基于在体单向肠灌流模型探究去氢骆驼蓬碱衍生物HM-Y-A的肠吸收特性

目的考察去氢骆驼蓬碱衍生物(HM-Y-A)在小肠不同肠段、不同条件下的吸收特性,探究HM-Y-A的吸收机制。方法采用大鼠在体单向肠灌流模型结合HPLC测定法,考察不同肠段、不同药物浓度、不同pH值及P-糖蛋白抑制剂对HM-Y-A吸收参数(K_(a)和P_(app))的影响。结果HM-Y-A在小肠各段均有吸收,最佳吸收肠段是十二指肠和空肠;随着药物浓度升高,吸收参数K_(a)和P_(app)不断降低,低浓度与中、高浓度间差异具有统计学意义(P<0.05);在pH 6.4和7.4时K_(a)和P_(app)显著增高(P<0.05);加入P-糖蛋白抑制剂前后,吸收参数差异无统计学意义。结论HM-Y-A在小肠全段均有吸收,在十二指肠和空肠吸收较好;吸收机制可能以主动吸收或促进扩散为主;药物在偏碱性条件下吸收较好;HM-Y-A可能不是P-gp的底物。

基于秀丽隐杆线虫模型的去氢骆驼蓬碱衍生物1-(4-甲氧基)苯基-9-丁基-β-咔啉神经毒性效应

目的探讨1-(4-甲氧基)苯基-9-丁基-β-咔啉(DH-004)对秀丽隐杆线虫(简称线虫)的神经毒性。方法采用野生型线虫为模式生物,分别以DH-0040.0(溶剂对照组),12.5,25.0,50.0,100.0和200.0μmol·L^(-1)连续培养,分别于不同时间显微镜下观察线虫的存活率、头部摆动频次、有效产卵总数、趋向和趋避行为及摄食行为。吖啶橙染色荧光显微镜下观察细胞凋亡;试剂盒检测虫体组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性。结果与溶剂对照组相比,不同浓度DH-004染毒处理5 d后,线虫存活率随药物浓度的增加而显著降低(R^(2)=0.949,P<0.01)。DH-00425.0μmol·L^(-1)处理3 d(P<0.01)、50.0μmol·L^(-1)处理1~3 d(P<0.05,P<0.01)及100.0和200.0μmol·L^(-1)处理1~3 d(P<0.01)组线虫头部摆动频次均显著降低。与溶剂对照组相比,DH-00425.0,50.0,100.0和200.0μmol·L^(-1)组有效虫卵总数明显减少(P<0.01),趋向系数显著下降(P<0.05,P<0.01),趋避系数显著上升(P<0.01);DH-00412.5μmol·L^(-1)组处理2~3 d(P<0.01)及25.0,50.0,100.0和200.0μmol·L^(-1)组处理1~3 d(P<0.01)线虫咽部收缩次数均显著减少。吖啶橙染色结果显示,与溶剂对照组相比,DH-00450.0,100.0和200.0μmol·L^(-1)组细胞凋亡水平显著升高(P<0.01)。与溶剂对照组相比,DH-004浓度依赖性增高线虫体内AChE活性抑制率(R^(2)=0.851,P<0.01),IC50为(94.7±3.7)μmol·L^(-1)。结论DH-004对线虫具有一定的神经毒性效应,其作用机制可能与促进细胞凋亡和抑制AChE活性有关。

超高效液相色谱-串联质谱法测定去氢骆驼蓬碱衍生物DH-330血药浓度及其在大鼠体内的药动学评价Δ

目的:建立大鼠血浆中去氢骆驼蓬碱衍生物DH-330的测定方法,并对大鼠灌胃DH-330后的药动学行为进行评价。方法:以替硝唑为内标,血浆样品以乙腈沉淀蛋白处理后,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定血药浓度。色谱分析采用色谱柱为Waters ACQUITY BEH C1(850mm×2.1mm,1.7μm),流动相为乙腈-甲醇-0.5%甲酸水溶液(15∶55∶30,V/V/V),流速为0.4mL/min,柱温为30℃,进样量为5μL;质谱分析采用电喷雾电离源,正离子扫描,离子源温度为124℃,DH-330检测质荷比(m/z)为335.8→334.8,内标m/z为247.0→81.0。取6只Wistar大鼠,灌胃DH-330混悬液(50mg/kg),分别于给药前(0 h)及给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24 h时于大鼠眼底静脉丛采血,测定DH-330血药浓度并绘制血药浓度-时间曲线,并采用Kinetica 5.0软件计算其药动学参数。结果:DH-330血药浓度的线性范围为25.05~2 004ng/mL(r=0.999 8),定量下限为25.05ng/mL;日内、日间精密度RSD均小于10%;准确度相对误差(RE)为-9.76%~4.55%,提取回收率大于85%(RSD<5%);稳定性RE为-2.53%~2.29%;不受基质效应或进样残留效应的影响。大鼠灌胃DH-330后达峰浓度为(1 162.43±241.72)ng/mL,药-时曲线下面积为(3 242.93±652.31)ng·h/mL,半衰期为(1.93±0.61)h,平均滞留时间为(3.23±0.30)h,清除率为(16.80±5.30)L/(h·kg),稳态表观分布容积为(54.78±19.64)L/kg。结论:本研究建立的方法具有操作简便,专属性强,灵敏度、精密度及回收率高等优点,可用于大鼠血浆中DH-330血药浓度的测定。大鼠灌胃给药后,DH-330的半衰期短,吸收迅速,表观分布容积大,表明其具有高的亲脂性,可能主要集中分布于组织中。

