去整合素样金属基质酶8对脑胶质瘤增殖和侵袭的影响及其机制

目的:探讨去整合素样金属基质酶8(ADAM8)对巨噬细胞迁移和血管生成的影响及对胶质瘤细胞侵袭的作用及其机制。方法:骨髓细胞分别取自ADAM8野生型和ADAM8基因敲除C57Bl/6小鼠腿骨骨髓。骨髓细胞分化为巨噬细胞备用。采用划痕实验比较巨噬细胞ADAM8野生型和ADAM8基因敲除细胞迁移能力;并比较两种类型巨噬细胞上清液对HUVEC细胞血管生成的影响,采用聚合酶链反应(PCR)实验及PrAMA实验检测ADAM8基因敲除对其他金属基质酶的mRNA表达及酶活性影响。应用Transwell侵袭实验比较巨噬细胞ADAM8对胶质瘤细胞GL261侵袭能力的作用。组间数据比较采用非配对t检验。结果:ADAM8能够促进巨噬细胞的迁移能力,DMEM两组野生型细胞迁移能力(1.00±0.04)高于ADAM8基因敲除组(0.72±0.05),差异有统计学意义(t=3.200,P<0.01),LPS组野生型细胞迁移能力(1.30±0.09)高于ADAM8基因敲除组(0.92±0.07),差异有统计学意义(t=4.132,P<0.01),ADAM8显著促进野生型组的血管生成,野生型组生成小管结数量(13.84±4.82)高于ADAM8基因敲除组(4.39±1.83),差异有统计学意义(t=2.170,P<0.05)。ADAM8不影响巨噬细胞中MMP-9的mRNA表达,但ADAM8的敲除降低了MMP-9的活性,野生型MMP-9的活性比ADAM8敲除巨噬细胞高2倍以上。同时发现ADAM8促进了胶质瘤细胞GL261的侵袭,野生型巨噬细胞组GL261细胞穿透基质膜数量(187.67±23.23)高于ADAM8基因敲除组(2.67±1.69),差异有统计学意义(t=11.230,P<0.01)。结论:ADAM8影响巨噬细胞的迁移能力,并影响胶质瘤的血管生成和侵袭。

巨噬细胞炎症蛋白1-α、解整合素样-金属蛋白酶8、12和CD68蛋白在颌骨巨细胞病变及长骨骨巨细胞瘤中的表达

目的检测巨噬细胞炎症蛋白1-α(MIP-1α)、解整合素样-金属蛋白酶(ADAM)8、12和CD68在颌骨巨细胞病变和长骨骨巨细胞瘤中的表达,探讨其在这两种巨细胞病变中的多核巨细胞发生中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测24例颌骨中心性巨细胞病变,24例长骨骨巨细胞瘤石蜡组织中的MIP-1α、ADAM8、ADAM12和CD68蛋白的表达。结果MIP-1α在24例颌骨中心性巨细胞病变和24例长骨骨巨细胞瘤中的血管、类骨质和新骨形成区中强表达,而在多核巨细胞和圆形单核细胞中为阴性;ADAM8、ADAM12和CD68在颌骨中心性巨细胞肉芽肿和长骨骨巨细胞瘤中几乎所有多核巨细胞和部分圆形单核基质细胞均为阳性。结论颌骨中心性巨细胞病变和长骨骨巨细胞瘤中的多核巨细胞可能由CD68+的圆形单核基质细胞融合而成,这些圆形单核细胞可能是由骨微环境中的趋化因子,募集外周血中循环的单核细胞到病变局部分化而成的具有破骨细胞前体细胞性质的细胞,继而在某些融合蛋白作用下发生融合,成熟为多核破骨样巨细胞。

CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA与老年肾衰竭血液透析患者细菌感染的相关性及诊断价值

目的 研究外周血CD4^(+)/CD8^(+)、人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)和淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein,SAA)与接受维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)治疗的老年慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)患者细菌感染的相关性及其诊断价值。方法 选取2019年10月—2021年10月在海南省中医院接受MHD治疗的老年CRF患者合并细菌感染者61例(感染组)和未合并感染者104例(非感染组)为样本开展横断面研究,检测2组CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA表达水平并进行比较,建立Logistics回归模型分析各指标与老年CRF患者MHD治疗期间细菌感染的关系并作受试者工作特征(ROC)曲线分析其诊断价值。结果 感染组CD8^(+)(t=2.573,P=0.011)、NGAL(t=6.670,P<0.001)和SAA(t=10.116,P<0.001)表达水平高于非感染组,CD4^(+)(t=8.514,P<0.001)、CD4^(+)/CD8^(+)(t=3.904,P<0.001)表达水平低于非感染组。校正年龄、性别和透析龄等基本资料后进行Logistics回归分析(因变量赋值感染组=1,非感染组=0)显示CD4^(+)/CD8^(+)(OR=0.586,95%CI:0.440~0.780,P<0.001)、NGAL(OR=1.324,95%CI:1.149~1.525,P<0.001)和SAA(OR=1.419,95%CI:1.251~1.610,P<0.001)均与老年CRF患者MHD治疗期间细菌感染存在密切联系;ROC曲线分析显示CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA用于老年MHD患者细菌感染诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.576、0.738和0.838,敏感度分别为54.10%、62.30%和77.05%,特异度分别为63.46%、83.65%和77.88%,将3项指标建立Logistics回归模型进行综合判断,结果显示AUC为0.886,敏感度为85.25%,特异度为79.81%。结论 接受MHD治疗的老年CRF患者外周血CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA与细菌感染存在密切联系,检测CD4^(+)/CD8^(+)、NGAL和SAA表达水平变化可为细菌感染早期准确诊断提供参考依据。

