去甲斑蝥素促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株凋亡的作用机制分析

目的:探讨去甲斑蝥素对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株凋亡的影响,并初步分析其可能的作用机制。方法:将SK-N-SH细胞分为空白对照组及去甲斑蝥素50、100、500μg/L组。观察各组SK-N-SH细胞形态学变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,试剂盒检测氧化损伤指标水平,RT-PCR检测凋亡相关基因表达,Western Blot检测凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:与空白对照组比较,干预48 h后,去甲斑蝥素各给药组细胞形态皱缩,细胞贴壁能力较弱,细胞数量较少,细胞内颗粒较多;除去甲斑蝥素低浓度组细胞活力在16 h差异无统计学意义(P>0.05)外,作用16、24、48 h去甲斑蝥素各浓度组SK-N-SH细胞活力显著降低(P<0.05);作用24 h,去甲斑蝥素各浓度组细胞早期凋亡率及ROS、MDA显著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白表达显著升高,p-PI3Kp85、p-Akt、p-mTOR、p-4E-BP1蛋白表达显著降低(P<0.05),去甲斑蝥素的作用呈浓度依赖性。结论:去甲斑蝥素可促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株凋亡,且其作用呈浓度依赖性,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

去甲斑蝥素抗肿瘤作用机制与联合治疗潜力

目的 对去甲斑蝥素的药理作用机制及临床联用进行系统阐述,并对开发去甲斑蝥素新型给药系统进行展望,为去甲斑蝥素进一步深入研究和临床应用奠定基础。方法 查阅国内外相关文献,对去甲斑蝥素的药理作用机制和临床联合用药情况进行分析和归纳总结。结果 去甲斑蝥素既可以通过单药多靶点机制实现抗肿瘤作用,还具有升高白细胞和调节机体免疫平衡的功能;去甲斑蝥素在临床上可以与化疗药物、免疫药物、靶向药物或放射疗法等联用,实现协同抗癌作用;去甲斑蝥素有望开发出脂肪乳注射液、乳化体和脂质体-乳剂复合体等高靶向、缓控释、低毒性和不良反应少的新型改良系统。结论 去甲斑蝥素临床联用具有广阔的应用前景,有待进一步深入研究。

去甲斑蝥素干预Wnt/β-catenin信号通路诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的:讨论去甲斑蝥素对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,将浓度为52μmol/L去甲斑蝥素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后,将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、去甲斑蝥素组(52μmol/L),等待卵巢癌细胞贴壁药物作用6 h后,在倒置显微镜下观察卵巢癌SKOV3细胞的形态学变化,荧光显微镜观察细胞核的变化;药物作用24 h后,采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化情况,采用Western blot法检测药物作用后对卵巢癌SKOV3细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin表达水平的影响。结果:与对照组比较,去甲斑蝥素抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,降低线粒体膜电位,诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡,升高Bax的表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达水平,降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的表达水平。结论:去甲斑蝥素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

去甲斑蝥素调节Hippo/YAP信号通路对U251胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究去甲斑蝥素(NCTD)对U251胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响及分子机制。方法 用不同浓度的NCTD处理U251细胞后,MTT法检测NCTD对U251细胞的细胞毒性。体外培养U251细胞,分为正常对照(NC)组、MST1/2抑制剂XMU-MP-1组(5μmol/L)、25μmol/L NCTD组、50μmol/L NCTD组、100μmol/L NCTD组、NCTD+XMU-MP-1组(100μmol/L NCTD+5μmol/L XMU-MP-1)。给予相应的干预后,细胞克隆形成实验检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测Hippo/Yes相关蛋白(YAP)和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白[哺乳动物Ste-20样激酶(MST)1/2、p-MST1/2、大型肿瘤抑制因子(LATS)1/2、p-LATS1/2、YAP、p-YAP、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、β-catenin]的表达。结果 与NC组相比,25、50、100、200μmol/L NCTD处理组U251细胞活力降低(P<0.05)。与NC组相比,25、50、100μmol/L的NCTD可抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭,并促进U251细胞凋亡(P均<0.05);Western blot结果显示,NCTD可上调U251细胞中p-LATS1/2、p-MST1/2、p-YAP和GSK-3β蛋白表达,抑制p-GSK-3β和胞核YAP的表达,降低β-catenin在细胞核中的积累(P<0.05);且XMU-MP-1可减弱NCTD对YAP和β-catenin核易位的抑制作用(P<0.05)。结论 NCTD可抑制U251胶质瘤细胞的恶性生物学行为,其作用机制可能与激活Hippo信号通路,抑制YAP的核易位,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

