去细胞人羊膜基质的制备及免疫原性

目的制备去细胞人羊膜基质(AHAM)并分析其移植至小鼠体内后的免疫反应,评价去细胞人羊膜基质作为细胞移植支架的免疫原性。方法利用胰蛋白酶-EDTA消化人羊膜(HAM),去除人羊膜上皮细胞,制备新鲜去细胞人羊膜基质;新鲜去细胞人羊膜基质置于含硫酸软骨素及甘油的冷冻保护液中,-80℃保存;使用前经PBS复水处理后即冷冻去细胞人羊膜基质;免疫细胞化学分析去细胞人羊膜基质中人类白细胞抗原的表达情况;将冷冻的去细胞人羊膜基质移植至BALB/c小鼠肝脏内4周后,分析脾脏组织中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞比例的变化。结果新鲜及冷冻保存后的去细胞人羊膜基质均不表达人类白细胞抗原;冷冻的去细胞人羊膜基质移植至小鼠体内后,脾脏组织中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞无明显变化。结论去细胞人羊膜基质的免疫原性较低,移植后不会引起由T细胞介导的特异性排斥反应,可以作为免疫安全性的生物支架用于疾病的细胞移植治疗。

人脱细胞羊膜支架的制备及灭菌方法

背景:人脱细胞羊膜是通过物理、化学及生物方法对人新鲜羊膜进行脱细胞后得到的天然支架材料,其内含有丰富的胶原蛋白、蛋白聚糖、糖蛋白、生长因子和细胞外基质等,具有良好的生物相容性、天然三维结构、低免疫原性、排异反应小及取材容易等优点,被广泛应用于皮肤、角膜、骨组织修复及外周神经再生等。目的:通过对比人脱细胞羊膜不同制备方法的优缺点,将这些方法加以组合从而达到脱细胞的最优化。方法:应用计算机检索万方数据库、CNKI数据库、PubMed数据库2000-2020年发表的相关文献,中文检索词为“羊膜,脱细胞羊膜,去细胞羊膜,脱细胞羊膜支架,羊膜灭菌,组织工程”;英文检索词为“amniotic membrane,acelluar amniotic membrane,decellularized amniotic membrane,decellularized human amniotic scaffolds,sterilization of amniotic membrane,tissue engineering”,最终纳入56篇文献进行综述。结果与结论:不同的人脱细胞羊膜制备方法具有各自的优缺点,虽然都可以有效去除大部分细胞成分,但同时也对剩余细胞外基质组成、生物活性、基底膜的完整性和生物力学性能等造成不利影响。因此,需要通过不同方法之间的优势互补,进而提高脱细胞的效率。常用的联合方法有化学与生物联合法、物理与化学联合法、物理与化学/生物联合法,其中最有效的是化学、生物(酶)及物理等多种方法联合应用,先采用化学去污剂破坏细胞膜,然后用酶将细胞组分与细胞外基质分离,最后用刮擦及振荡等物理方法提高脱细胞效率,最终达到既能完全清除细胞又能保留较为完整的细胞外基质的目的。