去氢骆驼蓬碱衍生物DH-330的一般药理学研究

目的:研究1-(2-氯)苯基-9-丁基-β-咔啉(DH-330)在药效学剂量或之上时对实验动物神经系统、呼吸系统和心血管系统的影响,为其进一步的开发和使用提供安全性评价数据。方法:采用灌胃给药方式观察DH-330(50,250,500 mg·kg^(-1))对小鼠自主活动、协调功能和阈下睡眠剂量戊巴比妥钠协同作用的影响;通过测定呼吸幅度、呼吸频率、动脉收缩压、动脉舒张压、动脉平均压观察DH-330对大鼠呼吸系统及心血管系统的影响。结果:DH-330剂量为药效学有效剂量的10倍时(小鼠500 mg·kg^(-1)、大鼠350 mg·kg^(-1))单次给药后会导致小鼠自主活动减少,协调能力降低,对戊巴比妥钠催眠阈下剂量的效果无协同作用,但该剂量下会使麻醉大鼠血压降低及心电图异常,其余各剂量组和各观察指标均未见异常。结论:DH-330在有效量的10倍时可能会诱发中枢神经和心血管系统毒性。DH-330在有效剂量的10倍以下时,对动物中枢神经系统、呼吸系统和心血管系统均未见有毒理学意义的影响,因此在药效学有效剂量范围内具有较高的安全性。

去氢骆驼蓬碱衍生物H-Y-B在不同介质中平衡溶解度、表观油水分配系数及解离常数的测定

目的测定去氢骆驼蓬碱衍生物H-Y-B在不同pH缓冲液及不同溶剂中的平衡溶解度、正辛醇-水/缓冲溶液体系中的表观油水分配系数(lgP)及其解离常数(pKa),为H-Y-B的剂型设计提供依据。方法采用HPLC法测定H-Y-B的浓度,以饱和溶液法测定H-Y-B在不同pH缓冲液及不同溶剂中的平衡溶解度;以正辛醇-水/缓冲溶液为模拟系统,采用摇瓶法-HPLC法测定H-Y-B的表观油水分配系数;使用紫外分光光度法测定H-Y-B的解离常数。结果在37℃下,H-Y-B在pH为10.3中的溶解度最高,为(418.62±1.68)mg·mL^(-1),在pH为1.83中的溶解度最低,为(189.21±1.58)mg·mL^(-1)。H-Y-B在水中的溶解度为(305.82±2.43)mg·mL^(-1),在有机溶剂中的溶解度顺序为甲醇>二甲基亚砜>乙醇>异丙醇>正辛醇>乙腈>丙酮>乙酸乙酯;H-Y-B在水中lgP为0.63,在pH 6.8缓冲液中的lgP为0.50;H-Y-B的pKa值为(6.42±0.52)。结论H-Y-B为强极性化合物,脂溶性较差,推测药物不易透过细胞膜吸收和转运,且pH能影响表观油水分配系数,本研究可为H-Y-B口服吸收研究及新剂型设计提供依据。

