UFLC-MS/MS法测定人胎盘灌流液中氟西汀、去甲氟西汀、舍曲林的浓度及其胎盘透过率

目的建立测定人胎盘灌流液中氟西汀、去甲氟西汀、舍曲林浓度的方法并测定胎盘透过率。方法以格列本脲为内标,采用蛋白沉淀法对样品进行前处理,采用超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)法检测。以SynergiTM Hydro-RP 80A LC为色谱柱,以水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.70 mL/min,柱温为40℃,进样量为5μL。采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行正离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 309.9→148.1(氟西汀)、m/z 296.0→134.4(去甲氟西汀)、m/z 306.1→159.0(舍曲林)、m/z 493.9→369.1(内标)。建立单个胎盘小叶双向循环灌注模型,在母体侧胎盘灌流液中加入氟西汀(160 ng/mL)、去甲氟西汀(160 ng/mL)、舍曲林(100 ng/mL)和安替比林(阳性对照,100 ng/mL),采用上述UFLC-MS/MS法于循环0、10、20、30、45、60、90、120、150、180 min时分别测定氟西汀、去甲氟西汀、舍曲林的浓度并计算胎盘透过率。结果氟西汀、去甲氟西汀、舍曲林检测质量浓度的线性范围均为5.00~500 ng/mL(r均大于0.990),定量下限均为5.00 ng/mL;日内、日间RSD均不高于14.0%,相对误差为-9.6%~14.7%;稳定性试验的相对误差为-4.0%~11.0%;残留效应、提取方法、基质效应均不影响待测成分的定量分析。成功建立人胎盘体外循环灌注模型31个,其中15个为氟西汀、去甲氟西汀灌流,10个为舍曲林灌流,6个为安替比林灌流。灌流3 h后,氟西汀、去甲氟西汀、舍曲林的平均胎盘透过率分别为(8.74±1.67)%、(10.70±4.81)%、(5.90%±1.25)%。结论所建UFLC-MS/MS法操作简便、灵敏度和准确度均较高,可用于测定人胎盘灌流液中氟西汀、去甲氟西汀及舍曲林的浓度。氟西汀、去甲氟西汀、舍曲林均可透过胎盘,但舍曲林的胎盘透过率更低。

LC-MS/MS法同时测定人血浆中氟西汀、去甲氟西汀、帕罗西汀和氟伏沙明的质量浓度

目的建立一种简单、快速的能同时测定血浆中氟西汀、去甲氟西汀、帕罗西汀和氟伏沙明质量浓度的LC-MS/MS方法。方法血浆经乙腈沉淀后,上清液直接进样分析。色谱柱为Hypersil GOLD aQ,流动相为乙腈-1 mL·L^-1甲酸溶液,梯度洗脱。正离子检测,扫描方式为选择性反应监测,氟西汀、去甲氟西汀、帕罗西汀、氟伏沙明和内标罗红霉素的检测离子对分别为m/z 310.2→44.4,296.1→134.1,330.2→192.1,319.2→259.1和837.7→679.3。结果血浆中氟西汀、去甲氟西汀、帕罗西汀和氟伏沙明的质量浓度在1~1000 ng·mL^-1范围内线性关系良好,最低定量下限为1 ng·mL^-1。氟西汀、去甲氟西汀、帕罗西汀和氟伏沙明的日内和日间精密度RSD值均小于15%,日内和日间相对误差在-15%~15%之间,药物的提取回收率均大于90%,无显著基质效应。药物在反复冻融3次、室温下保存12 h和-80℃保存1个月的条件下稳定。该方法成功应用于抑郁症患者的氟西汀、去甲氟西汀、帕罗西汀和氟伏沙明血药质量浓度监测。结论建立的LC-MS/MS分析方法简便、灵敏、准确,可用于临床血药质量浓度的监测。

