量,均可得到稳定准确的结果,有利于提高工作效率、缩小实验间误差、节约实验成本。

去垢剂浓度对灌流法制备脱细胞肺支架效果的影响

目的比较不同浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)和3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)对制备脱细胞肺支架效果的影响。方法选用SD大鼠21只,鼠龄8~9周,体质量200~300 g。采用蠕动泵灌洗系统,分别用磷酸盐缓冲溶液(对照组)及3种不同浓度的两种去垢剂(0.1%SDS、0.2%SDS、0.3%SDS、4 mmol/L CHAPS、8 mmol/L CHAPS、12 mmol/L CHAPS 6个实验组)对大鼠肺脏进行灌洗制备脱细胞肺支架,并且在此过程中每隔0.5 h拍照截取肺组织图片;再分别测定各组脱细胞肺支架残留DNA的量及观察各组胶原质3及纤维连接蛋白的免疫荧光染色。结果随着灌洗时间的延长,各实验组大鼠肺脏透明度均逐渐增高。且脱细胞后肺都保持着肺泡、支气管等基本结构。不同浓度的同一种试剂灌洗后脱细胞肺支架大体形态观无明显差别。随着去垢剂浓度的增加,各SDS组及各CHAPS组DNA残留量分别为(20.41±4.85)ng/mg、(24.90±3.73)ng/mg、(27.92±5.11)ng/mg、(114.14±7.82)ng/mg、(118.93±10.84)ng/mg、(121.04±6.46)ng/mg,对照组为(177.77±9.37)ng/mg,各实验组与对照组之间差异均有统计学意义(P<0.05),各实验组之间差异无明显统计学意义(P>0.05)。标记胶原质3和标记纤维连接蛋白的免疫荧光染色结果显示,各实验组4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)蓝染的细胞核均模糊、分散,对照组DAPI蓝染的细胞核较完整。实验组及对照组红染的阳性标记物胶原质3及纤维连接蛋白分布较分散。结论不同浓度下的SDS和CHAPS对制备脱细胞肺支架有着一定的影响。

尿液去垢作用和尿石症

钙石不同类型的尿石形成与各种因素有关,人们对此已进行了透彻的研究。尽管泌尿科医生指出,无论何处的钙石实际上都可采用非侵入性方法或传统的最简单的方法从尿路去除,但仍有少数结石需进一步明确病因以真正做到彻底治愈。大多数病人会再次形成尿石——在首次发生结石后一年有15％再发。四年后有45％,九年后有66％。在西方国家钙石占所有尿石症的70％左右。显然,本病与尿量、尿pH值、尿钙结晶浓度。