去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004不同途径给药的大鼠体内药动学研究

目的:考察去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004不同给药途径在大鼠体内的药动学。方法:分别灌胃(ig)给予Wistar大鼠DH-004 50 mg·kg-1和尾静脉注射(iv)DH-004 10 mg·kg-1。UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中DH-004的浓度,采用Kinetica 5.0药动学软件计算药动学参数。结果:口服给药主要药动学参数Cmax,AUClast,CL,Vz,MRT和t1/2分别为(142.57±34.64)ng·m L-1,(566.40±164.27)ng·h·m L-1,(90.60±23.52)L·h-1,(297.15±57.33)L,(4.01±0.35)h和(2.51±0.74)h。尾静脉注射给药的主要药动学参数Cmax,AUClast,CL,Vz,MRT和t1/2分别为(1 894.78±453.96)ng·m L-1,(1 629.93±352.34)ng·h·m L-1,(5.03±0.97)L·h-1,(7.26±2.68)L,(0.83±0.17)h和(1.53±0.27)h。DH-004的绝对生物利用度为6.94%。结论:DH-004口服和静脉给药后在大鼠体内消除较快,绝对生物利用度低。该结果为DH-004的成药性评估提供了科学依据,为其结构改造与剂型设计提供了重要参考。

去氢骆驼蓬碱及其衍生物DH-004的急性毒性研究

目的研究去氢骆驼蓬碱及其衍生物DH-004的急性毒性。方法采用Bliss法测定小鼠经腹腔注射去氢骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004的LD50,记录各组小鼠的中毒症状。结果去氢骆驼蓬碱经腹腔注射的LD50及95%可信限为49.40 mg/kg体质量(41.44~57.62 mg/kg体质量);去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004经腹腔注射的LD50及95%可信限为252.66 mg/kg体质量(220.60~289.72 mg/kg体质量)。小鼠中毒症状主要表现为震颤、躁动不安、抽搐等情况。结论小鼠经腹腔注射给药去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004毒性小于去氢骆驼蓬碱毒性,去氢骆驼蓬碱经结构修饰能达到减毒作用。

去氢骆驼蓬碱衍生物1-(2-氯)苯基-9-丁基-β-咔啉的体内外安全性评价

目的评价去氢骆驼蓬碱衍生物1-(2-氯)苯基-9-丁基-β-咔啉(DH-330)的体外和体内安全性。方法将小鼠神经PC12细胞和肝NCTC1469细胞分别分为正常对照组和低、中、高剂量实验组。正常对照组给予等量基础培养液干预24 h;低、中、高剂量实验组分别给予10,20,40μg·mL^(-1)DH-330干预24 h。用噻唑蓝法检测细胞的抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率。将140只健康成年小鼠随机分为7组,分别为空白组,低、中、高剂量对照组和低、中、高剂量实验组,每组20只。空白组给予0.9%Na Cl;低、中、高剂量对照组分别给予50,100和200 mg·kg^(-1)去氢骆驼蓬碱;低、中、高剂量实验组分别给予50,100和200 mg·kg^(-1)DH-330。7组小鼠每天灌胃给药1次,连续给药90 d。用全自动生化分析仪测定血液学指标,用苏木精-伊红染色法观察病理组织改变。结果干预24 h,DH-330对PC12及NCTC1469细胞增殖抑制率呈剂量依赖性,半抑制浓度分别为(47.74±1.24)和(73.56±2.05)μg·mL^(-1)。低、中、高剂量实验组和空白对照组对PC12细胞的总凋亡率分别为(11.51±0.13)%,(16.32±0.16)%,(43.63±0.08)%和(2.00±0.03)%,对NCTC1469细胞的总凋亡率分别为(11.41±0.14)%,(18.31±0.10)%和(45.06±0.09)%和(2.00±0.12)%;低、中、高剂量实验组的总凋亡率均显著高于空白对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。高剂量对照组小鼠的谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶分别为(223.20±19.47),(69.68±12.50)和(128.90±15.39) U·L^(-1),均明显高于空白组的(133.50±24.67),(39.40±3.93)和(76.50±15.13) U·L^(-1),差异均有统计学意义(均P <0.05)。中、低剂量对照组和低、中、高剂量实验组的血生化结果与空白组比较,差异均无统计学意义(均P> 0.05)。小鼠病理组织学结果显示,高剂量对照组的小鼠心、肝、脾、肺、肾及脑组织均有器质性病变,低、中、高剂量实验组均无器质性病变。结论 DH-330在体外和体内均具有较高的安全性。