HPLC-MS-MS法测定人血清中氟西汀、文拉法辛及其代谢产物与应用

建立可同时快速测定人血清中氟西汀(Fluoxetine, FXT)、文拉法辛(Venlafaxine, VEN)及其活性代谢产物N-去甲氟西汀(Norfluoxetine,N-FXT)、O-去甲文拉法辛(O-Desmethylvenlafaxine,O-VEN)浓度的方法,并应用于临床,监测相关药物在人体中的代谢情况。临床样本,以甲醇-甲酸混合溶剂作蛋白沉淀剂,处理后,离心后取上清,进样高效液相色谱-串联质谱系统(HPLC-MS/MS),使用Phenomenex Kinetex Biphenyl色谱柱(2.1 mm×50 mm, 2.6μm),流动相为含0.1%甲酸和1 mmol/L甲酸铵的水和甲醇,流速0.4 mL·min^(-1),柱温45℃,进样量5μL,采用电喷雾正离子多反应监测模式检测。检测方法特异性和选择性较好,血药质量浓度分别在10~1 000,32~3 200,18~1 800,18~1 800 ng/mL范围内线性良好,回收率在85%~115%之间,批内批间精密度RSD均小于15%,临床样本在室温放置24 h、反复冻融、长期冻存保存下,检测准确度在85%~115%之间,相对基质效应均在20%以内,临床检测患者血药浓度,VEN加O-VEN,结果平均(263.89±176.67) ng/mL;FXT加N-FXT结果平均(139.12±121.3) ng/mL。方法样品用量少,处理简便,准确度高,特异性强,稳定性好,适用于同时快速测定人血清中FXT、VEN及其活性代谢产物的浓度,为精准个性化用药提供可靠的方法学支持。

氟西汀及其N-去甲代谢物的血药浓度检测

目的 :建立反相高效液相色谱 ( RP- HPL C)测定血清氟西汀 ( Flu)及其代谢物去甲氟西汀( NFL u)浓度的方法。 方法 :使用岛津 L C- 4 A高效液相色谱 ( HPL C)仪进行测定。 结果 :线性范围在3 7.5～ 12 0 0 nmol/ L之间 ( r=0 .9998) ,最低检测浓度 3 0 nmol/ L ,批内批间的 RSD<8.0 0 % ,平均回收率>90 % ,多剂量给药研究 ( 2 0 m g/ d,4 W,n=2 0 )稳态血药浓度 ( Css)显示 Flu为 ( 4 95 .6± 2 10 .1) nmol/ L ,NFlu为 ( 63 1.8± 2 2 2 .5 ) nmol/ L。 结论 :本法灵敏、正确、快速 ,可适用于药代动力学。

人血清中舍曲林、度洛西汀、氟伏沙明、氟西汀和去甲氟西汀的LC-MS/MS方法建立及临床应用

目的建立人血清中舍曲林、度洛西汀、氟伏沙明、氟西汀和去甲氟西汀浓度同时测定的LC-MS/MS方法,实现临床样本的治疗药物监测。方法以N-甲基氟西汀和N-甲基度洛西汀为内标,用甲醇-乙腈(1∶1,V∶V)混合溶剂沉淀蛋白;使用ES Sonoma C18(2)色谱柱(2.1 mm×50 mm,3μm),以0.2%乙腈和50%甲醇水溶液(含6 mmol·L^-1乙酸铵)为流动相,梯度洗脱;使用三重四级杆质谱进行质量分析,采用电喷雾离子源,在正离子模式下以MRM的扫描模式进行定量分析。结果所建方法经验证,空白基质对分析物和内标无干扰,注射完高浓度样品后各分析物和内标均无残留,基质效应符合文件要求(内标归一化的基质因子变异系数CV%<15%),处理后的样品24 h内分析稳定、未处理样本4℃冰箱存放1周稳定,舍曲林、度洛西汀、氟伏沙明、氟西汀及去甲氟西汀分别在9.22~295.16、10.80~345.60、8.10~259.12、10.11~323.54及5.90~188.70 ng·mL^-1内均具有良好的线性关系,r2>0.99,方法的准确度高、精密度好。结论该方法的样本处理简单,样本分析时间短,可实现大量临床样本的快速分析,已成功应用于临床服用舍曲林、度洛西汀、氟伏沙明、或氟西汀的患者血药浓度监测。

高效液相色谱法检测人血浆中氟西汀及其代谢产物的浓度

目的 :建立一种快速测定人血浆中氟西汀及其代谢产物去甲氟西汀的反相高效液相色谱法。方法 :用正己烷 -乙腈(98∶2 )提取血浆样品中氟西汀、去甲氟西汀及氯丙帕明 (内标 ) ,在EclipseXDB -C8柱上 ,以 0 0 5mol·L-1磷酸二氢钾 -乙腈 -甲醇 (5 5∶40∶5 )为流动相进行分离 ,流速 1 2mL·min-1,于 2 2 6nm检测。结果 :线性范围为 10～ 5 0 0ng·mL-1,氟西汀和去甲氟西汀相对回收率分别为 99 1%～ 10 4 2 %和 98 2 %～ 10 0 3 % ,日内RSD分别为 4 1%～ 4 8%和 4 5 %～5 8% ,日间RSD分别为 3 5 %～ 5 9%和 4 9%～ 6 8%。结论 :本法简便、精密度高、重现性好 ,结果准确可靠。

HPLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中芬太尼、氟西汀及其代谢物的质量浓度及药动学研究

目的建立一种简单、快速、灵敏的HPLC-MS/MS方法同时测定大鼠血浆中芬太尼、氟西汀及其代谢物去甲氟西汀,并应用该方法考察芬太尼和氟西汀单独用药和联合用药后,芬太尼、氟西汀和去甲氟西汀在大鼠体内的药动学行为。方法色谱柱为Agilent TC-C18柱(150 mm×4.60 mm,5μm);流动相为甲醇-乙腈-体积分数0.1%甲酸水溶液(体积比60∶20∶20);以正离子扫描多反应监测模式进行检测;采用氨水碱化,乙醚提取法处理血浆样品。结果大鼠血浆中芬太尼、氟西汀及其代谢物去甲氟西汀血浆质量浓度分别在0.0327~3.27μg·L-1(r=0.996 6)、1.008~100.8μg·L-1(r=0.997 1)和1.005~100.5μg·L-1(r=0.997 1)内线性关系良好。单独用药和联合用药后血浆中芬太尼的AUC0-t分别为(0.323±0.076)和(0.482±0.166)μg·h·L-1,ρmax分别为(0.326±0.075)和(0.489±0.191)μg·L-1,CL/F分别为(221.4±37.24)和(153.4±34.2)L·h-1·kg-1;单独用药和联合用药后血浆中氟西汀的AUC0-t分别为(20.37±8.55)和(42.83±14.03)μg·h·L-1,ρmax分别为(2.94±0.58)和(6.65±3.40)μg·L-1,CL/F分别为(33.42±15.50)和(22.20±12.15)L·h-1·kg-1;单独用药和联合用药后血浆中去甲氟西汀的AUC0-t分别为(431.8±190.1)和(640.7±289.3)μg·h·L-1,ρmax分别为(24.38±4.78)和(34.35±16.76)μg·L-1,CL/F分别为(4.07±1.84)和(3.51±2.07)L·h-1·kg-1。芬太尼单独组和联合用药组的AUC0-t、CL/F有显著性差异;氟西汀单独组和联合用药组AUC0-t、ρmax有显著性差异;去甲氟西汀单独组和联合用药组的药动学参数均无显著性差异。结论该方法可用于大鼠血浆中芬太尼、氟西汀、去甲氟西汀的检测。盐酸氟西汀可增加枸橼酸芬太尼在大鼠体内的吸收并可减慢其消除速度,枸橼酸芬太尼可增加盐酸氟西汀在大鼠体内的吸收。提示临床在联合用药时应减少两药给药剂量,增加枸橼酸芬太尼的给药间隔。

氟西汀和圣约翰草提取物对环孢素体外经CYP3A4代谢的影响

目的:体外考察抗抑郁药氟西汀、去甲氟西汀和圣约翰草提取物对免疫抑制剂环孢素在细胞色素P450酶介导的代谢的影响,为临床器官移植术后合理选择抗抑郁药提供参考。方法:建立以重组人CYP3A4代谢酶的体外反应体系,将氟西汀、去甲氟西汀和圣约翰草提取物分别与环孢素共孵育,用高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)法测定孵育液中环孢素浓度。结果:系列浓度的氟西汀、去甲氟西汀和圣约翰草提取物与2 nmol.mL-1环孢素共孵育后,计算求得IC50值分别为609,205和224μmol.L-1,Ki值分别为71.45,61.15和80.13μmol.L-1;阳性对照药红霉素能显著抑制环孢素的体外代谢,其IC50=120μmol.L-1,Ki值为47.32μmol.L-1。结论:氟西汀体外对CYP3A4有轻微的抑制作用,其体内代谢物去甲氟西汀能显著抑制环孢素的代谢,可为氟西汀和环孢素是否产生临床意义的相互作用提供参考;圣约翰草提取物体外亦能显著抑制环孢素经CYP3A4的代谢。