去甲斑蝥素通过诱导自噬体聚集促使乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

探究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、cleaved-PARP/PARP、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和MCL-1表达水平的影响;采用Western blot实验检测NCTD对MDA-MB-231细胞中自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I,Parkin和PINK1表达水平的影响;采用流式细胞术检测NCTD对MDA-MB-231细胞线粒体膜电位及线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)变化情况的影响;采用共聚焦显微镜检测NCTD对表达mCherry-EGFP-LC3的MDA-MB-231细胞自噬流的影响;采用流式细胞术检测NCTD联合使用氯喹(chloroquine,CQ)或3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)后,对MDA-MB-231细胞凋亡情况的影响。实验结果显示,NCTD可显著上调Bax/Bcl-2、cleaved-PARP/PARP、cleaved-caspase-9、cleavedcaspase-3以及LC3-II/LC3-I蛋白的表达水平,促进Parkin的线粒体易位,阻断自噬流。此外,NCTD联合使用CQ加剧了细胞凋亡,而NCTD联合使用3-MA则减少了细胞凋亡。研究结果表明,NCTD可以诱导自噬体积累并导致MDA-MB-231细胞凋亡。

基于反向分子对接网络药理学探讨去甲斑蝥素治疗肝癌机制

目的:基于反向分子对接网络药理学探讨去甲斑蝥素(NCTD)治疗肝癌(HCC)的关键靶点及作用机制。方法:在ZINC数据库检索“Norcantharidin”获得化合物结构,PharmMapper反向对接预测靶点;Drugbank、OMIM、GeneCards数据库获得肝癌靶点;绘制韦恩图获取交集基因;凭借STRING平台分析NCTD治疗肝癌的靶点,利用Cytoscape 3.7.1可视化构建“成分—靶点—疾病”网络图,经Network Analyzer分析靶点网络拓扑参数提取关键靶点,利用MCODE插件进行模块分析;David做富集分析,并构建“成分疾病—靶点—通路”网络筛出关键基因。结果:获得交集靶点101个,103个分子功能和144条KEGG通路。结论:核心靶点有IGF1、AKT1、HRAS、EGFR、MAPK1,核心通路有癌症通路、PI3K-Akt信号通路、癌症中蛋白聚糖通路、MAPK信号通路、Ras信号通路、前列腺癌通路、化学致癌受体激活通路、肝细胞癌通路。NCTD通过多靶点、通路联合治疗肝癌。

去甲斑蝥素在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是我国最常见的女性恶性肿瘤。传统中药及其提取物因具有单药多靶点、低毒的特点,成为乳腺癌治疗的研究热点。去甲斑蝥素是一种新型人工合成抗肿瘤药物,具有升白细胞、抗肿瘤的作用。其抗肿瘤作用机制包括抗血管生成,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖、侵袭与转移等。以斑蝥为主要来源的中成药在乳腺癌的临床应用中贯穿全程。本文就近年来去甲斑蝥素在乳腺癌中的研究进展进行综述。

