去泛素化酶USP14对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 研究抑制去泛素化酶USP14的活性对大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响.方法 用胰酶消化法和差速离心法分离培养新生SD大鼠CFs,加入不同浓度去泛素化酶USP14的抑制剂IU1作用48小时后,采用MTS、细胞计数法和结晶紫染色法检测CFs的增殖,采用LDH释放检测测定IU1对CFs的细胞毒性作用.结果 IU1可以浓度依赖的抑制CFs的增殖,并且没有明显的细胞毒性作用.结论 抑制去泛素化酶USP14活性可以抑制CFs的增殖,去泛素化酶USP14可能是一个抗心肌纤维化的重要靶点.

蛋白酶体相关去泛素化酶USP14的研究进展

USP14是一种结合在26S蛋白酶体上的去泛素化酶,通过对蛋白质底物泛素链的修剪,在细胞内蛋白质的泛素化修饰和稳态调控过程扮演了重要角色。USP14参与细胞周期、信号传导等生命活动。USP14在许多癌症及神经退行性疾病中过度表达,敲除USP14基因可缓解部分上述疾病的发生发展。一些USP14选择性抑制剂已经显现出潜在的癌症和神经退行性疾病的治疗前景。本文综述了近年来USP14的结构、功能以及调控机制等方面的研究进展。

去泛素化酶USP14对铁死亡的调控作用

铁死亡是一种依赖铁的新型非凋亡细胞死亡形式,在调节细胞代谢、细胞命运决定以及疾病的发生和发展中扮演着关键角色。去泛素化酶14(ubiquitin-specific protease 14,USP14)作为泛素-蛋白酶体和自噬途径的重要调节因子,除了参与细胞周期、免疫反应、信号转导等经典生命活动的调节,对铁死亡相关途径的关键蛋白发挥了精细调控作用。USP14作为一个潜在的抗肿瘤药物靶点,目前已经有一系列靶向抑制剂被开发出来。本文主要综述了USP14的活性调控机制、在铁死亡相关疾病中的生理作用以及其小分子抑制剂的研究进展,并对相关研究中的问题和挑战进行了深入探讨,旨在为未来的研究提供新的方向和策略。

去泛素化酶USP22在多囊卵巢综合征发病过程中的作用研究

目的 探索去泛素化酶USP22在多囊卵巢综合征(PCOS)发病过程中的作用及机制。方法 利用脱氢表雄酮(DHEA)诱导建立小鼠PCOS模型,免疫组化及Western blot检测USP22在PCOS模型小鼠及对照小鼠卵巢组织中的表达变化;在卵巢颗粒细胞系(KGN)细胞中加入500 nmol/L双氢睾酮(DHT)模拟PCOS颗粒细胞中的高雄状态,并构建靶向USP22的siRNA,敲低KGN细胞中USP22的表达,对照组加入空白siRNA,CCK-8检测各组细胞的增殖变化,RT-PCR检测细胞周期相关分子的mRNA表达水平,Western blot检测细胞周期相关蛋白及信号通路相关蛋白表达情况。结果 USP22蛋白主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞核,且在PCOS小鼠卵巢组织中USP22表达显著低于正常小鼠(P<0.05)。细胞实验结果表明:敲低USP22后,KGN细胞的增殖能力显著下降(P<0.05),RT-PCR及Western Blot结果显示细胞周期相关蛋白Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);而在KGN细胞中敲低USP22的同时加入DHT,KGN细胞增殖能力及相关分子表达下降更为显著(P<0.05);另外,敲低USP22后,KGN细胞中信号通路相关蛋白p-PI3K和p-AKT的表达水平显著下降(P<0.05)。结论 去泛素化酶USP22可通过PI3K/AKT信号通路调控KGN细胞的增殖,从而影响PCOS的发病。

