双去甲氧基姜黄素对小鼠脑神经母瘤细胞的促神经分化作用及机制研究

目的研究姜黄素衍生物双去甲氧基姜黄素(BC)对小鼠脑神经母瘤细胞Neuro-2a(N2a)的促神经分化作用及机制。方法采用MTT法检测BC(1、2、4、6、8、10μmol/L)对N2a细胞存活率的影响,确定药物处理浓度范围。设对照组、视黄酸(RA)组(10μmol/L)和BC组(1、2、4μmol/L),培养48、72 h后,对分化细胞的神经突起长度进行测量并计算细胞分化率;采用Western blot法检测4μmol/L BC作用5、15、30、60、120 min后细胞中蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)蛋白的磷酸化水平。以抑制剂LY294002(LY)和PD98059(PD)干预后,进一步验证BC对Akt和ERK蛋白磷酸化水平及促神经分化的影响。结果根据MTT实验确定后续诱导细胞分化的BC浓度为1、2、4μmol/L。分化48 h后,与对照组比较,RA组和BC 1、2、4μmol/L组细胞分化率及BC 4μmol/L组细胞神经突起长度均显著升高/增加(P<0.05或P<0.01);BC继续诱导分化至72 h后,与对照组比较,RA组细胞分化率和神经突起长度、BC 4μmol/L组细胞分化率和BC 2μmol/L组细胞神经突起长度均显著升高/增加(P<0.05或P<0.01)。与0 min组比较,BC 4μmol/L作用5、15、30、60、120 min组细胞中Akt、ERK1/2、p38蛋白的磷酸化水平均有不同程度升高,部分差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。加入抑制剂LY/PD后,与BC组比较,PD+BC组细胞中ERK1/2蛋白的磷酸化水平显著降低(P<0.01),LY组、LY+BC组、PD组、PD+BC组细胞分化率均显著降低(P<0.01)。结论BC可以促进N2a细胞分化,增加细胞分化率和神经突起长度,其机制可能与激活MEK/ERK和PI3K/Akt信号通路有关。

双脱甲氧基姜黄素通过调节HIF-1α介导衰老诱导非小细胞肺癌细胞凋亡并抑制细胞增殖

目的探讨双脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin,BDMC)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的调控作用及分子机制。方法非小细胞肺癌细胞株NCI-H1975和NCI-H520分别用磷酸盐缓冲液(PBS)和20μmol/L的BDMC处理后,采用CCK-8法检测细胞活力,羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimide ester,CFSE)法检测细胞增殖,吖啶橙(acridine orange,AO)染色和Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡,细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色实验检测SA-β-Gal活性,流式细胞仪检测SA-β-Gal阳性细胞比例。然后分别以20μmol/L BDMC、20μmol/L缺氧诱导因子HIF-α抑制剂PX-478或20μmol/L BDMC+20μmol/LPX-478处理非小细胞肺癌细胞株NCI-H1975和NCI-H520,以等剂量PBS处理的细胞为对照组,采用免疫印迹法检测HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达,SA-β-Gal染色实验检测SA-β-Gal活性。结果与PBS组相比,BDMC组NCI-H1975和NCI-H520细胞活力明显降低(均P<0.05),CFSE阳性增殖细胞比例明显减少(均P<0.01);AO阳性细胞比例明显减少(均P<0.01),Annexin V+PI-和SA-β-Gal+PI-细胞比例明显增加(均P<0.01),SA-β-Gal活性明显增加(均P<0.001),HIF-1α蛋白表达明显增加(均P<0.001)。相比于BDMC组,BDMC+PX-478组的HIF-1α蛋白表达降低(P<0.05),SA-β-Gal阳性细胞比例明显减少。结论BDMC可能通过上调HIF-1α信号促进非小细胞肺癌细胞衰老,进而抑制细胞增殖并促进凋亡。

