骨髓间充质干细胞与去抗原牛松质骨复合体在大鼠体内的成骨作用

目的:观察复方接骨中药含药血清培养诱导的骨髓间充质干细胞(MSC)与去抗原牛松质骨(BCB)复合体在大鼠体内的成骨作用。方法:取3月龄的雄性SD大鼠32只随机分为实验组与对照组,实验组将含药血清培养诱导的骨髓MSC-BCB复合体种植于大鼠皮下,对照组将单纯BCB直接种植于大鼠皮下。实验组与对照组分别于术后14和28 d各取出8个植入物。取每个植入物的一半于4%多聚甲醛溶液固定,石蜡包埋后切片,行HE染色,光镜下观察。另一半定量后匀浆,麦胚凝集沉淀法测定骨源性碱性磷酸酶(BALP)活性。结果:实验组植入物术后14 d光镜下见大量成骨细胞附于BCB骨小梁表面,术后28 d大量软骨腺泡形成。对照组成骨细胞数量较少,骨小梁间隙仅见纤维组织,未见新骨发生。同期实验组BALP活性显著高于对照组(P<0.05)。结论:复方接骨中药含药血清体外诱导的骨髓MSC-BCB复合体具有体内成骨作用。

骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨修复兔桡骨骨缺损

目的:研究复方接骨中药含药血清培养诱导的骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨载体修复兔桡骨骨缺损的作用机制。方法:取4月龄大耳白兔24只随机分为A、B2组,将A、B组每只兔一侧前肢制成桡骨骨缺损模型,A组于骨缺损处植入复方接骨中药含药血清培养诱导的骨髓间充质干细胞与去抗原牛松质骨复合体;B组于骨缺损处植入单纯去抗原牛松质骨。术后3、6、12周分别取材,将术侧桡骨完整取出,进行大体观察、X线片及组织学检查,麦胚凝集沉淀法测定骨源性碱性磷酸酶活性。结果:大体观察及X线片显示:A组骨痂生长良好,骨缺损修复完成;B组骨缺损部分修复,部分为骨不连接。组织学检查:A组新生骨量较多,见大量成骨细胞,骨缺损与断端形成骨性连接。B组骨小梁间隙可见纤维组织长入,较多软骨团出现,编织骨数量多。统计学分析表明骨源性碱性磷酸酶活性A组显著高于B组(P<0.01)。结论:复方接骨中药含药血清培养诱导的骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨载体能够较好地修复兔桡骨骨缺损。

兔骨髓基质细胞在去抗原牛松质骨载体上生长状态的观察

目的 牛松质骨具有天然的多孔结构 ,微孔规则 ,相互贯通 ,是骨组织工程载体的选择之一。本研究观察了体外状态下表面不加修饰的去抗原牛松质骨载体的生物相容性 ,为骨组织工程研究寻找新的载体提供实验依据。方法 将牛四肢骨干骺端松质骨锯成 0 6～ 0 8cm3 的松质骨块 ,经过反复水洗 (40～ 5 0℃ )、脱脂、超声振荡、离心、脱蛋白过程 ,清除牛松质骨内的细胞成份、油脂、骨髓组织及残留血液。选择孔隙直径约为 30 0～70 0 μm ,孔隙均匀的骨块 ,风干后再经砂轮仔细打磨精修 ,制成约 0 5cm3 的去抗原牛松质骨骨块。用兔骨髓基质细胞与载体复合 ,体外培养 7、 14d行扫描电镜观察了解细胞的生长情况。结果 1 去抗原牛松质骨载体表面干涩不平 ,洞沟遍布 ;2 培养第一周的载体壁上 ,细胞较少 ,形态不规则 ,大小不一 ,散在于孔壁上 ,细胞分布不均 ,无突起伸展贴壁 ,并可见有细胞死亡后崩解的碎片散在于细胞之间。培养第二周载体孔壁上细胞数量更少 ,提示有细胞死亡并脱落。结论 体外状态下表面不加修饰的去抗原牛松质骨载体不适于MSC贴壁生长。

自体骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨载体修复兔桡骨节段性骨缺损

目的:探讨以自体骨髓间充质干细胞(MSCs)复合去抗原牛松质骨载体(BCB)修复兔桡骨节段性骨缺损的效果。方法:抽取20只新西兰大白兔的骨髓并分离、培养、扩增和建立诱导MSCs,将其和BCB复合。手术建立兔双桡骨干15mm骨骨膜缺损的动物模型,实验侧植入MSCs/BCB,对照侧植入BCB,通过X线、组织学检查等手段观察不同时相的骨缺损修复情况。结果:在第12周时,实验侧骨缺损得到骨性修复,对照侧则未能修复。结论:MSCs在体内能成骨,MSCs/BCB能有效地修复节段性骨缺损。

去抗原牛松质骨中利用动静脉袢诱导轴向血管化的实验研究

目的探讨在去抗原牛松质骨中利用动静脉袢诱导轴向血管化的方法及血管化效果。方法取新鲜牛股骨采用常规方法制备去抗原牛松质骨支架,并将其加工成带环状侧槽的圆柱形。健康3～4月龄雄性SD大鼠30只,体重300～350g,随机分为实验组和对照组(n=15)。实验组于大鼠右侧股部行股静脉分离,并将其移植至对侧股动静脉残端间构建动静脉袢,将制备的去抗原牛松质骨支架插入至动静脉袢中,并将动静脉袢置于其环状凹槽内;对照组仅将股部血管结扎切断,无需吻合,同时植入去抗原牛松质骨支架。术后2、4、8周取材行大体观察、墨汁灌注组织学观察并检测微血管体积密度。结果术后各时间点实验组标本颜色鲜红,勒血实验显示血管双向通畅;对照组标本颜色暗红,触之略感柔韧。墨汁灌注组织学观察显示,实验组去抗原牛松质骨支架有明显血管化,以第8周显著,血管趋于成熟并呈网状,可见起源于动静脉袢的新生血管芽。对照组无血管化发生。术后2、4、8周实验组微血管体积密度分别为(3.59±1.84)、(16.61±10.23)、(39.04±13.46)μm3/μm3,对照组分别为(2.43±0.97)、(6.79±2.92)、(25.31±10.98)μm3/μm3。术后4、8周比较差异均有统计学意义(P<0.05),术后2周差异无统计学意义(P>0.05)。结论动静脉袢诱导去抗原牛松质骨血管化模型作为一种新的预血管化策略,可能为制备功能性人工骨提供参考。

