去甲二氢愈创木酸诱导体外恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的:观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiareticacid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞凋亡的影响,并探讨其发生的可能机理。方法:采用MTT(methythiazolyltetrazolium)法检测细胞增殖抑制的情况,利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测体外培养细胞的凋亡情况,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:①一定浓度(100μmol/L)的NDGA处理SHG-44细胞不同时间后,在NDGA抑制细胞增殖的同时,也可诱导此细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;②免疫组化染色结果表明,一定浓度的NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞凋亡的发生呈负相关;③原位杂交结果显示,NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论:NDGA可诱导SHG-44细胞的凋亡,这种作用可能与其下调bcl-2基因的表达有关,确切机制有待进一步深入研究。

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的 观察去甲二氢愈创木酸 (nordihydroguaiareticacid ,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG 5体内外生长的影响。方法 采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG 5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况。结果 NDGA可显著抑制CHG 5细胞体外增殖 ,G0 G1 期细胞明显增多 ,S、G2 M期细胞减少 ,凋亡细胞增加。采用接种后第 5天按 5 0mg kg腹腔内注射给药 ,治疗组移植瘤体积较对照组缩小 ,未见明显的毒副作用。结论 NDGA对CHG 5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用 。

去甲二氢愈创木酸对VEGF及其受体KDR基因表达影响的研究

目的 探讨去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对血管生成因子 (VEGF)及其相应受体KDR基因表达状况的影响及其意义。方法 采用免疫组化、原位杂交及图像分析等技术方法观测NDGA作用下人恶性胶质瘤细胞系SHG 44细胞VEGF基因、人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4细胞VEGF的相应受体KDR基因表达的变化。结果 ① 1 0 0 μmol/L的NDGA处理胶质瘤细胞 1～ 3d ,引起VEGF蛋白及mRNA表达水平的降低 ;② 1 0 0 μmol/L的NDGA处理内皮细胞 1～ 3d ,受体KDR的蛋白表达也呈下降趋势 ,且KDR基因表达的降低较胶质瘤细胞VEGF的降低更为明显。结论 NDGA对胶质瘤细胞VEGF的表达有抑制作用 ,NDGA也抑制了内皮细胞KDR的表达 。

去甲二氢愈创木酸对胶质瘤诱导的血管内皮细胞成型的作用

目的 观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞成型的影响并初步探讨其机理。 方法 采用在 型胶原凝胶上的细胞立体培养和内皮 -胶质瘤细胞的联合培养法 ,观测人恶性胶质瘤细胞系SHG- 44细胞或其条件培养基对人脐静脉内皮细胞系 ECV- 30 4细胞形成管腔样结构的影响 ,同时以免疫组织化学结合图像分析的方法检测 SHG- 44细胞 VEGF、b FGF蛋白的表达。 结果 10 0 μmol/ L 的 NDGA作用 1～ 3d后 ,SHG- 44细胞 VEGF、b FGF的表达明显降低。联合培养 3d左右 ,胶质瘤 SHG- 44细胞及其条件培养基均能诱导内皮细胞在 型胶原凝胶上拉长并形成管腔样结构 ;而 10 0 μm ol/ L 的 NDGA可明显抑制内皮细胞变长和管腔样结构的形成 (P<0 .0 1)。 结论 NDGA对胶质瘤细胞诱导的血管成型有抑制作用 ,此作用可能与瘤细胞 VEGF、b FGF表达减低有关 ,提示

bcl-2、c-myc基因表达在去甲二氢愈创木酸诱导人恶性胶质瘤细胞凋亡中的意义

目的 观察bcl 2、c myc在去甲二氢愈创木酸 (NDGA)诱导恶性胶质瘤细胞系SHG 44细胞凋亡中的变化及意义。方法 利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测培养细胞凋亡的情况 ,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测bcl 2、c myc基因mRNA和蛋白的表达水平。结果 ①一定浓度的NDGA处理SHG 44细胞 1 2～ 96h ,均可诱导SHG 44细胞发生凋亡 ,且随着作用时间的延长 ,凋亡细胞数增加越明显 ;②经NDGA处理细胞后 ,出现SHG 44细胞bcl 2、c myc蛋白表达水平降低 ,且随着作用时间的延长 ,这种趋势更加明显 ,与细胞凋亡的发生密切相关 ;③原位杂交结果显示 ,NDGA处理细胞不同时间后 ,出现SHG 44细胞bcl 2、c myc基因mRNA的表达水平降低 ,结果与免疫组化检测一致。结论 NDGA诱导SHG 44细胞的凋亡可能与其下调bcl 2、c myc基因的表达有关 。