大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷联合去甲斑蝥素体内外抗肿瘤作用及其机制

目的探究大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(EG)与去甲斑蝥素(NCTD)联用的抗肿瘤作用及机制。方法①EG和NCTD与人肝癌HepG2细胞和人肺癌A549细胞作用48 h。给药方案:EG和NCTD分别单用(终浓度均为60~960μmol·L-1)、同时联用(EG+NCTD,1∶1同时给药,终浓度分别为30~480μmol·L-1)、序贯联用方案Ⅰ(EG→NCTD,EG作用24 h后除去EG,加入NCTD继续作用24 h,终浓度均为60~960μmol·L-1)和序贯联用方案Ⅱ(NCTD→EG,NCTD作用24 h后除去NCTD,加入EG继续作用24 h,终浓度均为60~960μmol·L-1)。MTT法检测细胞存活率,并计算相应的联合指数(CI)值,判断药物联合作用效应。随后利用反向找靶技术并构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络筛选两药联用潜在的关键靶点。流式细胞术分析EG和NCTD单用及NCTD→EG序贯联用对HepG2和A549细胞凋亡的影响,Western印迹法检测胱天蛋白酶3(CASP3)和活化CASP3蛋白表达。②建立肝癌H22移植瘤小鼠模型,设模型对照(给予PBS)、5-氟脲嘧啶(5-Fu)阳性对照(30 mg·kg^(-1))、EG单用(4 mg·kg^(-1))、NCTD单用(4 mg·kg^(-1))、两药同时联用(EG+NCTD,各2 mg·kg^(-1))及序贯联用(NCTD→EG,NCTD 4 mg·kg^(-1)6 d,EG 4 mg·kg^(-1)6 d)组,均ip给药,每天1次,共12 d。末次给药后24 h小鼠称重后处死,剥离移植瘤组织称重,计算肿瘤抑制率。结果①EG和NCTD单用、同时联用及2种方案序贯联用均呈浓度依赖性抑制HepG2和A549细胞存活(P<0.01),在一定浓度范围内具有协同作用。EG和NCTD单用及同时联用三者比较,NCTD单用IC50最低,同时联用未表现出更好的作用。与两者单用比较,NCTD→EG序贯联用IC50最低。基于反向找靶及PPI分析筛选出关键靶点CASP3,表明两药联用可能涉及细胞凋亡通路。流式细胞术和Western印迹实验结果表明,与EG和NCTD单用组相比,NCTD→EG序贯联用明显增加HepG2和A549细胞凋亡率(P<0.01),且活化CASP3蛋白表达增加(P<0.01),而CASP3蛋白表达无明显变化。②肝癌H22移植瘤模型小鼠体内实验结果表明,与模型对照组相比,NCTD单用、同时联用、NCTD→EG序贯联用和5-Fu阳性对照组瘤重均显著降低(P<0.05),抑瘤率分别为42.4%,47.8%,50.4%和69.0%;EG单用抑瘤作用不明显。同时联用组小鼠体重较模型对照组升高(P<0.05),5-Fu组显著降低(P<0.01)。结论EG与NCTD联用具有协同抗肿瘤作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

去甲斑蝥素片辅助ERCP治疗食管癌的应用研究

目的观察去甲斑蝥素片辅助内镜逆行胰胆管造影术(retrograde cholangiopancreatography,ERCP)治疗食管癌对术后胆道感染的防治效果。方法本文为前瞻性研究。选取2021年5月至2022年12月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的115例食管癌患者为研究对象,采用电脑随机分组法将入组患者分为对照组(57例)和观察组(58例)。对照组男34例、女23例,年龄(61.22±5.32)岁,采用ERCP治疗;观察组男35例、女23例,年龄(60.45±5.17)岁,采用去甲斑蝥素片辅助ERCP治疗。对比两组患者炎症因子、免疫功能指标、血清肿瘤标志物水平及术后不良事件发生情况。采用t检验、χ^(2)检验。结果治疗前,两组患者炎症因子、免疫功能指标及血清肿瘤标志物水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗后,观察组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)[(3.52±0.46)ng/L]、白细胞介素-6(IL-6)[(135.45±10.69)ng/L]、IL-8[(15.22±5.24)μg/L]均低于对照组[(4.79±1.24)ng/L、(140.77±10.88)ng/L、(18.44±5.27)μg/L],差异均有统计学意义(t=7.306、2.645、3.286,均P<0.05)。治疗后,观察组总T细胞(CD3)[(65.29±10.76)%]、干扰素-γ(IFN-γ)[(10.21±3.44)ng/L]、IL-12[(61.25±10.71)μg/L]均高于对照组[(60.77±10.31)%、(8.24±2.39)ng/L、(56.25±10.15)μg/L],差异均有统计学意义(t=2.300、3.561、2.569,均P<0.05)。治疗后,观察组癌胚抗原(CEA)[(4.24±1.36)μg/L]、糖类抗原19-9(CA19-9)[(7.49±2.11)U/ml]、糖类抗原50(CA50)[(5.11±1.27)μg/L]均低于对照组[(5.82±1.25)μg/L、(10.61±4.24)U/ml、(7.25±2.14)μg/L],差异均有统计学意义(t=6.483、5.009、6.535,均P<0.05)。治疗后,观察组不良事件发生率为6.90%(4/58),低于对照组[17.54%(10/57)],差异有统计学意义(χ^(2)=5.277,P<0.05)。结论去甲斑蝥素片辅助ERCP能有效缓解食管癌患者炎症反应并增强机体免疫功能,同时还可下调肿瘤标志物水平并降低胆道感染等不良事件发生风险。