去泛素化酶USP14的功能及其抑制剂的研究进展

去泛素化酶USP14(ubiquitin-specific proteases 14)属于去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUBs)中的泛素特异性蛋白酶家族(ubiquitin-specific proteases,USPs),其可以切除底物的泛素链,并发挥相应的生物学效应。USP14在信号通路转导、病毒感染的调节、神经系统功能以及肿瘤发生发展进程中均起着重要作用。因其在肿瘤发展中的重要作用以及作为药靶的可行性,当前已经有很多研究将USP14的抑制剂作为抗肿瘤药物研究的新方向。主要综述了USP14在信号通路、病毒感染、神经系统、肿瘤发展中的作用以及其抑制剂的研究进展。

脑胶质瘤组织去泛素化酶USP9X表达水平与病人生存预后的关系

目的探讨脑胶质瘤组织去泛素化酶USP9X表达水平与病人生存预后的关系。方法选取2016年6月至2018年6月手术切除的108例脑胶质瘤组织标本和25例颅内减压术中切除的正常脑组织为对照,免疫组织化学染色法检测组织USP9X蛋白表达水平,根据染色强度评分和阳性细胞比例评分≥4分定为高表达。随访截止2023年5月,计算总体生存时间。结果108例胶质瘤中,WHO分级Ⅱ级38例,Ⅲ级46例,Ⅳ级24例。WHO分级Ⅳ级(79.17%)、Ⅲ级(58.69%)、Ⅱ级(39.47%)脑胶质瘤组织USP9X高表达率均明显高于正常脑组织(24.00%,P<0.05),并且WHO分级越高,USP9X高表达率越高(P<0.05)。随访期间,失访8例,死亡68例(高表达组51例,低表达组17例)。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示USP9X高表达是脑胶质瘤不良生存预后的独立危险因素(OR=2.173;95%CI 1.412~5.572;P<0.001),生存曲线分析显示USP9X高表达病人的中位总体生存期较低表达病人明显缩短(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织USP9X呈高表达,与病人不良生存预后有关。

去泛素化酶USP35在癌症中的研究进展

USP家族是去泛素化酶中数量最多的家族,泛素特异性蛋白酶35(ubiquitin specific peptidase35,USP35)是USP家族成员。近年来的研究显示,USP35在癌症进展中发挥了关键作用,在肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、皮肤黑色素瘤、结直肠癌、肾透明细胞癌等多种癌组织中有表达。本文就USP35作用机制、结构、以及近年来在癌症中的研究进展进行综述。

去泛素化酶USP22与肿瘤关系的研究进展

去泛素化酶USP22为人类基因组编码的50多种特异性蛋白酶之一,属去泛素化酶的亚家族,是一种重要的去泛素化酶。USP22通过特异性识别靶蛋白,使靶蛋白去泛素化并阻止其降解。研究表明,USP22可通过多种途径影响肿瘤的发生及发展,如细胞的凋亡和自噬、肿瘤信号通路、细胞周期的调节和DNA损伤修复等,而且抑制USP22表达可影响细胞的增殖、成瘤和浸润。该文就USP22与肿瘤发生及发展的关系作一综述。

去泛素化酶USP12抑制肺腺癌增殖和促凋亡

目的揭示去泛素化酶USP12在肺腺癌中的功能。方法通过对TCGA数据库和肺癌组织芯片分析检测USP12在癌与癌旁中的表达差异。对肺癌A549与H1299细胞系转染shUSP12或pCDH-USP12进行敲低或过表达实验,并通过实时定量PCR实验验证转染效率,采用MTT、克隆形成实验检测USP12敲低或过表达后肺癌细胞增殖情况,流式细胞术和蛋白质免疫印迹实验检测过表达USP12后肺癌细胞的凋亡情况。结果TCGA数据与组织芯片分析结果显示,USP12在肺癌病人肿瘤组织中表达水平显著低于正常组织;MTT与克隆形成实验证明USP12过表达后肺癌A549与H1299细胞的增殖能力显著减弱而凋亡水平明显增加。结论USP12在肺癌肿瘤组织中低表达,能够抑制肺癌细胞增殖并且促进细胞凋亡。