双脱甲氧基姜黄素结晶热力学及结晶过程研究

采用动态法测定了278.15~323.15 K范围内双脱甲氧基姜黄素晶体在不同浓度乙醇中的溶解度,并用修正的Apelblat方程对溶解度数据进行拟合。使用Van’t Hoff方程计算双脱甲氧基姜黄素晶体在不同浓度乙醇中溶解吉布斯自由能ΔG、溶解焓ΔH和溶解熵ΔS,并在90%乙醇中进行了降温结晶实验。结果表明,双脱甲氧基姜黄素在不同浓度乙醇中的溶解度随温度的升高而明显增加,修正的Apelblat方程拟合效果良好。使用90%乙醇作为溶剂的降温结晶得到的产品纯度在92%左右,收率大于70%。

姜黄素类物质微波辅助提取的工艺优化及其抗氧化活性研究

采用微波辅助提取技术,考察了提取时料液比、乙醇浓度、微波功率、提取时间对姜黄素类物质的含量及抗氧化活性的影响。结果表明,料液比为1∶25、乙醇浓度80%、微波功率40 W、微波时间50 s时,姜黄素含量为3.435 mg/g,双去甲氧基姜黄素为0.304 mg/g,去甲氧基姜黄素含量为0.450 mg/g,提取液对DPPH清除率达到59.16%,对羟基自由基清除率达到86.82%。

姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素稳定性研究

目的:研究姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素在不同pH缓冲溶液中的稳定性。方法:以一定pH的缓冲溶液为反应介质,将姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素定量加入到反应介质中,高效液相色谱法测定姜黄素类化合物浓度的变化,采用动力学方法建立姜黄素类化合物降解速率方程。结果:在相同的条件下姜黄素类化合物的稳定性依次为:双去甲氧基姜黄素≥去甲氧基姜黄素≥姜黄素。结论:去甲氧基姜黄素对姜黄素产生稳定作用最强,为姜黄素的天然稳定剂。

去甲氧基姜黄素对姜黄素稳定作用的研究

目的:研究去甲氧基姜黄素对姜黄素稳定性的影响,揭示中药姜黄中存在着对姜黄素产生稳定作用的天然稳定剂。方法:以pH=8的缓冲溶液为反应介质,将去甲氧基姜黄素定量加入到姜黄素中,高效液相色谱法测定姜黄素浓度的变化,采用动力学方法建立姜黄素降解速率方程。结果:去甲氧基姜黄素、姜黄醇提取物都有助于姜黄素半衰期延长,且随着加入量的增加,姜黄素降解半衰期延长。结论:去甲氧基姜黄素在中药姜黄中对姜黄素产生稳定作用,为姜黄素天然稳定剂,在研制姜黄素制剂时,加入去甲氧基姜黄素或姜黄醇提取物,可提高姜黄素的稳定性。

鱼组织中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素含量的超高效液相色谱法测定

建立了黄颡鱼、团头鲂和草鱼血浆、肌肉、肝脏、肾脏中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素同时测定的超高效液相色谱紫外检测法(UPLC-UV)。样品经乙腈(含0.01%乙酸)提取,无水硫酸钠除水,正己烷去脂等样品处理,在ACQUIT UPLC BEH C18色谱柱上分离,428 nm波长处测定。双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素在0.01~5.00 mg/L浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数(r2)分别为0.998 7,0.999 8和0.999 6。在空白鱼组织中进行0.025,0.05,0.50,1.00 mg/kg 4个水平的加标回收实验,3种待测组分的平均回收率为64.7%~102.2%,相对标准偏差为0.69%~10.8%。鱼组织中3种待测组分的检出限(LOD)均为0.010 mg/kg,定量下限(LOQ)均为0.025 mg/kg。应用该方法研究了姜黄素在团头鲂体内的药代动力学规律。