去甲斑蝥素增强Bel7402中IκBα表达和抑制细胞增殖的研究

目的 从核转录因子 NF- κB和其抑制分子 IκBα的相互作用揭示去甲斑蝥素的抗肿瘤作用机理 ,为其进一步开发利用提供理论依据。 方法 选用人肝癌细胞株 (Bel740 2 ) ,常规培养 ,分为细胞对照组及去甲斑蝥素不同浓度组 ,进行细胞生长曲线测定、细胞集落形成实验及 MTT实验 ;同时对细胞进行 Giem sa染色、免疫细胞化学染色 (一抗分别为 anti- p6 5、anti- IκBα)。Western blot检测 IκBα的表达。 结果 生长曲线测定 ,细胞集落形成实验及 MTT实验结果表明 ,去甲斑蝥素对人肝癌细胞株的生长有明显的抑制作用 ;免疫细胞化学及 Western blot结果显示 :去甲斑蝥素可增强细胞内 IκBα的表达 ,并抑制 NF- κB的表达与活性。 结论 去甲斑蝥素有良好的抗肿瘤效应 ,其作用机理可能与其能增强核转录因子 NF- κB的抑制分子 IκBα的表达有关。

去甲斑蝥素对食管癌细胞株Eca-109中hTERT的表达和PTPRO基因启动子甲基化影响的实验研究

目的探索去甲斑蝥素(NCTD)诱导食管癌细胞Eca-109对人端粒酶逆转录酶(hT ERT)表达和受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO)基因启动子甲基化的影响。方法 MTT比色法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16μg/ml)NCTD及不同作用时间(12、24 h)对食管癌细胞Eca-109增殖的影响;TUNEL法配合激光共聚焦扫描显微镜检测NCTD+Eca-109组(实验组)和Eca-109组(对照组)细胞凋亡情况;甲基化特异性PCR(MSP)检测实验组和对照组中PTPRO基因启动子的甲基化状态,Western blotting检测实验组和对照组hT ERT蛋白的表达。结果 MTT检测显示,NCTD可抑制Eca-109细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,不同作用时间和浓度的细胞增殖抑制率的差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法结合激光共聚焦扫描显微镜观察显示,实验组细胞内部结构发生剧烈的变化,较对照组细胞核染色质致密浓染,核形缩小;MSP检测显示,对照组PTPRO基因启动子发生明显甲基化;Western blotting检测显示,实验组hT ERT蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论NCTD对食管癌细胞Eca-109有细胞毒性,能够抑制细胞生长,其机制可能与下调hT ERT蛋白表达和PTPRO基因启动子去甲基化有关。

去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞系的凋亡诱导作用及bcl-2基因的表达(英文)

目的：探讨去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制。方法：用 10μ g/ml去甲斑蝥素处理体外培养的人乳腺癌细胞系 MCF-7。处理后，在不同时间点，采用普通光镜、电子显微镜观察去甲斑蝥素对乳腺癌细胞的诱导凋亡现象。利用流式细胞仪分析凋亡细胞百分比，用蛋白印迹杂交方法对凋亡抑制基因 bcl-2的表达情况进行检测。结果：经 10μ g/ml去甲斑蝥素处理 12 h后，可观察到 MCF-7细胞变形、出泡，从培养瓶底脱离。细胞染色和电子显微镜可观察到染色质浓聚、边集，且随着药物作用时间的延长，凋亡细胞百分比逐渐增加。与对照组相比，凋亡抑制基因 bcl-2的表达降低。结论 :诱导肿瘤细胞凋亡可能是去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制之一。

抗肿瘤药物研究Ⅱ:去甲斑蝥素去氧脱氢类似物的合成与抗癌活性

斑蝥素(Ⅰ)是我国传统中药斑蝥抗肿瘤作用的有效成分。其双去甲基类似物去甲斑蝥素(Ⅱ)有与Ⅰ类似的抗癌活性,对早、中期肝癌疗效较好、且毒性较Ⅰ低,并有升高白细胞的作用,已应用于临床。我们设计和合成了一系列去甲斑蝥素的类似物和衍生物,以期寻找高效低毒的抗肿瘤化合物。前文报道了去甲斑蝥素氨基酸衍生物的合成与抗癌活性,本文报道去氧脱氢类似物(见图1)的合成与活性初筛结果。