去泛素化酶USP33的研究进展

泛素-特异性蛋白酶33(ubiquitin-specific proteases 33,USP33)是去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUB)家族的重要成员,主要通过对底物蛋白的去泛素化阻止蛋白酶体降解,进而调节细胞内多种生命活动。同时,USP33在不同肿瘤中的特异性可为肿瘤的预防、治疗及预后提供新方向。该文现就USP33在信号通路、自噬、中心体扩增、肿瘤发生、发展中的研究进展进行回顾和综述。

去泛素化酶PSMD14在肿瘤中的研究进展

泛素蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system,UPS)能够介导真核细胞中80%以上蛋白质的降解,对底物的蛋白稳定和功能发挥起到关键作用。作为一种重要的泛素化修饰调控因子,去泛素化酶能够从底物上切割泛素,修饰泛素链并加工泛素前体,与多种生理病理过程密切相关。其中,去泛素化酶PSMD14(proteasome 26S subunit,non-ATPase 14)位于蛋白酶体26S亚基,是一种非ATP酶组分。近年来,其在肿瘤发生发展中的作用越来越受到关注。本文将对PSMD14的结构、作用机制及其抑制剂在肿瘤中的研究进展进行综述。

肺浸润性腺癌组织中去泛素化酶USP17与基质金属蛋白-9的表达研究

目的 :检测肺浸润性腺癌术后组织中去泛素化酶USP17(USP17)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达特征,分析其在临床病理特征中的表达差别,探讨二者的相关性,关注对判断预后的价值。方法:本实验以75例肺浸润性腺癌作为观察组,以32例正常肺组织作为对照组,应用免疫组化方法检测二组中USP17和MMP-9的表达。结果:二组中USP17和MMP-9的表达差别有统计学意义,观察组中二者的表达与癌栓、分化及淋巴结转移有关,USP17的表达与Ki67指数和最大径有关。相关分析显示观察组中USP17和MMP-9的表达具有正相关性。二者表达与预后有关。结论:USP17和MMP-9在肺浸润性腺癌术后组织高表达,具有相关性,对病变的进展有一定调节作用,联合检测二者可能对判断预后有一定价值。

去泛素化酶USP9X促进消化系统肿瘤进展的研究现状

去泛素化酶9X(USP9X)是去泛素化酶(DUBs)中的一员。USP9X是X染色体连锁的泛素特异性蛋白酶(U SPs),可以通过稳定不同的底物,发挥相应的生物学效应。USP9X在信号通路转导、细胞生长及迁移、免疫应答、干细胞的自我更新及分化、神经系统功能以及肿瘤发生发展进程中均起着重要作用。因其在消化道肿瘤发生发展中的重要作用以及作为药物靶点的可行性,本文综述了USP9X在常见的消化系统恶性肿瘤发生发展中作用的研究进展。

去泛素化酶USP13与抑癌蛋白Merlin的相互作用

神经纤维瘤病Ⅱ型为遗传性疾病,NF2基因是重要的抑癌基因,其编码的Merlin蛋白表达水平的变化与肿瘤的发生密切相关。Merlin蛋白可以被泛素化修饰,但对其去泛素化过程的研究却鲜有报道。该研究采用免疫共沉淀(Co-IP)及免疫印迹(WB)方法研究去泛素化酶USP13与抑癌蛋白Merlin之间的相互作用。结果表明,抑癌蛋白Merlin与去泛素化酶USP13之间具有相互作用,为进一步研究抑癌蛋白Merlin与去泛素化酶USP13之间的关系提供依据。

