去甲基化转移酶ALKBH5抑制新城疫病毒复制

为探究去甲基化转移酶ALKBH5对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)复制的影响,本研究通过构建慢病毒干扰细胞系和转染过表达质粒改变DF-1细胞中ALKBH5的表达量,采用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和半数组织培养感染剂量方法检测细胞感染NDV NA-1毒株后病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)基因转录、翻译和病毒粒子释放水平,并用荧光定量PCR筛选ALKBH5下游免疫因子相关靶基因。结果表明,沉默ALKBH5使NDV NP基因转录、翻译和病毒粒子释放水平明显上升;过表达ALKBH5抑制NP基因转录、翻译和病毒粒子释放;沉默ALKBH5使IL-10、IRF1等基因转录水平明显上升而抑制MDA5、IFN-β等基因的转录。结果证实,ALKBH5可能通过影响抗病毒天然免疫通路中IL-10、MDA5等相关免疫分子而负调控NDV的复制。

KDM5B基因在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌耐药能力的影响

目的:检测组蛋白去甲基化转移酶KDM5B(JARID1B/PLU-1)在正常卵巢、卵巢癌组织及细胞株中的表达,以及其对卵巢癌细胞株耐药能力的影响。方法:RT-q PCR法检测KDM5B在36例卵巢癌、15例正常卵巢、6例术后化疗耐药复发患者组织及卵巢上皮细胞株IOSE和5株卵巢癌细胞中的表达情况;构建p MSCVpuro-KDM5B过表达质粒和p GIPZ-sh1、p GIPZ-sh2干扰质粒,并筛选得到稳定过表达的SKOV3和稳定干扰的Caov3细胞株,RT-q PCR和Western blot法鉴定调控效果;用浓度梯度递增的顺铂处理SKOV3过表达和Caov3干扰细胞株,CCK-8法检测顺铂半抑制浓度(IC50)变化。结果:RTq PCR结果示,正常卵巢组织中KDM5B相对表达量(1.950±0.3003)低于卵巢癌组织(4.924±0.2989),差异有统计学意义(t=5.909,P<0.0001)。KDM5B表达量与卵巢癌患者的FIGO分期、病理分级、转移和耐药发生明显相关,与患者年龄、CA125水平不相关。6例复发患者中,5例KDM5B表达明显升高(P<0.001)。KDM5B的mRNA和蛋白水平在卵巢上皮性细胞株IOSE中最低,在卵巢癌细胞株SKOV3、HO-8910、ES-2、A2780、Caov3中表达逐渐增加。RT-q PCR结果示,SKOV3过表达组的KDM5B表达量为对照组的27.4倍,Caov3干扰sh1和sh2组分别为对照组的0.38和0.41倍,Western blot也显示过表达和干扰有效。用浓度梯度递增的顺铂处理Caov3细胞株,KDM5B表达量随顺铂浓度增加而逐渐升高;检测SKOV3细胞株KDM5B过表达组IC50为3.666(95%CI为3.067~4.382)μg/ml高于对照组[1.676(95%CI为1.553~1.810)μg/ml],Caov3细胞株干扰sh1组和sh2组分别为3.359(95%CI为2.875~3.925)μg/ml、2.881(95%CI为2.49~3.324)μg/ml,均低于对照组[6.972(95%CI为6.182~7.864)]。结论:组蛋白去甲基化转移酶KDM5B在卵巢癌中表达升高,并且具有促进卵巢癌细胞株耐药的作用。

食管癌患者血清miR-194水平及癌组织中KDM5B表达水平与食管癌临床病理特征的关系

目的探讨组蛋白去甲基化转移酶(KDM5B)、miR-194在食管癌患者中表达水平及与食管癌临床病理特征的关系,以期为临床诊治提供参考。方法选取2020年1—6月在安阳市肿瘤医院接受手术治疗的96例食管鳞癌患者作为观察组,通过手术取得食管癌患者的癌组织和距离癌组织3 cm以上的癌旁组织。另外选取40例健康人作为对照组。采用免疫组化法检测KDM5B在食管癌组织、癌旁组织中的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测观察组和对照组研究对象血清miR-194水平;采用多因素Cox回归分析影响食管癌患者预后的危险因素。结果食管癌组织的KDM5B阳性表达率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ~2=9.632,P=0.007);对照组研究对象血清miR-194水平明显低于观察组,差异有统计学意义(Z=14.306,P<0.001)。临床分期为Ⅲ期、浸润深度为T3~T4、有淋巴结转移的食管癌患者KDM5B阳性表达率、miR-194表达水平高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度为Tis~T2、无淋巴结转移的食管癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。随访2年后,共有40例患者存活,存活率为41.67%(40/96)。KDM5B阳性表达患者的2年生存率(32.31%,21/65)低于KDM5B阴性表达患者(61.29%,19/31),差异有统计学意义(P<0.05)。miR-194高表达组患者的2年生存率(31.25%,15/48)低于miR-194低表达组患者(52.08%,25/48),差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度为Tis~T2、无淋巴结转移、KDM5B阴性表达、miR-194低表达的食管癌患者2年生存率高于临床分期为Ⅲ期、浸润深度为T3~T4、有淋巴结转移、KDM5B阳性表达、miR-194高表达的食管癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。浸润深度为T3~T4、有淋巴结转移、KDM5B阳性表达、miR-194高表达是食管癌患者2年生存率的危险因素(P<0.05)。结论KDM5B、miR-194表达水平与食管癌患者的临床分期、浸润深度、是否有淋巴结转移密切相关,且KDM5B阳性表达、miR-194高表达是影响患者预后的危险因素,可以作为临床诊治食管癌的生物标志物。

m6A修饰在人类相关致病病毒中的作用与研究进展

N6-腺苷酸甲基化(N6-methyladenosine,m6A)修饰是真核生物中最为常见的信使RNA(messenger RNA,mRNA)转录后修饰方式,主要受甲基化转移酶(methyltransferases)、去甲基化转移酶(demethylases)以及特异性结合蛋白(m6A-binding proteins)共同调控。m6A修饰参与RNA生命周期的各个阶段,从RNA加工、出核、翻译到RNA降解。近期有研究显示,m6A修饰的异常发生不仅能够导致肿瘤的发生,也会影响致病病毒的复制及相关重要基因的表达,表明m6A修饰在致病病毒的复制及其致病过程中扮演重要角色。本文主要阐述m6A修饰在人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(Human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)、甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)、卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)、寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)以及猴空泡病毒40(Simian vacuolating virus 40 or Simian virus 40,SV40)这八种病毒的复制及感染宿主过程中的作用与分子机制,为病毒性传染病的防治提供新的参考。