二脱甲氧基姜黄素的降血脂和抗脂质过氧化作用

目的:探讨二脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxy curcumin,Bdmc)降血脂、抗脂质过氧化作用和对脂代谢相关酶类活性的影响。方法:用高脂膳食喂饲Wistar大鼠,造成食饵性高脂血症后,用二脱甲氧基姜黄素和阳性对照药辛伐他汀进行实验性治疗。给药3周后处死动物,测定血清和肝脏总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和血清高密度脂蛋白(HDL-C)含量,计算低密度脂蛋白(LDL-C)含量,同时测定肝素化血浆脂解酶(post-heparinlipolytic activity,PHLA)、脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性及血清丙二醛(MDA)含量。结果:二脱甲氧基姜黄素和辛伐他汀均能使血清和肝脏TC、TG含量降低,血清HDL-C含量升高、LDL-C含量降低。二脱甲氧基姜黄素能显著提高PHLA活性,对提高LPL和HL的活性作用也较明显;二脱甲氧基姜黄素能有效降低MDA的含量。结论:二脱甲氧基姜黄素具有降低肝脏和血清脂质,特别是有显著的降TG和提高TG代谢相关酶活性的作用。

双去甲氧基姜黄素与姜黄素的药代动力学比较

考察了SD大鼠口服灌喂给予双去甲氧基姜黄素和姜黄素药代动力学特征。将雄性SD大鼠12只随机分为2组,分别灌服双去甲氧基姜黄素和姜黄素混悬液后,于不同时间点大鼠眼底静脉丛取血,HPLC法测定血浆中双去甲氧基姜黄素和单体姜黄素的浓度,DAS 2.1.1药动学软件计算药动学参数。结果显示,双去甲氧基姜黄素和单体姜黄素的主要药动学参数Tmax为0.75 h和0.25 h;Cmax为（62.90±2.64）μg/L和（61.64±4.30）μg/L;AUC0~72 h为（281.75±3.61）μg/（L·h）和（171.79±32.18）μg/（L·h）;AUC0~∞为（291.31±15.15）μg/（L·h）和（190.46±43.81）μg/（L·h）。表明双去甲氧基姜黄素和单体姜黄素相比有更好的生物利用度。

微生物转化法制备双脱甲氧基姜黄素糖苷化产物及其对HepG2肿瘤细胞的抑制作用

双脱甲氧基姜黄素是一种具有极强抗氧化活性和抗肿瘤活性的天然酚类成分,但是极差的水溶性和稳定性制约了其在食品、医药领域的广泛应用。通过微生物转化进行结构改造,引入亲水性的葡萄糖苷键基团是有效解决其水溶性的手段。该研究利用不同微生物体系对双脱甲氧基姜黄素进行微生物转化,发现华根霉Rhizopus chinensis IFFI 3043能够将双脱甲氧基姜黄素(Bisdemethoxycurcumin,BDMC)转化为双脱甲氧基姜黄素-O-葡萄糖苷(BDMC-O-glucoside),且转化效率达到63%。研究利用高效液相色谱-质谱联合(high performance liquid chromatography-mass spectormeter,HPLC-MS)、核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)等检测手段,确认了BDMC-O-glucoside转化产物的化学结构,完成了其转化过程的动态曲线分析,并通过MTT细胞毒活性法发现BDMC-O-glucoside对Hep G2肿瘤细胞的抑制作用显著强于BDMC。