去泛素化酶的复杂角色

去泛素化是蛋白质翻译后修饰的重要形式之一,它影响了靶蛋白在细胞内的定位、稳定性和功能,以及相应的细胞周期、分化、凋亡调节、内吞、自噬和损伤后DNA修复等细胞生理活动。综合国内外有关去泛素化酶的研究文献进行分析和总结,重在阐述去泛素化酶的复杂功能。去泛素化酶可与多个靶蛋白相互作用,而细胞内多个其他蛋白又可以修饰或影响同一个去泛素化酶。去泛素化酶之间、去泛素化酶与靶蛋白之间、细胞内其他蛋白与去泛素化酶之间形成了一个复杂的相互作用网络。论文可以为去泛素化酶的功能研究提供参考。

去泛素化酶U SP28结构、功能及靶向抑制剂的研究进展

泛素特异性蛋白酶28(USP28)是去泛素化酶USP家族成员,在真核细胞的细胞周期、细胞凋亡和DNA损伤修复等生命活动中扮演了重要的生理角色。USP28在多种肿瘤中过度表达,是近年来去泛素化蛋白酶家族中新发现的抗肿瘤药物靶标。一些USP28的选择性抑制剂已经显现出潜在的肿瘤靶向治疗前景。本文综述了近年来USP28的结构、功能、抑制剂开发及与重大疾病发生发展关系等方面的研究进展。

去泛素化酶USP1的结构、功能及其抑制剂的研究进展

泛素化是一种维持细胞稳态必不可少的翻译后修饰,通过泛素分子与靶蛋白的连接参与蛋白质功能、定位和转换的调节。去泛素化酶介导的去泛素化为泛素化过程的逆反应,参与泛素的回收、编辑和重排。泛素特异性蛋白酶是最大的去泛素化酶家族,泛素特异性蛋白酶1(USP1)是其中重要的亚型,广泛参与维持基因组完整性、细胞周期和细胞稳态。在多种肿瘤类型中均存在USP1异常表达,因此该靶点受到了广泛关注。目前研发进展最快的小分子USP1抑制剂为KSQ-4279,处于Ⅰ期临床研究阶段;另外ISM3091也已在国内和美国获得新药临床试验批件,即将开展临床试验。该文综述了USP1的结构、调控、生理功能、与肿瘤发生发展的关系以及USP1抑制剂的研究进展。

USP22参与雌激素受体α基因转录调控及其在血管钙化中的作用

目的证实去泛素化酶USP22参与雌激素受体α(ERα)介导的基因转录调控进而在血管钙化中发挥重要作用。方法将人主动脉平滑肌细胞(hASMC)分别接种于正常培养基、含1.25 mmol/L CAL、2.5 mmol/L CAL、5 mmol/L CAL的培养基中培养0、3、7、9天。用1%/2%茜素红染色,倒置相差显微镜观察钙化情况;在5 mmol/L CAL条件下培养0、3、7、9天,Western blot实验检测钙化相关蛋白骨形态发生蛋白2(BMP-2)、核因子κB的受体激活剂配体(RANKL)、环氧合酶2(COX-2)、vitk依赖的分泌性蛋白(Gas6)、ERα的蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测在hASMC中,USP22是否参与ERα介导的基因转录调控;过表达USP22,Western blot实验检测钙化相关因子BMP-2、RANKL、COX-2、Gas6和ERα的蛋白表达。结果在1.25 mmol/L CAL条件下培养到第9天,hASMC有明显的钙沉积;在2.5 mmol/L CAL、5 mmol/L CAL条件下培养到第7天hASMC出现钙沉积,第9天有明显钙沉积。hASMC在5 mmol/L CAL培养条件下,RANKL、BMP-2、USP22蛋白表达增加。双荧光素酶报告基因实验检测结果表明,在hASMC中USP22抑制ERα介导的基因转录调控;Western blot实验结果显示,过表达USP22,ERα的下游基因Gas6蛋白表达减少。结论在5 mmol/L CAL培养的条件下,hASMC钙化模型建立成功;USP22可能通过抑制ERα介导的下游基因Gas6的基因转录进而促进hASMC钙化。