去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究

目的 观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对在体血管生成的影响。方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)试验 ,检测NDGA对血管生成的影响。结果 2 .5× 1 0 -6mmol以上量的NDGA均对血管生成有抑制作用 ,在实验剂量 ( 0 .5～ 5 0 )× 1 0 -6mmol范围内 ,随给药量的增加 ,其抑制作用愈加明显。采用Bouin’s液原位固定后取膜、DAB染色、普通显微镜下观察或用图像分析方法可使结果更具可信性与可比性。结论 NDGA可抑制血管生成 。

高效液相色谱法测定去甲二氢愈创木酸的含量及其有关物质

目的建立测定去甲二氢愈创木酸(NDGA)含量和检查有关物质的HPLC方法。方法采用ZorbaxSB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),检测波长为282nm。含量测定以三氟醋酸-水-乙腈(0.05:45:55,pH3.5)为流动相,有关物质检查采用梯度洗脱,以三氟醋酸-水(0.05:100)为流动相A,三氟醋酸-乙腈(0.05:100)为流动相B,洗脱梯度:0～15min,流动相B的比例为40%～70%,15～30min,流动相B的比例为70%。结果NDGA浓度为5.0～100.0μg/ml时,峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=0.9999),检测限为1.2ng(S/n=3),含量测定重复性试验RSD为0.54%(n=6)。有关物质检查重复性试验RSD1.8%(n=6)。结论本法简便、准确、快速、灵敏,可用于NDGA的质量控制。

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞基因组甲基化水平的影响及其意义

目的 探讨去甲二氢愈创木酸 (NDGA)诱导人恶性胶质瘤细胞系SHG 44细胞分化过程中基因组甲基化状态改变及其意义。方法 合成甲基化敏感性AP PCR引物 ,用AP PCR方法检测SHG 44细胞基因组甲基化状态 ,观察NDGA诱导该细胞分化过程中甲基化水平的变化。结果 对照组基因组DNA经MspⅠ酶解后AP PCR扩增片段比HpaⅡ酶解后的扩增片段小 ,几乎未见存留大片段 ,至少有 3个片段与HpaⅡ酶解片段不同。同一时相点HpaⅡ酶解后扩增产物相比 ,NDGA处理后基因组DNAMspⅠ酶解后的扩增产物量较少、条带较多 ,且随时相点延长产物量逐渐增加 ,条带增多。结论 NDGA诱导人恶性胶质瘤细胞系SHG 44细胞分化过程中基因组甲基化状态增高 。

去甲二氢愈创木酸对大鼠卵巢功能的影响

目的 探讨血管生成抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiareticacid ,NDGA)对有规律动情周期大鼠卵巢功能的影响。方法 将有规律动情周期的雌性大鼠按不同的动情阶段随机分为NDGA组(N)和PBS组(P) ,隔日皮下注射16d ,观察给药前后血清雌二醇(E2 )、孕酮(P)、FSH和LH水平和给药后的交配情况及子宫和卵巢的形态学变化。结果 NDGA各组大鼠在给药后皆不能成功交配。免疫组化染色显示NDGA能显著抑制子宫内膜基质细胞增殖,减少内膜腺体数目,抑制腺上皮细胞增殖,抑制内膜血管增殖和减少微血管密度(MVD) (P <0 0 1)。卵巢有成熟的黄体,但数目和面积比对照组显著减少,闭锁卵泡明显增多(P <0 0 1)。血清E2 显著降低,P在动情期和动情后期呈反向变化(P <0 0 1) ,FSH在动情期和动情后期明显升高(P <0 0 5 ) ,LH值与给药前比较没有统计学差异(P >0 0 5 )。结论 长时间使用NDGA可以引起大鼠的卵巢功能紊乱。