双去甲氧基姜黄素及其N-甲基吡唑衍生物对朱砂叶螨生物活性和多种酶活性的影响

【目的】明确双去甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin,BDMC)及其N-甲基吡唑衍生物(N-methylpyrazolebisdemethoxycurcumin,N-MPBDMC)对朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus Boisduval)的生物活性及其体内多种酶活性的影响,为进一步证实其作用机理提供依据。【方法】采用玻片浸渍法测定BDMC及N-MPBDMC对朱砂叶螨雌成螨的触杀毒力,观察两者对朱砂叶螨的致毒症状,并测定其对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶(AchE)、Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)、单胺氧化酶(MAO)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)和羧酸酯酶(CarE)活性的影响。【结果】N-MPBDMC对朱砂叶螨雌成螨的触杀活性优于先导化合物BDMC,其中处理72 h后,N-MPBDMC对朱砂叶螨的LC50为21.77 mg.L-1,其毒力是BDMC的10.03倍,与95%哒螨灵原药的毒力相当。BDMC和N-MPBDMC分别处理朱砂叶螨雌成螨后,中毒试螨表现出类似神经毒剂的致毒症状,螨体内GSTs和CarE活性均有不同程度上升,AchE、Ca2+-ATPase和MAO活性均有不同程度下降,其中AchE活性平均分别下降了16.77%和36.57%,Ca2+-ATPase活性平均分别下降了17.55%和17.45%,MAO活性平均分别下降了8.04%和14.19%,GSTs活性平均分别上升了17.13%和18.93%,CarE活性平均分别上升了26.78%和25.98%。【结论】BDMC和N-MPBDMC对朱砂叶螨的致死作用可能与其显著降低螨体内神经系统相关酶活性有关,具体的作用靶标还有待进一步确证。

去甲氧基姜黄素纳米乳在大鼠体内的药代动力学研究

目的研究去甲氧基姜黄素纳米乳在大鼠体内的药代动力学行为,并与游离药物去甲氧基姜黄素混悬液进行比较,评价去甲氧基姜黄素纳米乳药代动力学特征。方法 12只SD大鼠分为2组,每组6只。实验组灌胃给予去甲氧基姜黄素纳米乳;对照组灌胃给予游离药物去甲氧基姜黄素混悬液,然后于SD大鼠眼底静脉丛取血,采用HPLC方法测定血浆中去甲氧基姜黄素的浓度。结果去甲氧基姜黄素纳米乳和去甲氧基姜黄素的药代动力学参数如下:血药浓度-时间线下峰面积AUC(0-∞)分别为(962.84±75.27)μg·h/L和(235.62±11.28)μg·h/L;T1/2分别为(38.85±6.54)h和(8.23±2.92)h;体内滞留时间MRT(0-∞)分别为(50.92±4.58)h和(8.46±2.61)h,去甲氧基姜黄素纳米乳的AUC(0-∞)、T1/2、MRT(0-∞)分别为去甲氧基姜黄素的4.08、4.72倍和6.01倍。结论去甲氧基姜黄素纳米乳相对于去甲氧基姜黄素而言,生物利用度有明显提高。

双脱甲氧基姜黄素对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨双脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin)对黑色素瘤B16-F10细胞增殖与凋亡的影响。方法:双脱甲氧基姜黄素作用于B16-F10细胞24 h,MTT法检测双脱甲氧基姜黄素对B16-F10细胞的增殖抑制作用。流式细胞术检测双脱甲氧基姜黄素对细胞周期、细胞凋亡的影响。在C57BL/6小鼠上面建立黑色素瘤模型,采用静脉给药,观察其对黑色素瘤模型的增殖影响。用蛋白免疫印迹法检测双脱甲氧基姜黄素在细胞和组织层面对抗细胞凋亡蛋白BCL-1的表达影响。结果:双脱甲氧基姜黄素可以明显抑制B16-F10细胞的增殖。双脱甲氧基姜黄素诱导B16-F10细胞凋亡,抑制细胞周期于S期。采用静脉注射给药,双脱甲氧基姜黄素可以抑制黑色素瘤的生长。在细胞和组织层面,可以抑制抗凋亡蛋白BCL-1的表达。结论:双脱甲氧基姜黄素可以抑制黑色素瘤B16-F10细胞的增殖,可能与其促进细胞凋亡有关;双脱甲氧基姜黄素诱导黑色素瘤B16-F10细胞凋亡可能与抑制抗凋亡单位BCL-1有关。