去甲斑蝥素-泊洛沙姆407缓释剂瘤内注射治疗肝癌的临床研究

目的 :观察去甲斑蝥素 -泊洛沙姆 40 7(NCTD- P40 7)缓释制剂局部注射治疗肝癌的临床疗效。方法 :选择 2 5例原发性肝癌患者 ,B超引导下经皮肝穿刺瘤内注射 NCTD- P40 7缓释制剂治疗 ,观察注射前后的血常规、肝功能、肾功能变化及毒副反应程度 ,并与 2 9例肝动脉化疗栓塞 (TACE)治疗作疗效对照。 结果 :NCTD- P40 7治疗过程中仅见部分患者发热及血清丙氨酸氨基转移酶 (AL T)轻度增高 ,其抑制肿瘤生长、降低 AFP水平和延长生存期等方面的疗效与 TACE治疗并无差别(P>0 .0 5 ) ,而在缓解临床症状、提高生存质量方面更具优越性 (P<0 .0 1)。 结论 :NCTD- P40 7瘤内注射治疗肝癌具有类似TACE治疗的疗效 ,但毒副反应较小。

去甲斑蝥素对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和survivin表达的影响。方法:MTT法检测NCTD对HepG2细胞增殖的影响,Hochest33258染色、AnnexinV/PI染色、DNA琼脂糖电泳检测NCTD对HepG2细胞凋亡的影响,Western blotting检测NCTD对HepG2细胞survivin蛋白表达的影响。结果:NCTD可显著抑制HepG2细胞的增殖,呈质量浓度(5、10、20和40μg/ml)依赖性,40μg/ml NCTD作用48h时HepG2细胞抑制率达(81.27±3.25)%。NCTD作用HepG2细胞24h后,荧光显微镜下可见HepG2细胞出现核固缩和核裂解现象;DNA琼脂糖电泳显示,基因组DNA呈现典型的凋亡梯状图形;流式细胞术结果显示,5、10、20和40μg/ml NCTD作用后,HepG2细胞的凋亡率分别为(7.33±0.25)%、(18.23±1.19)%、(32.5±2.30)%和(48.23±1.17)%。Western blotting结果显示,随着NCTD作用剂量的增加,HepG2细胞中survivin蛋白的表达逐渐减少。结论:NCTD能抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡,其凋亡的发生与下调survivin蛋白的表达有关。

斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的细胞学研究

目的 研究抗癌药物斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病 K5 6 2细胞凋亡的细胞学变化特点。 方法 观察药物作用后 K5 6 2细胞形态的动态变化、一般及超微结构特征 ,并用流式细胞术分析斑蝥素及去甲斑蝥素诱导 K5 6 2细胞凋亡与细胞周期的关系。 结果 2 mg/ L斑蝥素及 10 mg/ L去甲斑蝥素作用 2 4h,部分 K5 6 2细胞质膜突起 ,染色质异常凝集 ,原位复染显示这些细胞质膜的通透性没有增强 ,DNA琼脂糖凝胶电泳呈现细胞凋亡特有的“梯子”状带纹。电镜下 ,加药处理组中部分细胞染色质凝集成块 ,没有核膜包被 ,部分细胞染色质靠核膜边集呈新月形 ,胞浆浓缩 ,内质网结构正常或有扩张 ,呈现典型的凋亡细胞形态。流式细胞术分析结合细胞形态学研究表明 ,斑蝥素及去甲斑蝥素诱导 K5 6 2细胞凋亡与细胞 G2 / M期阻滞相关。 结论 斑蝥素及去甲斑蝥素能够诱导 K5 6 2细胞凋亡 ,凋亡大部分发生在细胞周期的 M期 ,也有少量发生在间期 ,是多点启动的。

去甲斑蝥素缓释制剂毒性与疗效的实验研究

目的：初步探讨去甲斑蝥素缓释制剂的减毒增效作用。方法：选择泊洛沙姆４０７ 作为去甲斑蝥素局部用药的载体，将去甲斑蝥素制成缓释剂型，在初步证实该制剂兔肝内注射后确能缓慢释放的前提下，比较不同剂型的去甲斑蝥素的毒性及对荷 Ｗ ２５６ 肿瘤大鼠的抗肿瘤效果。结果：（１）去甲斑蝥素缓释制剂肝内注射后在局部至少能停留４ ｈ；（２）去甲斑蝥素缓释制剂的毒性明显低于单纯去甲斑蝥素；（３）去甲斑蝥素缓释剂型治疗组大鼠肿瘤生长受到显著抑制，肿瘤组织坏死广泛，治疗后平均生存期延长（与单纯去甲斑蝥素组相比， Ｐ＜ ０．０５），综合疗效优于单纯去甲斑蝥素组。结论：去甲斑蝥素缓释制剂肝内局部注射能够通过延缓去甲斑蝥素的释放速度，增加其与肿瘤细胞直接作用的时间等途径达到减毒增效的目的。