去甲二氢愈创木酸对内皮细胞影响的形态学观察

目的 探讨去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对内皮细胞形态的影响及特点。方法 采用倒置显微镜、光镜、电镜和流式细胞仪观察分析不同浓度NDGA作用下人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4细胞形态和细胞凋亡峰的变化。结果 ①不同浓度 ( 5 0～ 2 0 0μmol/L)的NDGA处理ECV 30 4细胞 2 4～ 72h后或一定浓度 ( 1 0 0 μmol/L)的NDGA处理ECV 30 4细胞不同时间 ( 1～ 7d)后 ,内皮细胞由多角形变长 ,呈梭形 ,细胞稀疏 ,核分裂像明显减少 ,显示细胞增殖的抑制 ,上述变化与NDGA的浓度和作用时间有关 ;②NDGA处理后 ,部分细胞呈现出凋亡样形态学改变 ,以 48h为明显。流式细胞仪检测也出现明显高于对照的凋亡峰即亚G0 峰 ,1 2h时相点最高 ( 2 0 .42 % )。此外 ,处理后的细胞也有变性、坏死等病理变化 ,与NDGA的浓度呈正比。结论 NDGA对内皮细胞的生长和增殖有抑制 ,形态学初步证明也有诱导凋亡等作用 。

5-氟尿嘧啶、长春新碱与去甲二氢愈创木酸配伍对人恶性胶质瘤细胞株的作用

目的 观察体外应用去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）、予氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）、长春新碱（ＶＣＲ）三种药物单用或合用对人恶性胶质瘤细胞系 ＳＨＧ－４４细胞的作用，并探讨其作用的可能机制。方法用 ＭＴＴ法检测药物作用效应，用免疫组化染色法检测细胞 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的蛋白表达情况。结果 （１）三种药物单用及两药合用时随着药物浓度的增加其抗肿瘤效应也增加，且两药合用时药物的效应增强；（２）先给ＮＤＧＡ ２４ｈ后再给 ５－Ｆｕ或 ＶＣＲ，与同时给药对该细胞的抗肿瘤效应无显著差异（Ｐ＞０．０５），而先给 ５－Ｆｕ或 ＶＣＲ ２４ｈ后再给 ＮＤＧＡ，与同时给药对细胞的抗肿瘤效应有显著差异（Ｐ＜０．０５）；（３）免疫组化染色结果表明，与对照组相比，ＮＤＧＡ处理后该细胞 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的蛋白表达明显降低。结论 ＮＤＧＡ与 ５Ｆｕ或 ＶＣＲ间有协同作用，且这种作用可能与 ＮＤＧＡ降低细胞 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的蛋白表达有关。

去甲二氢愈创木酸抗肿瘤作用的研究

去甲二氢愈创木酸(NDGA)是一种从植物中提取的天然药物成分,是脂氧化酶的强抑制剂,一度作为抗氧化剂,以防止食物腐败。近来发现去甲二氢愈创木酸有抗肿瘤的作用,能抑制肿瘤细胞的增殖并诱导凋亡,本文就去甲二氢愈创木酸抗肿瘤的作用及机制做一综述。

CDK4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 4(CDK4)在去甲二氢愈创木酸 (NDGA)抑制人恶性胶质瘤细胞系SHG 44细胞增殖中的作用。方法 采用细胞培养、细胞计数、流式细胞仪检测、免疫沉淀、免疫组化及图像分析等技术方法。结果 ①在1 0～ 2 0 0 μmol/L浓度范围内 ,NDGA可使SHG 44细胞增殖受阻 ,且NDGA液浓度越高 ,这种作用越明显 ,即呈明显的剂量依赖性 ;②NDGA对细胞周期抑制作用主要表现于G1→S期 ;③NDGA处理后 ,SHG 44细胞CDK4蛋白激酶的活性降低 ,且这种作用与NDGA的处理浓度呈正相关 ,与NDGA对SHG 44细胞的增殖抑制作用相一致 ;④NDGA处理后 ,SHG 44细胞CDK4基因的蛋白表达明显减弱。结论 CDK4蛋白激酶活性降低在NDGA抑制SHG

meso-去甲二氢愈创木酸和Machilin A的合成

报道了一条合成内消旋去甲二氢愈创木酸(meso-NDGA)和Machilin A的新路线.此路线通过两次Stobbe缩合构建木脂素结构骨架,经官能团转换,合成了meso-NDGA和Machilin A.该路线操作简便、实用性强.