超高液相色谱-质谱法检测人血浆中格列美脲和氟西汀及其代谢产物

目的 建立一种同时检测人血浆中格列美脲、氟西汀及其代谢物羟基格列美脲、去甲氟西汀浓度的超高液相色谱-质谱的方法。方法 以咪达唑仑为内标,血浆样品用乙腈沉淀后检测。用Acquity UPLC BEH C18柱为分离柱,流动相：乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速：0.45 m L·min-1,柱温：40℃;用Acquity Xevo TQD三重四级杆质谱仪（电喷雾离子源）质谱检测,用多反应监测法测定样品中的药物浓度。考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度和回收率、基质效应及稳定性。结果 格列美脲、羟基格列美脲、氟西汀和羟基氟西汀的标准曲线分别为y=1.49×10-2x＋4.23×10-2（r=0.999 7）,y=0.97×10-2x-0.26×10-2（r=0.999 5）,y=1.72×10-2x＋9.48×10-2（r=0.999 3）,y=8.66×10-2x-1.05×10-2（r=0.999 4）,分别在5~1000,2.5~500,1~200,0.5~100 ng·m L-1线性关系良好。药物及其代谢物的回收率均大于90%,日内、日间精密度均小于15%。结论 该方法简便、快速,可用于人血浆格列美脲、氟西汀及其代谢产物的检测、药代动力学研究和药物相互作用研究。

氟西汀及其活性代谢产物在汉族健康人体的药动学

目的:探讨氟西汀及其活性代谢产物去甲氟西汀在汉族健康人体的药动学。方法:24名健康男性志愿者单剂量口服盐酸氟西汀分散片20 mg后,采用液相色谱-串联质谱法测定血浆中氟西汀和去甲氟西汀浓度,应用DAS2.0软件计算药动学参数。结果:氟西汀和去甲氟西汀在人体内药-时曲线呈一室模型。除1例慢代谢型受试者外,23名受试者主要药动学参数如下:t1/2分别为(30.8±7.6)和(130.9±42.0)h;tmax分别为(5.5±2.1)和(58.5±31.7)h;Cmax分别为(11.8±3.5)和(14.2±5.0)ng.mL-1;AUC0-t分别为(487.4±190.2)和(3370.9±1175.8)ng.h.mL-1;AUC0-∞分别为(506.5±208.8)和(3537.8±1424.1)ng.h.mL-1。结论:盐酸氟西汀分散片在人体吸收迅速,消除较慢,而其活性代谢产物去甲氟西汀消除更慢;其中1例受试者呈明显慢代谢型。

盐酸氟西汀胶囊在中国健康志愿者体内的生物等效性

目的通过测定代谢产物,研究不同厂家生产的盐酸氟西汀胶囊的生物等效性。方法22名健康男性受试者采用随机交叉给药方案,分别单剂量口服40 mg盐酸氟西汀试验胶囊和参比胶囊,采用液相色谱-质谱联用法测定血浆样本中氟西汀的活性代谢产物去甲氟西汀的浓度,采用DAS软件计算药动学参数。结果口服盐酸氟西汀试验或参比胶囊后,去甲氟西汀的ρmax分别为(28.4±8.2)和(28.2±8.7)μg.L-1;tmax分别为(78.6±27.9)和(91.6±36.0)h;AUC0→t分别为(9 645.0±2 872.0)和(9 771.0±2 717.0)μg.h.L-1;AUC0→∞分别为(10 043.0±3 006.0)和(10 180.0±2 811.0)μg.h.L-1;t12分别为(164.5±43.5)和(166.8±43.2)h。试验制剂的相对生物利用度为(98.7±11.6)%。结论受试制剂与参比制剂生物等效。

盐酸氟西汀分散片和胶囊的生物等效性研究

目的研究盐酸氟西汀分散片和胶囊的生物等效性。方法22例健康男性志愿者，随机分成2个序列。交叉单剂量口服20mg盐酸氟西汀分散片或胶囊，定时取血样，以液相-质谱联用法测定血浆样本中氟西汀及其代谢产物去甲氟西汀的浓度，并对2种制剂进行生物等效性评价。结果口服盐酸氟西汀分散片或胶囊后，氟西汀的Cmax分别为(16．96±5．40)和(17．02±4．73)ng／ml；Tmax分别为(59．6±18．9)和(61．3±20．0)h。AYC0→∞分别为(971．08±541．48)和(1018．72±583．46)ng/h·L^-1;t1/2分别为(6．8±1．7)和(6．1±1．2)h。口服2种制剂后去甲氟西汀的Cmax分别为(20．05±10．33)和(19．55±8．10)ng／ml；Tmax分别为(74．6±53．1)和(80．0±56．4)h；AUC0→∞分别(6171．86±3320．18)和(6312．87±3025．06)mg／h·L^-1；t1/2分别为(155．6±40．7)和(165．7±65．7)h。结论20mg盐酸氟西汀分散片和20mg盐酸氟西汀胶囊为生物等效。