去泛素化蛋白USP21在宫颈癌中的表达及与宫颈癌患者临床表现的相关性分析

目的探讨去泛素化蛋白USP21在宫颈癌组织中的表达及与宫颈癌患者临床表现的相关性,为研究宫颈癌的发病机制奠定理论基础。方法收集晋城大医院手术后宫颈癌组织标本40例(宫颈癌组)及癌旁组织40例(对照组),采用实时荧光定量PCR法,免疫组化染色法检测两组标本中去泛素化蛋白USP21的表达情况,并分析去泛素化蛋白USP21与宫颈癌患者临床特征的关系。结果宫颈癌组织中的去泛素化蛋白USP21阳性表达率为87.50%,明显高于对照组的7.50%,差异有统计学意义(P<0.001);宫颈癌组织中的去泛素化蛋白USP21阳性表达与患者的FIGO分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论去泛素化蛋白USP21在宫颈癌组织中高表达,与宫颈癌的发生、发展关系密切。

肺浸润性腺癌组织中去泛素化酶USP17与基质金属蛋白-9的表达研究

目的 :检测肺浸润性腺癌术后组织中去泛素化酶USP17(USP17)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达特征,分析其在临床病理特征中的表达差别,探讨二者的相关性,关注对判断预后的价值。方法:本实验以75例肺浸润性腺癌作为观察组,以32例正常肺组织作为对照组,应用免疫组化方法检测二组中USP17和MMP-9的表达。结果:二组中USP17和MMP-9的表达差别有统计学意义,观察组中二者的表达与癌栓、分化及淋巴结转移有关,USP17的表达与Ki67指数和最大径有关。相关分析显示观察组中USP17和MMP-9的表达具有正相关性。二者表达与预后有关。结论:USP17和MMP-9在肺浸润性腺癌术后组织高表达,具有相关性,对病变的进展有一定调节作用,联合检测二者可能对判断预后有一定价值。

去泛素化酶USP13与抑癌蛋白Merlin的相互作用

神经纤维瘤病Ⅱ型为遗传性疾病,NF2基因是重要的抑癌基因,其编码的Merlin蛋白表达水平的变化与肿瘤的发生密切相关。Merlin蛋白可以被泛素化修饰,但对其去泛素化过程的研究却鲜有报道。该研究采用免疫共沉淀(Co-IP)及免疫印迹(WB)方法研究去泛素化酶USP13与抑癌蛋白Merlin之间的相互作用。结果表明,抑癌蛋白Merlin与去泛素化酶USP13之间具有相互作用,为进一步研究抑癌蛋白Merlin与去泛素化酶USP13之间的关系提供依据。

E3泛素连接酶WWP2通过蛋白酶体途径调控p21的稳定性

目的 探讨含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2 (WWP2)调控p21稳定性的潜在作用机制。方法 通过免疫共沉淀及Western blotting检测HEK 293T细胞中WWP2与p21的结合情况。用蛋白酶体抑制剂(MG132)和放线菌酮(CHX)处理过表达或敲减WWP2 HEK 293T细胞0、4、8 h,通过Western blotting检测p21的表达情况。结果 WWP2与p21间存在结合。过表达WWP2的293T细胞中,p21的表达水平明显降低,且随WWP2表达量增加逐渐降低。敲减WWP2的293T细胞中,p21表达水平增加。随着CHX作用时间延长,对照组和实验组的p21表达水平均逐渐下降。过表达组p21半衰期较对照组缩短;敲减组p21半衰期较对照组延长。随着MG132作用时间延长,对照组和实验组p21表达水平均逐渐上升。空载组较过表达组、敲减组较对照组p21积累均更显著。结论 E3泛素连接酶WWP2可与p21结合,并通过蛋白酶体途径降解p21。

USP37稳定SREBP1a促进胆固醇摄取和脂质沉积

目的筛选影响胆固醇调节元件结合蛋白1a(cholesterol regulatory element binding protein,SREBP1a)蛋白稳定性的去泛素化酶,并探索其调控机制。方法通过去泛素化酶库筛选显著影响SREBP1a表达的去泛素化酶,免疫蛋白印记实验和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)评估去泛素化酶对SREBP1a以及升脂基因表达的影响;通过红色荧光蛋白标记人源低密度脂蛋白(human Dil-low density lipoprotein,Human Dil-LDL)摄取和油红O染色等实验技术检测细胞摄取低密度脂蛋白(LDL)和脂质沉积情况。结果去泛素化酶库筛选发现泛素特异肽酶37(ubiquitin specific peptidase 37,USP37)可显著增加肝细胞SREBP1a蛋白表达水平,促进胆固醇摄取及脂质沉积。USP37基因敲除可显著降低SREBP1a蛋白表达水平,抑制升脂基因表达及脂质沉积。结论去泛素化酶USP37通过稳定SREBP1a蛋白表达,促进胆固醇摄取及脂质沉积,揭示了SREBP1a翻译后调控的新模式。

