PCR-SSCP中加或不加去离子甲酰胺的方法比较

目的 :探讨不同电泳条件对 ob基因检出的影响。方法 :在样品处理中分别采用加或不加去离子甲酰胺的方法 ,观察其扩增带 ,并对电泳结果进行比较。结果 :在 SSCP中 ,加与不加去离子甲酰胺均可检出 ob基因 ,表现出的基因各带无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :PCR- SSCP中加或不加去离子甲酰胺对

去离子甲酰胺在脑腱黄瘤病基因诊断中的应用

目的探讨去离子甲酰胺在脑腱黄瘤病基因诊断中的应用价值,同时为高GC含量DNA片段的扩增提供方法上的参考。方法在反应体系中不含去离子甲酰胺以及去离子甲酰胺浓度为1%-10%的情况下采用热启动PCR扩增CYP27A1基因4个高GC含量的片段,然后进行琼脂糖凝胶电泳,再用Image J软件分析不同去离子甲酰胺浓度下目标条带的光强度值,比较差异,最后挑选特异性扩增产物测序分析。结果在不含去离子甲酰胺和去离子甲酰胺浓度为1%-6%的情况下,均扩增出目标片段;在不含去离子甲酰胺时,4个目标片段的扩增产物均存在非特异性带,而当去离子甲酰胺的浓度为4%-6%时,非特异性带消失。不同浓度(0-6%)条件下目标带的光强度值差异无统计学意义。特异性扩增产物经测序验证为目标片段。结论采用热启动PCR,同时向反应体系中添加去离子甲酰胺能有效扩增出高GC含量的DNA片段,并避免非特异性带的产生,但反应体系中去离子甲酰胺的浓度宜控制在4%-6%。这一方法不仅适用于脑腱黄瘤病的致病基因—CYP27A1基因的检测,也可用于其他富含GC的基因的检测。