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（Nordihydrognaiareticacid，NDGA）对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用。方法：采用光镜和电镜观察移植瘤细胞的形态变化；用流式细胞仪进行细胞周期分析；用免疫组化检测肿瘤细胞中GFAP、PCNA的蛋白表达情况。结果：①NDGA可明显降低裸鼠移植瘤的成瘤率；②NDGA能抑制移植瘤细胞的生长和诱导其分化，使细胞增殖受阻于G1→S期。结论：NDGA在体内与体外有相同的抗胶质瘤作用。

Bcl-2在去甲二氢愈创木酸诱导恶性胶质瘤细胞凋亡中的变化

观察 bcl- 2在去甲二氢愈创木酸 (NDGA )诱导恶性胶质瘤细胞系 SHG- 44细胞凋亡中的变化。利用光镜和电镜观察及 TUNEL法检测培养细胞凋亡的情况 ,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测 bcl- 2基因 m RNA和蛋白的表达水平。结果显示 :1一定浓度的 NDGA处理 SHG- 44细胞 12～ 96 h,均可诱导 SHG- 44细胞发生凋亡 ,且随着作用时间的延长 ,凋亡细胞数增加越明显 ;2免疫组织化学方法结果显示 ,NDGA处理细胞后 ,出现 SHG- 44细胞 bcl- 2蛋白表达水平降低 ,且随着作用时间的延长 ,这种趋势更加明显 ,与细胞凋亡的发生密切相关 ;3原位杂交结果显示 ,NDGA处理细胞不同时间后 ,出现 SHG- 44细胞 bcl- 2基因 m RNA的表达水平降低 ,结果与免疫组织化学方法检测结果一致。上述结果表明 ,NDGA诱导 SHG- 44细胞凋亡过程中 ,bcl- 2基因的表达降低 。

应用AP-PCR法分析去甲二氢愈创木酸对胶质瘤细胞基因组甲基化状态的影响

背景与目的 :应用甲基化敏感性AP_PCR法探讨去甲二氢愈创木酸(NDGA)诱导人恶性胶质瘤细胞系SHG -44细胞分化过程中基因组甲基化状态改变。材料与方法 :用甲基化敏感性AP_PCR方法检测SHG -44细胞基因组甲基化状态。结果 :经NDGA处理后 ,胶质瘤细胞基因组甲基化水平增高。 结论

去甲二氢愈创木酸治疗子宫内膜异位症的实验研究

目的探讨血管生成抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihyd roguaiaretic acid,NDGA)对子宫内膜异位症巴马香猪动物模型的影响。方法采用建模成功的巴马香猪6头,分为实验组NDGA组4头和对照组PBS组2头,实验组隔日皮下注射NDGA和对照组给予等体积的PBS溶液,连续给药20d。观察给药前、后血清激素水平和异位内膜包块的变化情况,以及FⅧRAg和VEGF的表达情况。结果NDGA组血清E2显著降低(P<0.05)。NDGA组异位内膜包块不同程度的缩小,甚至少部分消失;PBS组包块无明显变化,部分略有增大。NDGA能显著抑制子宫内膜腺体数目减少,间质紧密;PBS组子宫腺体数目多,间质疏松。NDGA组减少微血管密度(MVD)的数目和VEGF的弱表达(P<0.05);PBS组微血管密度(MVD)的数目多和VEGF的强表达(P<0.05)。结论NDGA组种植的异位灶缩小甚至部分消失。

去甲二氢愈创木酸对SHG-44胶质瘤细胞GFAP基因表达的影响

目的 探讨去甲二氢愈创木酸 (NDGA)诱导恶性胶质瘤细胞分化过程中对GFAP基因表达的影响及其意义。方法 用免疫组织化学和原位杂交方法定性、定量检测人恶性胶质瘤细胞系SHG 44细胞GFAP基因的表达水平。结果 NDGA处理后 ,瘤细胞GFAP蛋白及mRNA表达水平明显增高 (P <0 .0 1 )。结论 NDGA具有诱导恶性胶质瘤细胞GFAP基因表达的作用 。

去甲二氢愈创木二酸对乳腺癌细胞系ERα和ERβ mRNA表达水平的调节及对增殖的影响

目的探讨植物雌激素木质素类物质去甲二氢愈创木二酸(NDGA)对乳腺癌细胞系MCF-7中雌激素受体(ER)α、ERβmRNA的调节作用,及对其增殖的影响,探讨木脂素类植物雌激素是否通过选择性ER调节剂的机制起作用。方法培养乳腺癌细胞系MCF-7,用不同浓度NDGA处理细胞系3 d后,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察不同剂量NDGA对两种ER亚型表达的影响。结果NDGA中等、较大剂量时对MCF-7细胞系的增殖有明显抑制作用。实时荧光定量PCR结果表明NDGA处理细胞系3 d后ERα表达先下降后上升,ERβ表达渐上升。结论木脂素类植物雌激素NDGA明显抑制乳腺癌细胞系MCF-7的增殖,且能够改变其ER不同亚型的表达,ER表达趋势改变提示NDGA具有ER调节剂的作用。