LSD1去泛素化酶USP17

组蛋白去甲基化酶LSD1是一个调控基因表达,影响机体发育和肿瘤发生的重要蛋白,它在细胞内的含量是受到精确调控的,其中LSD1蛋白的泛素化和去泛素化就是重要的调控方式,因此,筛选并研究LSD1的去泛素化修饰酶就显得非常重要。通过蛋白稳定性实验,实时定量PCR,免疫共沉淀,泛素蛋白链检测和信号通路激活实验来鉴定蛋白。通过生长曲线测定来研究基因对细胞增殖的影响。结果显示,USP17能够直接结合LSD1并切除其上的多聚泛素链而稳定LSD1在细胞内的蛋白水平,同时增强LSD1激活的STAT3信号通路,并且促进肿瘤细胞的增殖。因此,USP17是一个LSD1去泛素化酶。

去泛素化酶USP14对铁死亡的调控作用

铁死亡是一种依赖铁的新型非凋亡细胞死亡形式,在调节细胞代谢、细胞命运决定以及疾病的发生和发展中扮演着关键角色。去泛素化酶14(ubiquitin-specific protease 14,USP14)作为泛素-蛋白酶体和自噬途径的重要调节因子,除了参与细胞周期、免疫反应、信号转导等经典生命活动的调节,对铁死亡相关途径的关键蛋白发挥了精细调控作用。USP14作为一个潜在的抗肿瘤药物靶点,目前已经有一系列靶向抑制剂被开发出来。本文主要综述了USP14的活性调控机制、在铁死亡相关疾病中的生理作用以及其小分子抑制剂的研究进展,并对相关研究中的问题和挑战进行了深入探讨,旨在为未来的研究提供新的方向和策略。

泛素特异性蛋白酶15稳定着色性干皮病F蛋白并促进DNA链间交联损伤修复

着色性干皮病F蛋白(xeroderma pigmentosum group F,XPF)和切除修复交叉互补组1蛋白(excision repair cross complementing group 1,ERCC1)组成一种结构特异性的核酸内切酶(XPFERCC1)复合物,参与DNA链间交联(interstrand crosslink,ICL)损伤修复。其中,XPF蛋白的去泛素化修饰对DNA损伤修复的影响尚未见报道。本工作主要研究泛素特异性蛋白酶15 (ubiquitinspecific protease 15,USP15)对XPF的稳定性及ICL修复的影响。本研究通过蛋白质质谱和Western印迹法分析发现,XPF蛋白与USP15存在相互作用,进而使XPF蛋白去泛素化修饰;采用CRISPR-Cas9技术构建USP15基因敲除的He La细胞株(USP15 KO)并进行Western印迹分析,结果显示,敲除组XPF蛋白水平低于对照组(P<0. 001)。克隆形成试验显示,在ICL诱导剂顺铂(cisplatin,DDP)和丝裂霉素C (mitomycin,MMC)的作用下,USP15基因敲除的HeLa细胞增殖能力显著降低(P<0. 01)。本研究表明,去泛素化酶USP15是一种重要的DNA修复调节因子,该酶通过稳定XPF蛋白促进由XPF-ERCC1介导的ICL修复。本研究为改善ICL诱导剂类抗癌药物的耐药性提供了理论依据,并为肿瘤的治疗提供了潜在的新靶点。

PKA磷酸化p21^(WAF)后对其泛素化修饰和稳定性的影响

目的:探索p21被蛋白激酶A(PKA)磷酸化修饰后对其泛素化修饰和稳定性的影响。方法:构建p21可能磷酸化位点的突变体p21 T145A,观察PKA体外磷酸化修饰p21;W estern印迹分析PKA特异性抑制剂H89对p21稳定性的影响;通过免疫沉淀分析H89对p21泛素化修饰的影响以及p21 Thr 145突变前后和Skp2结合能力的变化。结果:PKA体外磷酸化修饰p21的Thr 145;PKA特异性抑制剂H89能够提高p21的稳定性并抑制p21的泛素化修饰;野生型(w ild)p21比p21 T145A结合Skp2的能力强。结论:PKA磷酸化修饰p21的Thr145后导致其结合E3连接酶结合亚基Skp2的能力增强,从而促进p21的泛素化修饰,导致p21稳定性的降低。