关于“去抗原牛松质骨中利用动静脉袢诱导轴向血管化的实验研究”的讨论

尊敬的编辑，您好!我们从pubmed英文摘要中获悉，贵刊发表了王峰亮等人关于“去抗原牛松质骨中利用动静脉袢诱导轴向血管化的实验研究，在此我们对该作者的研究成果表示诚挚的祝贺。我们组多年以来一直积极致力于生物材料和生物支架的轴向血管化方面的研究，并且关于动静脉袢在硬性材料中应用于生物工程骨的血管化研究也己发表。

骨髓间充质干细胞复合去抗原松质骨修复骨缺损的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞离体培养并与去抗原牛松质骨复合修复节段性骨缺损的效果。方法Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)与去抗原牛松质骨(BCB)制成MSCs/BCB复合物;采用同种异体大鼠桡骨干5mm节段性骨缺损动物模型,通过X线放射学、组织学、生物力学检测对比研究骨缺损修复情况。结果术后2、4、8、14、18周实验组与实验对照组经放射学检查评价新骨生成有显著性差异。术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著性差异。18周经生物力学实验检测,实验组与实验对照组新骨生成有显著性差异,实验组标本与正常基本一致。空白对照组各时间点均无新骨形成,最后缺损由纤维组织充填。结论大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)是骨组织工程中适宜的种子细胞。去抗原牛松质骨是可以选择的细胞载体。MSCs/BCB复合物植入修复骨缺损效果明显优于单纯BCB植入。

骨髓间充质干细胞及其复合物修复兔桡骨缺损的实验研究

[目的]通过新西兰大白兔骨髓间充质干细胞离体培养后与去抗原牛松质骨复合植入新西兰大白兔桡骨缺损处,比较修复节段性桡骨缺损的效果,初步探讨治疗骨缺损的组织工程学方法。[方法]新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(MSCs)离体培养、纯化、扩增后在等同于细胞培养的条件下与去抗原牛松质骨(BCB)复合培养,制成MSCs/BCB复合物并经电镜扫描证实复合物有细胞生长。制成同种异体新西兰大白兔桡骨干15mm节段性动物模型,MSCs/BCB复合物通过手术移植入动物模型桡骨缺损处,通过X线放射学、组织学、生物力学检测对比实验组与对照组、空白组骨缺损修复情况。[结果]术后2、4、8、12、16周实验组与实验对照组放射学检查评价新骨生成有显著性差异(P<0.01)。术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著性差异(P<0.01)。16周生物力学三点抗弯曲实验载荷、弯曲应力检测,实验组与实验对照组新骨生成有显著性差异(P<0.01),实验组标本与正常基本一致。空白对照组各时点均无新骨形成,最后缺损由纤维组织充填。[结论]骨髓间充质干细胞(MSCs)是骨组织工程中适宜的种子细胞。去抗原牛松质骨能够与兔骨髓间充质干细胞体外复合培养,移植入异体新西兰大白兔后未见明显免疫排斥反应,是可以选择的细胞载体。MSCs/BCB复合物植入修复兔桡骨缺损能够加速新骨形成,修复效果明显优于单纯BCB植入。

胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶复合去抗原松质骨支架的制备及特征

[目的]探索胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶多孔支架复合去抗原松质骨的骨软骨一体化材料的制备方法及其特征。[方法]将胶原、透明质酸钠及纤维蛋白胶混匀,利用纤维蛋白胶的粘合性与去抗原牛松质骨复合,成为骨软骨一体化的支架材料。通过大体观察和扫描电镜观察了解材料的孔径和交通情况;分离、增殖仔兔骨髓基质细胞（BMSCs）,取第3代BMSCs接种至支架材料复合培养,1、3、5、7和10 d后,行MTT检测并绘制细胞生长曲线;取第7 d标本,行扫描电镜观察。[结果]经交联和复合的一体化骨软骨支架材料具有良好的三维多孔结构,骨相孔径约300~500μm,软骨相孔径约80~120μm,两部分连接紧密;电镜观察见骨相及软骨相均有细胞黏附,细胞周围有基质存在;MTT检测显示,各时间点的OD值在实验组与对照组之间无统计学差异（P〉0.05）。[结论]胶原-透明质酸钠-纤维蛋白胶多孔支架复合去抗原牛松质骨的一体化材料具有良好的空间结构和生物相容性,可用于修复骨软骨联合缺损的组织工程支架材料的研究。

去抗原异种松质骨移植的免疫反应研究

料,因存在剧烈的免疫排斥反应,而限制了其在临床的应用。第四军医大学西京医院骨科罗卓荆等采用经植入物体内致敏的淋巴细胞体外二次刺激增殖实验、酶联免疫吸附实验及组织学观察的方法,研究了大块型及颗粒型两种去抗原处理的牛松质骨在植入BALB/c小鼠体内后的细胞、体液免疫及局部组织反应。 结果表明。