去氢骆驼蓬碱衍生物1-(2-氯)苯基-9-丁基-β-咔啉对小鼠细粒棘球蚴病的影响

目的研究去氢骆驼蓬碱衍生物1-(2-氯)苯基-9-丁基-β-咔啉(DH-330)对小鼠细粒棘球蚴病的作用。方法昆明小鼠腹腔注射原头节继发感染8个月制备细粒棘球蚴病小鼠模型。按照体质量将造模成功小鼠随机分为6组:模型组、对照1组、对照2组和低、中、高3个剂量实验组,每组10只。模型组给予蒸馏水;对照1组给予50 mg·kg^(-1)阿苯达唑;对照2组给予50 mg·kg^(-1)去氢骆驼蓬碱;低、中、高3个剂量实验组分别给予25,50,100 mg·kg^(-1)DH-330。灌胃给药8周后,解剖小鼠取囊泡,比较各组间囊湿重差异;透射电镜观察囊泡超微结构变化;用苏木精-伊红染色法观察囊泡、肝病理组织学变化。结果模型组、对照1组、对照2组和低、中、高3个剂量实验组小鼠的嚢湿重分别为(34.38±4.32),(11.38±2.37),(15.89±1.31),(16.22±2.30)(11.69±2.95)和(9.78±1.14)g,与模型组相比,各给药组均可显著降低囊湿重,差异均有统计学意义(均P<0.05);与去氢骆驼蓬碱相比,高剂量实验组可明显降低囊湿重,差异有统计学意义(P<0.05)。除模型组和低剂量实验组外,其余各组均能够破坏包虫细胞核,导致细胞裂解、核仁消失。实验组能够不同程度的改善肝和囊泡组织中炎细胞浸润情况。结论DH-330能够降低细粒棘球蚴病小鼠的囊湿重,抑制小鼠体内包虫生长,并能改善肝和囊泡的炎症,显示出良好的抗细粒棘球蚴作用,或可能成为一种有效的抗包虫病新药。

1,9取代去氢骆驼蓬碱衍生物体外抗细粒棘球蚴作用的研究

目的研究1,9取代去氢骆驼蓬碱衍生物1-(4-甲氧基)苯基-9-丁基-β-咔啉(DH-004)、1-甲基-9-己基-β-咔啉(DH-029)和1-甲基-9-辛基-β-咔啉(DH-030)体外杀灭细粒棘球蚴的作用。方法将体外培养细粒棘球蚴分成5组:空白组、对照组和3个实验组。空白组用1%二甲基亚砜处理;对照组分别用1.56,3.12,6.25,12.50,25.00和50.00μg·mL^(-1)去氢骆驼蓬碱处理;实验1,2,3组分别用相同浓度梯度的DH-004、DH-029和DH-030处理,均干预48 h。用伊红染色法测定各组细粒棘球蚴死亡率,用透射电镜观察各组细粒棘球蚴超微结构变化。结果去氢骆驼蓬碱、DH-004、DH-029和DH-030的体外抗细粒棘球蚴作用均呈剂量依赖性。与对照组相比,实验1,2,3组均能够显著增加细粒棘球蚴死亡率,差异均有统计学意义(均P<0.01)。对照组和实验1,2,3组的半数抑制浓度分别为48.15,14.09,18.01和13.43μg·mL^(-1)。透射电镜结果显示,对照组和实验组的细粒棘球蚴细胞质出现空泡,细胞核固缩,形成层状体和脂滴,显示出显著的超微结构损伤。结论1,9取代去氢骆驼蓬碱衍生物对体外细粒棘球蚴具有明显的抑制作用。

超高效液相-串联质谱法测定大鼠血浆中去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004浓度

目的建立大鼠血浆中去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定方法,并将其应用于大鼠口服给药后体内DH-004浓度测定。方法大鼠灌胃给予DH-004(200 mg·kg^(-1))后,于不同时间眼底静脉丛采血;血浆样品用乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Waters Acquity BEH-C_(18)柱(50 mm×2. 1 mm,1. 7μm),流动相为甲醇-0. 2%甲酸溶液(70∶30);流速0. 3 mL·min^(-1);用电喷雾离子源,在正离子模式下进行检测。用Kinetica 5. 0药代动力学软件计算药代动力学参数。结果去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004标准曲线方程为Y=1. 22×10~4X+1. 62×10~4(r=0. 999 8),在10～1000 ng·mL^(-1)线性关系良好,定量下限为10 ng·mL^(-1)。批内和批间精密度均小于15%,提取回收率、准确度良好。结论本研究所建立的方法简便快速、灵敏度高,重现性好,可用于进行大鼠血浆中去氢骆驼蓬碱衍生物血药浓度测定及药代动力学研究。

去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004大鼠在体肠吸收动力学研究

目的考察去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004大鼠在体肠吸收动力学特征,探讨其可能的吸收机制。方法建立UPLC法测定灌流液中DH-004浓度,用大鼠在体单向肠灌流模型考察不同质量浓度的DH-004在不同肠段的吸收特征。结果 DH-004在全肠段均有吸收。20.0μg·mL^(-1) DH-004在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收速率常数(K_a)分别为(11.66±3.84)×10^(-2),(10.85±2.65)×10^(-2),(7.48±1.70)×10^(-2)和(4.75±1.14)×10^(-2) min,药物表观渗透系数(P_(app))分别为(1.47±0.33)×10^(-2),(1.55±0.20)×10^(-2),(1.25±0.10)×10^(-2)和(0.98±0.22)×10^(-2) cm·min^(-1)。DH-004在十二指肠段与空肠段的K_a均明显大于其在回肠和结肠的K_a(均P<0.05)。结论 DH-004在大鼠小肠全段有不同程度地吸收,十二指肠和空肠可能为其主要吸收部位。

