去甲汉黄芩素对低压低氧诱导急性心肌损伤的保护作用与机制研究

为了考察去甲汉黄芩素对低压低氧诱导小鼠急性心肌损伤的保护作用及其作用机制,将雄性BALB/c小鼠78只随机分为正常对照组、模型组、芦丁组、去甲汉黄芩素低、中、高剂量组。除正常对照组外,其他组置于模拟海拔8000 m暴露24 h,随后处死小鼠,取血清和心脏。HE染色评估小鼠心肌组织病理变化;商用试剂盒检测心肌组织中过氧化氢(H2O2)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平评估氧化应激状态;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清和心肌组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量评估炎性反应;蛋白质印迹(Western blot)检测相关蛋白的表达。结果显示去甲汉黄芩素能显著减少低压低氧诱导的心肌组织病理学变化,明显提高心肌组织中SOD和GSH的水平,降低H2O2和MDA的含量以及缺氧相关蛋白[缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)]的水平。去甲汉黄芩素还能够降低血清和心肌组织中炎性因子(IL-1β、TNF-α和IL-6)的水平以及心肌组织中炎性相关蛋白[核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)和TNF-α]的表达。此外,去甲汉黄芩素还能调控心肌组织中抗氧化应激相关蛋白[核因子-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)]以及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和裂解的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)]的表达。以上结果表明:去甲汉黄芩素通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制氧化应激、炎性反应和细胞凋亡缓解低压低氧诱导的小鼠急性心肌损伤。

去甲汉黄芩素抗脓毒症潜在靶点的筛选与鉴定

目的对去甲汉黄芩素的分子特征进行研究,筛选并鉴定其在治疗脓毒症的潜在靶点。方法基于中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP),对去甲汉黄芩素的药理参数以及分子特征进行分析;利用Swiss TargetPrediction和DRAR-CPI,甄别得到去甲汉黄芩素抗脓毒症的潜在目标靶点。去甲汉黄芩素的靶点筛选是基于人类孟德尔遗传病数据库,毒性与基因比较数据库和药物靶点数据库中收载的靶点相匹配得出。将筛选出的去甲汉黄芩素抗脓毒症的靶点,通过分子对接软件进一步筛选鉴定得到去甲汉黄芩素的潜在靶点。结果去甲汉黄芩素成药性良好,其口服生物利用度(OB)为39.40%,药物的相似度(DL)为0.21。实验筛选得到的105个潜在靶点中,发现其中有7个与脓毒症直接相关,在经分子对接软件鉴定后得出去甲汉黄芩素抗脓毒症的5个潜在靶点:凝血因子Ⅸ(F9)、人雌激素受体β(ESR2)、组织蛋白酶G(CTSG)、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)。结论去甲汉黄芩素可通过与筛选的靶标结合,调控凝血因子Ⅸ参与凝血系统级联反应,调节ESR2维持雌激素水平的稳定,调节组织蛋白酶G、丝裂原活化蛋白激酶1和嘌呤核苷磷酸化酶抑制脓毒症组织和器官损伤,起到保护脓毒症损伤器官的作用,最终通过缓解脓毒症的症状及炎症等水平起到抗脓毒症作用。

基于网络药理学及实验验证探讨去甲汉黄芩素促进口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的作用机制

目的 采用网络药理学结合实验验证方法探索去甲汉黄芩素对口腔鳞状细胞癌的抗肿瘤活性及靶点。方法 采用网络药理学方法分析去甲汉黄芩素及口腔鳞状细胞癌的靶点。使用STRING和Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络。基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析生物学功能。采用分子对接和CETSA验证去甲汉黄芩素与其关键靶标之间的结合能力。MTT和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)法检测去甲汉黄芩素对口腔鳞状细胞癌细胞增殖以及凋亡的影响。免疫蛋白印迹法检测相关蛋白的表达。结果 去甲汉黄芩素与口腔鳞状细胞癌共有71个重叠靶点;分别涉及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶(Akt)、氧化应激以及凋亡通路中相关基因;其中前5位的Hub基因为表皮生长因子受体(EGFR)、雌激素受体1(ESR1)、非受体酪氨酸激酶(SRC)、前列腺素内过氧化物酶2(PTGS2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)。分子对接结果显示,去甲汉黄芩素与EGFR的结合力最强(-6.6 kcal/mol);CETSA实验和Kaplan-Meier生存曲线结果显示,EGFR对口腔鳞状细胞癌患者生存影响最大。实验验证结果显示,去甲汉黄芩素以剂量相关性性地降低口腔鳞状细胞癌细胞活性,IC50为15μmol/L。AO/EB染色分析显示,去甲汉黄芩素诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生程序性凋亡来抑制癌细胞的活力,且与Bax水平的增加和Bcl-2水平的降低相关。结论 去甲汉黄芩素可能通过调控EGFR的表达进而影响PI3K/Akt、氧化应激以及凋亡途径诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡。

基于“辨状论质”理论分析不同采收期黄芩外观性状与内在质量的相关性

目的探索不同采收期黄芩Scutellaria baicalensis外观性状与内在成分含量之间的关联性,为黄芩的“辨状论质”提供理论依据。方法通过分光测色仪及游标卡尺测定黄芩外观性状指标(药材粉末颜色、根长、根粗),采用HPLC测定黄芩12种黄酮类成分(野黄芩苷、野黄芩素、黄芩苷、木犀草素、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、芹菜素、去甲汉黄芩素、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A)含量。运用皮尔逊相关性分析和线性回归分析黄芩外观性状与有效成分含量之间的关系。并对黄芩“外观性状指标-成分含量-产量”进行主成分分析。结果黄芩外观性状与有效成分含量有相关性,但无显著性回归关系。黄芩色黄明者,黄酮苷类成分含量相对较高;色暗、根长、根粗者,黄酮苷元类成分含量相对较高。陕西省淳化地区黄芩药材秋季较适宜采收期为“寒露”节气前后。结论黄芩饮片的色泽是其内在质量的具体体现,黄芩外观性状在一定程度上可作为快速评价黄芩药材质量的方法,为黄芩“辨状论质”提供理论依据,以指导黄芩的采收与药材优劣辨别。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS谱-效相关的柴胡-黄芩药对解热质量标志物的筛选及含量测定方法的建立

目的筛选柴胡-黄芩(柴黄)药对解热作用质量标志物(qualitymarker,Q-Marker),并建立Q-Marker的UPLC含量测定方法。方法采用均匀设计法建立柴黄药对配伍差异样品,利用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱质谱(UPLCQ-Exactive Orbitrap-MS)技术建立柴黄药对煎液指纹图谱,采用Thermo Scientific Hypersil Gold C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,3μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,并采用电喷雾电离,正离子扫描模式下进行质谱数据采集。采用新西兰兔耳缘静脉脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)注射的方法建立少阳证高热模型,以体温变化值作为解热药效指标,采用灰色关联度分析法建立指纹图谱中共有峰与解热作用的相关关系,筛选出关联性较大的成分作为柴黄药对解热作用的主要Q-Marker,采用UPLC建立Q-Marker含量测定方法。结果筛选出黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、去甲汉黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、汉黄芩素、柴胡皂苷A、柴胡皂苷C作为柴黄药对解热Q-Marker,并建立了含量测定方法。结论基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术的谱-效相关研究策略可以快速分析及初步确定柴黄药对解热Q-Marker,在此基础上建立其UPLC含量测定方法,对优化柴黄类方制剂的质量控制方法具有重要的参考价值。