人脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管修复火鼠坐骨神经缺损

目的探讨诱导后的脐带问充质干细胞作为组织工程种子细胞修复大鼠坐骨神经缺损的可行性一方法从正常足月新生儿脐带中分离培养问充质干细胞并诱导分化为神经样细胞，与去细胞神经基膜管共培养以构建组织工程神经：用30只健康成年雄性sD大鼠建立坐骨神经缺损（10mm）的动物模型并随机分成3组：A组为脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管组，B组为单纯去细胞神经基膜管组．C组为自体神经桥接组，、术后10周通过神经电生理检测、组织学观察等评测效果。结果在局部观察和肌肉测量、神经电生理检测、组织学观察等方面，脐带问充质干细胞复合去细胞神经基膜管组（A组）神经再生及肢体功能情况良好，效果接近于自体神经桥接组（C组），明显优于单纯去细胞神经基膜管组（B组）。结论脐带问充质十细胞复合去细胞神经基膜管构建的组织工程神经可有效促进大鼠坐骨神经缺损（10tnm）的修复、

异种神经基膜管桥接周围神经缺损的初步研究

目的 探索经化学萃取的去细胞神经基膜管支架用于异种移植桥接周围神经缺损的可行性。方法 SD大鼠 30只 ,随机分为 5组 ,分别制作预溃变 2周 (溃变支架桥接组 )和新鲜的兔胫神经进行化学萃取 ,形成去细胞神经基膜管支架 (异体支架桥接组 ) ,兔新鲜胫神经束 (异种神经移植组 ) ;切取自体神经 15 mm原位移植 (自体神经移植组 ) ,修复大鼠坐骨神经长 15 mm的缺损。坐骨神经切断后不作移植修复 ,为对照组。术后 6个月行坐骨神经功能指数 (SFI)测定和疼痛试验 ,用美蓝染色、免疫组织化学、透射电镜等方法对吻合口、移植体中央和远侧神经段的再生神经纤维进行形态学观察 ,并对再生有髓纤维的数量、直径及髓鞘厚度等进行量化分析。结果 术后 3个月 ,仅有溃变支架桥接组、支架桥接组和自体神经移植组动物患肢行走逐渐恢复。 6个月时 ,针刺患足可引起背部肌肉收缩和下肢屈曲反应 ;术后 6个月行 SFI检测 ,溃变支架桥接组为 - 36 .2 %± 9.7% ,支架桥接组为 - 30 .7%± 6 .8% ,自体神经移植组为 - 33.9%±11.3% ,各组间比较无统计学意义 (P>0 .0 5 )。组织学观察见溃变支架桥接组与支架桥接组移植体中央横切面再生神经呈微束状分布。透射电镜观察见再生神经纤维具有正常的形态和结构。图像分析结果显示溃变支架?

复合bFGF及肝素的外周神经桥接体在神经修复中的作用

目的:探讨bFGF和肝素与外周神经桥接体复合后在兔正中神经缺损修复中的作用。方法:成年雄性新西兰兔48只,建立左侧上臂正中神经30mm缺损。随机分为4组,分别用不同神经桥接体修复神经缺损,即A组为去细胞基膜管种植雪旺细胞并复合bFGF及肝素的桥接体、B组为去细胞基膜管种植雪旺细胞的桥接体、C组为去细胞基膜管复合bFGF及Hep桥接体、D组为自体神经作为对照。于术后1月、3月分别取材行HE及Masson’s三色染色,光镜观察神经再生、神经内胶原纤维形成及血管形成;3月检测各组桥接体运动神经传导速度,并行透射电镜检查,称量指浅屈肌肌肉湿重,观察神经功能恢复。结果:复合bFGF及肝素的桥接体组(A组、C组)神经再血管化及神经胶原形成与自体神经差异无统计学意义(P>0.05),与B组比差异有显著统计学意义(P<0.01)。A组神经再生数据(再生有髓神经纤维密度、平均髓鞘厚度、有髓纤维直径及运动神经传导速度、肌肉湿重恢复率)与自体神经移植(D组)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:bFGF及肝素用于组织工程神经桥接体修复神经缺损,能提高神经桥接体再血管化水平,减少胶原纤维形成,促进轴突生长有利于神经再生质量的提高。

脐血间充质干细胞诱导分化为类雪旺细胞修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究

目的评价将人脐血间充质干细胞（human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,h UCBMSCs）来源的类雪旺细胞（Schwann cells,SCs）作为种子细胞,修复大鼠坐骨神经15 mm缺损的效果,为h UCBMSCs应用于临床治疗周围神经缺损提供实验依据。方法 SPF级3月龄雄性SD大鼠45只,体重200-250 g。取新生儿脐带血,淋巴细胞分离液复合高分子量羟乙基淀粉分离培养h UCBMSCs并鉴定;取第3代h UCBMSCs,采用改良化学诱导法联合细胞因子方法诱导分化培养类SCs并鉴定。取15只SD大鼠坐骨神经,采用液氮反复冻融振荡洗涤法制备去细胞神经基膜管作为支架材料;将密度1×10^7个/m L的类SCs细胞悬液多点注射至该支架内复合培养7 d构建组织工程神经。取SD大鼠30只制备长约15 mm坐骨神经缺损动物模型,根据缺损神经修复方法不同,实验分为A、B、C 3组（n=10）,A组采用组织工程神经缝合,B组采用未复合类SCs的去细胞神经基膜管缝合,C组采用自体坐骨神经原位缝合。术后行大体观察、坐骨神经功能指数（sciatic function index,SFI）测定、神经电生理功能检测、腓肠肌湿重测定、Masson染色评价神经修复情况。结果分离培养的h UCBMSCs高表达MSCs表面标志;诱导培养后类SCs经免疫细胞化学染色检测示神经胶质细胞标志物S100b、胶质纤维酸性蛋白、P75表达呈阳性。术后8周,大体观察示A组组织工程神经管壁无坏死及液化,周围轻度粘连,吻合处连续性较好;B组支架外观与A组相似;C组自体神经周围粘连较A、B组轻,吻合口光滑,无明显膨大,颜色与正常神经相似。各组大鼠术后SFI随时间延长呈逐渐降低趋势,C组SFI恢复优于A、B组,A组优于B组（P〈0.05）。术后各组大鼠远端吻合口处均可检测到神经复合动作电位,波幅及传导速度C组均优于A、B组,A组优于B组（P〈0.05）。术后各组大鼠实验侧小腿腓肠肌与健侧相比,均发生不同程度萎缩;腓肠肌湿重恢复率C组优于A、B组,A组优于B组（P〈0.05）。Masson染色示A组可见大量再生神经纤维,有髓神经纤维排列较为整齐、致密,纤维直径相似;C组有髓神经纤维密度、直径及髓鞘厚度和轴突直径均明显多于A、B组,A组多于B组（P〈0.05）。结论 h UCBMSCs来源的类SCs能够促进大鼠15 mm坐骨神经损伤修复可作为组织工程神经种子细胞来源。