去氢甲睾酮抗体的制备与鉴定

目的：制备兔抗去氢甲睾酮（DMT）抗体，为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础。方法：采用碳二亚胺法将肟化后的DMT分别偶联到钥孔血蓝蛋白、鸡卵清蛋白和牛血清白蛋白蛋白载体上，制备完全抗原，并利用薄层层析法、红外和紫外光谱法对其进行确证后，免疫新西兰大白兔；通过间接ELISA法测定和比较2种兔抗血清的效价、IC50及交叉反应率。结果：成功制备了DMT的完全抗原，其抗体效价分别为1：64000（KLH—DMT）和1：256000（OVA—DMT），IC50值分别为0．24ug／L和5.29ug／L；抗血清与丙酸睾酮酯、群勃龙的IC50值均大于781．25ug／L。结论：制备的DMT完全抗原具有较高的免疫原性，抗体与类似物丙酸睾酮酯、群勃龙无明显的交叉反应，可用于ELISA实验。

去氢甲睾酮单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备去氢甲睾酮(DMT)的单克隆抗体(mAb),为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础。方法:通过采用碳二亚胺法合成的完全抗原DMT-KLH免疫BALB/c小鼠,经过效价测定,ELISA方法建立,细胞融合、筛选和亚克隆,建立了去氢甲睾酮mAb杂交瘤细胞株,并采用ELISA方法测定mAb纯化后的效价、IC50、交叉反应率和抗体亲和力等参数,以及对猪肉样品中的DMT加标含量进行测定。结果:经过3次亚克隆成功建立1株分泌去氢甲睾酮mAb的杂交瘤细胞株,纯化后抗体的蛋白浓度为0.87mg/mL,效价为1∶32000,IC50值为7.57μg/L,亲和常数为3.09×109L/mol与丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1%,猪肉样品中平均加标回收率为97.73%。结论:成功筛选到分泌DMT mAb的杂交瘤细胞株,并对其产生的mAb的效价、IC50值、特异性、稳定性、IgG亚类和亲和力等特性进行了鉴定,为下一步开展DMT免疫学检测方法研究奠定了基础。

去氢甲睾酮ELISA试剂盒的研制

以实验室自主研发的一株能稳定分泌去氢甲睾酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株为基础,应用ELISA原理研制去氢甲睾酮残留快速检测试剂盒,并对试剂盒特性进行测定。结果表明,该试剂盒标准曲线的回归方程为y=-0.205 5x+0.516(R2=0.993 1),线性检测范围为0.1ng/mL～100ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为3.20ng/mL,对猪肉加标样品的检测回收率在87.41%±5.44%～110.70%±2.05%之间,试剂盒检测与去氢甲睾酮结构类似物丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1%;试剂盒在4℃能稳定保存6个月。说明试剂盒能够应用于食品中残留去氢甲睾酮的快速检测。

气相色谱-质谱法测定尿中去氢甲睾酮及其代谢物

对尿中痕量蛋白同化激素药物去氢甲睾酮(大力补)的净化富集及其内标物选择进行了探讨。建立了以XAD-2富集样品,酶水解后碱性条件乙醚提取,以炔雌醇为内标物,制成TMS-衍生物后,采用GC-MS,多离子检测方式(MID)测定的方法。该法快速、灵敏、专属。XAD-2富集样品回收率大于85%,CV小于7%,尿药浓度在0.02～0.30 μg/ml呈线性关系,最低检测尿药浓度为20 ng/ml。实验结果表明,尿中内源性物质对大力补及其代谢物测定均无干扰。利用质谱及多离子色谱证明大力补的主要代谢物为6-β-羟基大力补,服药后94 h代谢物仍可被检出,本法已成功地用于真实尿样的分析。

去氢甲睾酮单克隆抗体免疫亲和柱的制备与应用研究

目的为了防止去氢甲睾酮(MA)滥用,对其残留进行监测,迫切需要一种有效、方便、快速的检测方法。方法将MA单克隆抗体与CNBr-Sepharose 4B偶联制备获得去氢甲睾酮单克隆抗体免疫亲和柱(IAC),同时对色谱分离条件进行优化、对IAC的性能及实际应用进行系统评价。结果 IAC对MA的最大柱容量是4.76μg/g干胶,最佳上样和洗脱缓冲液分别为2%和70%的甲醇;柱子重复使用3次,柱容量和回收率分别为93.4%和81.1%。为进一步研究基质对提取效率的影响,用IAC对加标肉制品和中药材样品进行净化处理,其回收率为78.7%~95.1%。结论试验制备了对MA具有特异性吸附的IAC,并对其用于中药材等实际样品进行净化处理的应用前景进行了评价。

去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱的制备研究

将去氢甲睾酮多克隆抗体同CNBr-Sepharose4B进行偶联,制成了对去氢甲睾酮具有特异性吸附的免疫亲和柱(IAC),优化了免疫亲和柱的制备和使用条件;同时用间接竞争ELISA(icELISA)和高效液相色谱法(HPLC)对该免疫亲和柱的性能进行评价。结果表明:CNBr-Sepharose4B偶联抗体的最佳反应时间为2.5h,抗体最佳初始质量浓度为0.5mg/mL;IAC的柱容量约为1700ng DMT/g干胶;最适洗脱条件为80%的甲醇-水溶液,平均加标回收率为97.87%。该亲和柱重复使用3次,回收率仍不低于90%。

能诱发高血压的药物

高血压的发病率很高,其中绝大多数患者属于所谓的原发性高血压。值得注意的是近年来发现一些非循环系统药物也可以引致血压升高或使高血压患者的症状加重。这些药物按作用机制可分为如下四类。 一、钠潴留引致细胞外液增加而致的血压增高:该类药物包括盐皮质激素(11—去氧皮质酮及17—羟基11—去氧皮质酮等)、糖皮质激素(可的松、强的松、地塞米松等)、氮皮质激素(雄性激素中的甲基睾丸素、丙酸睾丸素、去氢甲睾酮;雌性激素中的雌二醇、雌三醇等)。