去甲氧基姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨去甲氧基姜黄素(DMC)对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响。方法将人膀胱癌T24细胞株用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基培养,并将细胞分为实验组和对照组。实验组细胞加入不同浓度的DMC(10、20、40、80、160μM)进行孵育,对照组加入等体积二甲基亚砜(DMSO)进行孵育。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测DMC对T24细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测T24细胞凋亡率,Western印迹法检测DMC对T24细胞作用的分子机制。结果实验组用不同浓度的DMC孵育48 h后,细胞增殖活力均低于对照组(P<0.05)。用不同浓度的DMC(20、40、80μM)处理T24细胞48 h,增殖细胞核抗原(PCNA)相对表达量均低于对照组,p27相对表达量均高于对照组(P<0.05);且随DMC浓度的增加PCNA相对表达量逐渐减低,p27相对表达量逐渐增高。不同浓度的DMC(20、40、80μM)处理T24细胞48 h后,细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05);pro-caspase 3、cleaved-caspase 3、pro-PARP、cleaved-PARP的相对表达量与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。用浓度为40μM的DMC分别刺激T24细胞0、15、30、60、120min,采用Western印迹法检测与细胞增殖密切相关的mTOR通路磷酸化的变化显示,不同时间点p-mTOR的相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);且刺激30、60、120 min时的p-mTOR的相对表达量均低于0 min时(P<0.05);而不同时间点mTOR的相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DMC可抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,并诱导该细胞凋亡,其分子机制可能与Caspase 3的激活和mTOR通路的抑制有关,对于临床上膀胱癌的治疗有较广阔的应用价值。

ADAMTS9基因联合去甲氧基姜黄素对肝癌细胞侵袭迁移及PI3K/PTEN/AKT信号的影响

目的探讨过表达带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解联蛋白金属蛋白酶(ADAMTS)9基因或去甲氧基姜黄素(DMC)单独或联合对肝癌细胞侵袭迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白/蛋白激酶B(PI3K/PTEN/AKT)信号的影响。方法 Western印迹检测肝癌(HepG2)、MHCC 97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9的蛋白表达。将MHCC97-H细胞分为对照组、pcDNA3.1-ADAMTS9组、DMC组和pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组4个处理组,其中pcDNA3.1-ADAMTS9的转染参照LipofectamineTM 2000转染说明,收集处理48 h的细胞,CCK8法、Transwell小室分别检测细胞活力及侵袭和迁移能力。Western印迹检测ADAMTS9、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、PI3K、PTEN和p-AKT的蛋白表达。结果肝癌HepG2、MHCC97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9表达均有不同程度的降低,与正常肝细胞HL-7702比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组DAMTS9的蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于对照组,PTEN蛋白表达显著高于对照组(P<0.05),而pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组,PTEN蛋白表达显著高于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组(P<0.05)。结论过表达ADAMTS9及DMC均可抑制肝癌细胞活力、侵袭和迁移能力,两者联用对细胞抑制作用更明显,机制可能与下调PCNA、MMP-2和MMP-9及PI3K/PTEN/AKT信号通路有关。

双去甲氧基姜黄素与姜黄素纳米乳药代动力学的比较研究

制备并考察双去甲氧基姜黄素纳米乳和单体姜黄素纳米乳的药代动力学特征。雄性SD大鼠口服灌胃分别给予双去甲氧基姜黄素纳米乳和单体姜黄素纳米乳后,于大鼠眼底静脉丛取血,采用HPLC法测定血浆中单体双去甲氧基姜黄素和姜黄素的浓度,DAS 2.1.1药动学软件计算药动学参数。得到双去甲氧基姜黄素纳米乳和单体姜黄素纳米乳主要药动学参数Tmax为1.50h和1.00 h;C_(max)为(85.87±2.53)和(85.60±2.30)μg/L;AUC0~72 h为(788.23±52.04)和(1 345.50±64.88)μg/L·h。表明姜黄素纳米乳的口服生物利用度比双去甲氧基姜黄素纳米乳更好。