泛素特异性蛋白酶15稳定着色性干皮病F蛋白并促进DNA链间交联损伤修复

着色性干皮病F蛋白(xeroderma pigmentosum group F,XPF)和切除修复交叉互补组1蛋白(excision repair cross complementing group 1,ERCC1)组成一种结构特异性的核酸内切酶(XPFERCC1)复合物,参与DNA链间交联(interstrand crosslink,ICL)损伤修复。其中,XPF蛋白的去泛素化修饰对DNA损伤修复的影响尚未见报道。本工作主要研究泛素特异性蛋白酶15 (ubiquitinspecific protease 15,USP15)对XPF的稳定性及ICL修复的影响。本研究通过蛋白质质谱和Western印迹法分析发现,XPF蛋白与USP15存在相互作用,进而使XPF蛋白去泛素化修饰;采用CRISPR-Cas9技术构建USP15基因敲除的He La细胞株(USP15 KO)并进行Western印迹分析,结果显示,敲除组XPF蛋白水平低于对照组(P<0. 001)。克隆形成试验显示,在ICL诱导剂顺铂(cisplatin,DDP)和丝裂霉素C (mitomycin,MMC)的作用下,USP15基因敲除的HeLa细胞增殖能力显著降低(P<0. 01)。本研究表明,去泛素化酶USP15是一种重要的DNA修复调节因子,该酶通过稳定XPF蛋白促进由XPF-ERCC1介导的ICL修复。本研究为改善ICL诱导剂类抗癌药物的耐药性提供了理论依据,并为肿瘤的治疗提供了潜在的新靶点。

PSMD14在胰腺癌中的表达分析及对胰腺癌细胞增殖的影响

目的探讨蛋白酶体26S亚基非ATP酶14(PSMD14)在胰腺癌中的表达及其与患者预后的关系,并分析其对胰腺癌细胞增殖的影响和潜在机制。方法用基因表达谱交互分析工具(GEPIA2)分析PSMD14信使RNA(mRNA)在胰腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系,并用Western blot(WB)进一步检测PSMD14蛋白在胰腺癌组织和配对癌旁正常组织中的表达情况。对PSMD14表达可能参与调控的生物学过程进行基因富集分析。用PSMD14小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA转染胰腺癌细胞系PANC-1和BxPC-3细胞,WB检测转染效率。通过CCK-8试验检测PSMD14对细胞增殖的影响。通过葡萄糖摄取试验和乳酸生成试验检测PSMD14对细胞糖酵解的影响。通过相关性分析挖掘PSMD14可能调控的糖酵解关键酶,并用WB和反转录-实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)进行实验验证。结果TCGA数据分析显示:PSMD14 mRNA在胰腺癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05),其高表达与患者预后不良有关(P<0.05)。与配对的癌旁正常组织相比,PSMD14蛋白在胰腺癌组织中表达水平升高(P<0.05)。基因富集分析提示PSMD14可能参与调控胰腺癌的细胞增殖。与阴性对照siRNA相比,PSMD14 siRNA降低了PANC-1和BxPC-3细胞中的PSMD14蛋白表达水平(P<0.05)。干扰PSMD14表达能显著抑制细胞增殖、葡萄糖摄取和乳酸生成(P<0.05)。PSMD14 mRNA表达与己糖激酶(HK2)、磷酸果糖激酶(PFKL)、丙酮酸激酶2(PKM2)mRNA表达呈正相关(r=0.30、0.25、0.41,P<0.05)。WB证实干扰PSMD14表达只降低PKM2蛋白表达水平(P<0.05),不影响HK2和PFKL蛋白表达(P>0.05),并且RT-qPCR结果显示:干扰PSMD14表达不影响PKM2 mRNA表达水平(P>0.05)。结论PSMD14在胰腺癌组织中高表达,其高表达与患者预后不良有关。PSMD14有促进胰腺癌细胞糖酵解和细胞增殖的作用,这可能与其增强PKM2蛋白的表达有关。