USP4通过去泛素化转化生长因子-βⅠ型受体调控乳腺癌细胞的生物学活性

目的观察泛素特异性蛋白酶USP4对转化生长因子-βⅠ型受体（TGFβRI）的去泛素化调节及其对乳腺癌细胞生物学活性的调控。方法通过慢病毒感染构建过表达USP4的稳定乳腺癌细胞株BT-549。在乳腺癌细胞中表达外源性泛素，通过泛素化实验验证USP4对TGFβRI的泛素化修饰。采用克隆形成实验和划痕实验检测USP4对乳腺癌细胞克隆形成能力、迁移能力的影响。结果过表达USP4的稳定乳腺癌细胞株中USP4mRNA的表达量（△Ct=3．43±0．05）是空白对照细胞（△Ct=7．26±0．03）的14．22倍，差异有统计学意义（t=69．350，P=0，000）；USP4蛋白的表达量是空白对照细胞的4．99倍，差异有统计学意义（t=28．440，P=0．000）。过表达USP4后TGFβ3RI的体外泛素化水平明显降低。在克隆形成实验中，稳定过表达USP4、病毒对照及空白对照的BT-549细胞克隆形成率分别为（25．83±1．01）％、（11．83±0．60）％、（7．17±0．60）％，分别t=11．880、15．840，差异有统计学意义（P=0．000）。在划痕试验中，放大200倍视野下观察稳定过表达USP4、病毒对照及空白对照的BT-549细胞，每个视野可见发生迁移的细胞个数为（56．67±1．76）、（27．00±1．16）、（27．33±1．45）个，t=14．070、12．840，差异有统计学意义（P=0．000）。结论USP4可通过其去泛素化酶的活性解除TGFβRI耦联的泛素链稳定TGFβRI的表达，从而增强乳腺癌细胞的生物学活性。

去泛素化酶USP3在细胞中的功能作用及其研究进展

Ubiquitin-specific protease 3（USP3）属于半胱氨酸蛋白酶,是去泛素化酶家族（deubiquitinating enzymes,DUBs）的重要成员,为能够断裂脯氨酸残基连接的泛素链的特异性蛋白酶。USP3蛋白由520 aa组成,有两个保守的蛋白结构域：一个为催化结构域,即泛素特异性蛋白酶活性区域,另一个为锌指泛素连接结构域（Zn F-UBP）即泛素连接区。近年来研究表明USP3参与细胞中多种生命活动的调节,如细胞增殖、细胞周期、DNA损伤修复等。同时,USP3在炎症应答及肝癌的发生发展中也表现出重要的作用。本综述就USP3在细胞中的功能作用以及最新研究进展进行了综述。

血浆外泌体源性miR-335-5p可作为三阴性乳腺癌诊断指标并抑制免疫逃逸

目的本研究旨在探究血浆外泌体源性miR-335-5p调控泛素特异性蛋白酶22(USP22)对三阴性乳腺癌(TNBC)免疫逃逸的影响。方法收集TNBC患者血浆与健康人血浆,之后分离血浆外泌体,实时定量PCR检测外泌体中miR-335-5p的相对表达。双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与USP22的相互作用。调节外泌体、MDA-MB-436细胞中miR-335-5p与USP22的表达,将其与CD8^(+)T淋巴细胞共培养并将其分为不同组。流式细胞术检测各组细胞中细胞凋亡情况,ELISA检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。Western blot法检测细胞中USP22对程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)稳定性的影响。裸鼠成瘤实验检测miR-335-5p与PD-L1在体内对肿瘤生长的影响。结果TNBC外泌体样本中miR-335-5p的表达下调。USP22被证实为miR-335-5p的一个靶基因,此外,USP22可以抑制PD-L1蛋白泛素化。过表达miR-335-5p能抑制TNBC的免疫逃逸。抑制miR-335-5p可以促进TNBC的免疫逃逸,该作用可以通过下调USP22得到部分挽救。敲低miR-335-5p能促进体内肿瘤生长,加入PD-L1抗体后肿瘤生长被抑制。结论外泌体源性miR-335-5p通过下调USP22,促进USP22对PD-L1的泛素化,并抑制PD-L1介导的TNBC免疫逃逸。