SET8基因下调对大鼠血管平滑肌细胞增殖迁移的影响及其机制

目的探讨赖氨酸甲基转移酶SET8基因下调对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响及其机制。方法 SD大鼠6只,体外分离培养大鼠VSMCs。将VSMCs随机分为正常对照组、空质粒组、SET8-shRNA组,正常对照组为正常VSMCs,空质粒组转染2μg/L NS-shRNA,SET8-shRNA组转染2μg/L SET8-shRNA。应用MTT实验检测各组VSMCs转染后第0、12、24、36、48 h增殖能力,Transwell实验检测迁移能力,Western blotting法检测SET8蛋白,实时荧光定量PCR法检测SET8、金属基质蛋白酶(MMP)2、MMP9、E钙黏附蛋白(E-Cadherin)mRNA。结果与正常对照组和空质粒组相比,SET8-shRNA组SET8 mRNA及蛋白表达低,转染后第0、12、24、36、48 h细胞增殖OD值小,迁移细胞数少,MMP2、MMP9 mRNA表达低,E-Cadherin mRNA表达高(P均<0.05)。结论SET8基因下调后,大鼠VSMCs的增殖与迁移能力降低;这可能与下调MMP2、MMP9表达,上调E-Cadherin表达有关。

抗血管生成因子与子痫前期发病关系的研究进展

子痫前期是妊娠期特有的疾病，我国发病率为9.4%-10.4%，国外为7%-12%。该病严重影响母婴健康，是孕产妇和围生儿病率及病死率的主要原因，其病因和发病机制至今尚未完全阐明。近年来有研究表明，子痫前期患者血液中抗血管生成因子水平明显升高，这提示胎盘产生的抗血管生成因子以及催化产生这些因子的蛋白酶与子痫前期的发展密切相关。抗血管生成因子包括可溶性酪氨酸激酶-1，可溶性内皮糖蛋白等，有研究表明蛋白脱落作用可产生抗血管生成因子，而催化蛋白脱落作用的蛋白酶主要有解整合素样金属蛋白酶家族和金属基质蛋白酶家族。

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1在顺铂诱导的急性肾损伤模型中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1(TIPE1)在顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)动物模型及细胞中的表达及作用。方法12只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠被随机分为对照组和模型组,模型组小鼠接受20 mg/kg顺铂单次腹腔注射,对照组给予单次20 mg/kg生理盐水腹腔注射,5 d后处死小鼠并留取血清和肾脏标本。检测Scr、血BUN水平;HE染色法观察小鼠肾组织病理学改变;免疫组化法检测肾组织TIPE1的表达;实时荧光定量PCR法检测小鼠肾组织TIPE1 mRNA相对表达量;Western印迹法检测肾组织TIPE1和小管损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)相对表达量。20μmol/L顺铂刺激人肾近端小管上皮细胞(HK-2)0、6、12、24 h构建体外顺铂诱导急性肾损伤细胞模型,实时荧光定量PCR法及Western印迹法检测HK-2细胞TIPE1 mRNA和蛋白的表达水平。用包含TIPE1 siRNA序列的慢病毒靶向沉默TIPE1基因,20μmol/L顺铂处理TIPE1稳定敲除的HK-2细胞株24 h,Western印迹法检测HK-2细胞NGAL、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链(LC)3及Beclin1的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠肾组织中TIPE1 mRNA及蛋白表达量、NGAL蛋白表达量显著升高(均P<0.05);HK-2细胞TIPE1 mRNA及蛋白表达量随顺铂处理时间延长而增加(均P<0.05)。慢病毒干扰HK-2的TIPE1表达后,TIPE1 siRNA组的HK-2细胞NGAL、LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达较阴性对照Scramble组显著升高(均P<0.05)。结论急性肾损伤模型中TIPE1 mRNA及蛋白表达增加。沉默TIPE1表达后,早期肾小管损伤标志物及自噬相关蛋白表达增加,提示过度自噬加重肾小管损伤,TIPE1可能参与了急性肾损伤的发病过程。

Logistic回归和ROC曲线评价生物标志物组对大动脉粥样硬化性脑梗死的诊断价值

目的评估生物标志物组对大动脉粥样硬化性脑梗死的诊断价值。方法 88例大动脉粥样硬化性脑梗死患者和88例对照者入选本研究,分别检验脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、髓过氧化物酶(MPO)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)、纤维蛋白原(FIB)、脑钠肽(BNP),应用Logistic回归和ROC曲线分析生物标志物组对大动脉粥样硬化性脑梗死的诊断价值。结果 Logistic回归显示Lp-PLA2、MPO、MMP9、BNP与诊断大动脉粥样硬化性脑梗死呈正相关(P<0.05),多变量模型ROC曲线下面积达到0.901。结论生物标志物组(Lp-PLA2、MPO、MMP9、BNP)对大动脉粥样硬化性脑梗死急性期的诊断提供了重要的价值。