平衡透析法结合HPLC测定去氢骆驼蓬碱衍生物(DH-004)在大鼠血浆的蛋白结合率

目的研究去氢骆驼蓬碱衍生物(DH-004)在大鼠血浆的蛋白结合率。方法Wistar大鼠腹主动脉采血,肝素抗凝,4℃下以3.5×10^(3) r·min^(-1)离心15 min后分离血浆。以替硝唑为内标,用平衡透析法处理样品,用高效液相色谱(HPLC)法测定透析袋内外溶液中DH-004的浓度,计算蛋白结合率。结果DH-004于大鼠血浆中在1.05,2.10,5.26μg·mL^(-1)下的血浆蛋白结合率分别为(89.96±0.89)%,(90.79±0.85)%和(91.39±1.00)%。结论DH-004与大鼠血浆蛋白有较强的结合作用,属于高蛋白结合型药物。

去氢骆驼蓬碱及其衍生物H-2-168对SH-SY5Y细胞的毒性作用

目的通过建立SH-SY5Y模型,探讨去氢骆驼蓬碱(HM)及其衍生物H-2-168对神经细胞的毒性作用。方法将SH-SY5Y细胞分为对照组(给予含0.1μmol·L^(-1)二甲基亚砜的完全培养基),低、中、高剂量HM组(分别给予含1、5和10μmol·L^(-1)HM的完全培养基)和低、中、高剂量衍生物组(分别给予含1、5和10μmol·L^(-1)H-2-168的完全培养基)。用克隆形成实验检测细胞的增殖情况,用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)和腺苷三磷酸(ATP)水平,用JC-1染色法测定细胞线粒体膜电位(MMP)。结果高剂量HM组、高剂量衍生物组和对照组的克隆形成率分别为(14.43±0.85)%、(43.00±2.26)%和(100.20±0.82)%,LDH释放水平分别为(404.28±8.79)%、(260.36±2.04)%和(100.00±0.28)%,ATP水平分别为(56.36±1.65)%、(77.65±0.70)%和(100.00±0.85)%,MMP水平分别为0.21±0.02、1.27±0.24和8.33±1.04。高剂量HM组和高剂量衍生物组的上述指标与对照组比较,高剂量HM组的上述指标和高剂量衍生物组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论HM衍生物H-2-168对SH-SY5Y细胞的损伤作用明显低于HM。

1-(2-氯)苯基-9-丁基-β-咔啉对小鼠的神经毒性作用

目的:探讨去氢骆驼蓬碱衍生物1-(2-氯)苯基-9-丁基-β-咔啉(简称“DH-330”)对小鼠神经行为损伤的影响及可能机制,为系列衍生物的开发提供依据。方法:将昆明小白鼠随机分为4组,分别为空白对照组(0.9%NaCl溶液)、低剂量组(69.44 mg·kg^(-1)DH-330)、中剂量组(208.33 mg·kg^(-1)DH-330)和高剂量组(347.22 mg·kg^(-1)DH-330),连续灌胃给药28 d,采用Morris水迷宫实验测试神经行为;通过免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠脑组织中ROS、GSH、MAO、AChE、5-HT含量,同时采用透射电镜对小鼠海马组织超微结构进行观察。结果:Morris水迷宫实验:高剂量DH-330对小鼠的空间学习记忆能力造成影响,主要表现为高剂量组小鼠的逃避潜伏期及总行程显著长于对照组(P<0.05),而穿台次数及靶象限停留时间显著少于对照组(P<0.05)。生化指标结果:与对照组比较,DH-330高剂量组小鼠脑内ROS、5-HT水平显著升高(P<0.05);GSH、AChE、MAO含量显著降低(P<0.05)。海马超微结构:高剂量DH-330可导致海马组织中细胞结构损伤,主要表现为异染色质多黑、线粒体出现空泡化等现象。结论:DH-330可致小鼠神经行为系统损伤,其机制可能是通过抑制小鼠脑内AChE、MAO及GSH含量,促使ROS、5-HT水平升高,导致氧化平衡状态改变及单胺类神经递质含量升高,从而诱导神经行为毒性。