高效液相色谱法同时测定协日嘎四味汤胶囊中姜黄素、脱甲氧基姜黄素、二脱甲氧基姜黄素的含量

目的建立同时测定协日嘎四味汤胶囊中姜黄素、脱甲氧基姜黄素、二脱甲氧基姜黄素含量的方法。方法采用高效液相色谱法。应用Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm,5μm）色谱柱;以乙腈-0.4%冰醋酸溶液（48∶52）为流动相;流速为0.8 mL.min-1;柱温为30℃;检测波长为430 nm。结果姜黄素、脱甲氧基姜黄素、二脱甲氧基姜黄素基线分离,线性范围分别为0.5084.572、0.5164.644、0.2532.277μg.mL-1;平均回收率依次为99.5%、99.0%、98.8%,RSD分别为1.5%、1.7%、2.3%。结论本试验方法简便、快捷,结果准确、重复性好,可用于该制剂中姜黄素类成分的含量测定。

HPLC法测定不同产地醋莪术饮片中姜黄素、双去甲氧基姜黄素和去甲氧基姜黄素的含量

目的采用HPLC法测定不同产地醋莪术饮片中姜黄素、双去甲氧基姜黄素和去甲氧基姜黄素的含量,对不同产地醋莪术饮片进行质量评价。方法色谱柱为Agilent pro shell C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.5‰甲酸水-0.5‰甲酸乙腈(梯度洗脱),流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长415 nm,进样量10μl。结果在上述色谱条件下测得姜黄素、双去甲氧基姜黄素和去甲氧基姜黄素分别在1.42~71.00、0.22~10.82、1.01~50.50μg/ml时与色谱峰面积线性关系良好,平均回收率分别为99.2%、96.9%、97.7%,RSD分别为1.0%、1.9%、1.2%。结论该方法准确、灵敏,可作为不同产地醋莪术饮片的质量控制方法;测定结果表明,四川产醋莪术饮片中3种成分含量相对较高。

双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响研究

目的:考察双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响。方法:将双脱甲氧基姜黄素脂质体作用于体外培养人肺腺癌A549细胞,分别应用形态学观察、MTT检测、流式细胞仪检测观察其生长形态、细胞周期等生物学特性变化。结果:显微镜下可见A549细胞形态明显改变;双脱甲氧基姜黄素脂质体对A549细胞增殖有抑制作用,其IC50为12.108μg/ml;流式细胞仪显示细胞周期阻滞在S期。结论:双脱甲氧基姜黄素脂质体可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,在肺腺癌治疗中有一定应用前景。

去甲氧基姜黄素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路调控细胞自噬对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用研究

目的:探讨去甲氧基姜黄素(DMC)通过调控自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及可能机制。方法:清洁级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、不同剂量DMC预处理组(10、15和30 mg/kg)组。给药7 d后,采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备MI/RI模型。检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;TTC法检测心肌梗死面积;HE染色法观察心肌组织病理变化;Western blot法检测LC3II、Beclin1、p62、PI3K、Akt和mTOR的蛋白表达及磷酸化水平。结果:与假手术组相比,模型组血清中CK-MB、LDH、MDA、IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01);心肌梗死面积显著增加(P<0.01),心肌纤维结构紊乱、溶解和炎性浸润;心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.01),p62、p-PI3K蛋白水平明显降低(P<0.01)。与模型组相比较,DMC预处理各剂量组血清中CK-MB、LDH、MDA、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);心肌梗死面积均有不同程度的减少(P<0.01),心肌组织病理变化有不同程度的改善;心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达降低(P<0.01),p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:DMC能通过激活PI3K-Akt-mTOR信号通路,抑制心肌细胞过度自噬,对心肌缺血再灌注损伤起到明显的保护作用。