肝靶向去甲斑蝥素微乳的研究

目的 考察去甲斑蝥素 (NCTD)微乳的形态、粒径分布及生物安全性 ,研究去甲斑蝥素微乳及其注射液在小鼠体内的组织分布、药代动力学和体外药效学。方法 用气相法测定小鼠体内去甲斑蝥素含量。数据用 3P87处理 ,得到各主要药代动力学参数。采用体外细胞毒性和体内全身急性毒性试验方法 ,评价去甲斑蝥素微乳的抗肿瘤活性及其生物安全性。结果 微乳平均粒径为 (4 4± 9)nm。血浆中成分及制剂中辅料不干扰去甲斑蝥素测定。小鼠静脉注射去甲斑蝥素微乳及其去甲斑蝥素注射液后的药 时曲线均符合二室模型。去甲斑蝥素微乳的药代动力学研究表明 ,在同剂量条件下 ,NCTD微乳可在体内较长时间保持较高浓度 ,即可在一定程度上延长体内循环时间 ;微乳及注射液的AUC ,MRT ,T1 2 分别为 (2 9 7± 0 9) ,(9 2 5± 0 0 9)mg·h·L- 1 ,(110± 11) ,(86 7± 0 8) ,(10 3± 12 ) ,(4 2±4 )h ,NCTD微乳改变NCTD注射剂在小鼠体内的药时曲线和血药浓度的高低 ,其消除T1 2 和MRT比其注射剂分别增加了 2 4 8和 1 2 7倍 ,AUC增加了 3 2 1倍 ;NCTD微乳在肝、肾中的靶向指数分别为 0 4 3和 0 12。去甲斑蝥素微乳的生物安全性与其市售注射液比较无显著性差异。结论 去甲斑蝥素微乳较去甲斑蝥素注射液增强了药物的肝靶?

去甲斑蝥素对肿瘤细胞DNA复制起始蛋白Cdc6的抑制作用

目的本研究旨在明确去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)对肿瘤细胞DNA复制起始蛋白Cdc6的抑制作用。方法采用MTT法检测NCTD对多种肿瘤细胞,包括:HeLa、HepG2、Jurkat以及Ramos细胞增殖的抑制作用;采用Westernblotting检测NCTD对细胞Cdc6蛋白表达的影响;BrdU掺入实验检测NCTD对肿瘤细胞DNA复制的影响。结果 NCTD显著抑制上述4种肿瘤细胞的增殖,肿瘤细胞Cdc6蛋白被降解,DNA复制受到明显抑制。结论 NCTD可诱导多种肿瘤细胞Cdc6蛋白的降解并有效抑制肿瘤细胞的DNA复制及增殖,Cdc6蛋白可能是NCTD的一个有效抗肿瘤靶点。

去甲斑蝥素对原发性胆囊癌GBC-SD细胞系增殖和凋亡的影响

目的 研究去甲斑蝥素 (norcantharidin ,NCTD)对人胆囊癌GBC SD细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 将NCTD作用于经体外培养的人胆囊癌GBC SD细胞 ,采用四氮唑盐比色 (MTT)法进行体外细胞杀伤实验 ,测定NCTD对GBC SD细胞生长的抑制率与剂量效应、时间效应的关系 ;采用流式细胞术测定NCTD处理后的GBC SD细胞的细胞周期及凋亡率 ;并通过光电显微镜观察其细胞形态学改变。结果 NCTD浓度为 10 μg/ml时 ,对GBC SD细胞的生长有抑制作用 ,且随药物浓度升高其抑制作用增强 ,呈剂量效应关系 ,NCTD对GBC SD细胞的半数抑制浓度 (IC50 )为 60 μg/ml;NCTD作用 6h后对GBC SD细胞生长具有抑制作用 ,48h时抑制作用最明显 ,呈时间效应关系。经NCTD作用后 ,流式细胞仪显示 :G2 +M期的细胞明显增多 ,S期细胞明显减少 ,细胞凋亡率上升 ;光镜检查显示 :GBC SD细胞可出现细胞固缩 ,胞膜突出 ,核碎裂等现象 ,并出现凋亡小体 ;电镜显示 :细胞微绒毛卷缩、高尔基体、线粒体等细胞器衰退 ,并可见典型的凋亡细胞。结论 NCTD能抑制人胆囊癌GBC SD细胞的生长 ,其作用呈剂量 /时间效应关系。其机制可能与NCTD诱导GBC SD细胞凋亡 ,抑制GBC SD细胞增殖 ,干扰细胞生长周期 。