富含多糖的白桦成熟叶片DNA的提取方法

采用常规SDS方法、改良SDS法、常规CTAB法、高盐CTAB法和改良的CTAB法对富含多糖的白桦成熟叶片DNA进行提取,并对得到的DNA进行电泳分析和含量测定,结果表明:改良的CTAB法所提取的DNA纯度高,质量较好,用限制性内切酶酶切后条带均一,证明该方法适于提取白桦成熟叶片的基因组DNA,能满足进一步分析的要求。

改良CTAB法用于提取红麻成熟叶片高质量DNA的研究

红麻处于光合高峰期的成熟叶片中的次生物质含量很高,给DNA的提取造成很大的困难。CTAB法能有效去除多糖杂质,但普通CTAB法用于红麻的DNA提取效果很不理想,为使CTAB法能更好地用于红麻的DNA提取,我们对此方法进行了改进,通过前处理除去大部分的杂质,减小了后续操作的难度。为了验证前处理是否会损失DNA,研究了液氮研磨对材料细胞的破碎程度问题,还讨论了DNA提取中的其它一些相关问题。

大枣神经保护作用的活性组分筛选及其作用机制研究

目的：筛选大枣神经保护作用的活性组分,并初步阐明其作用机制。方法：以大枣多糖富集组分（1 mg/ml）、大枣多糖去除组分（1 mg/ml）、7种大枣黄酮类成分（儿茶素、原花青素B2、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、槲皮素-3-β-D-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷,记为A、B、C、D、E、F、G,浓度均为3、13、30μmol/L）和2种大枣核苷类成分（环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷,浓度均为3、13、30μmol/L）分别培养类神经细胞（PC12细胞）24 h后,以叔丁基过氧化氢（t BHP,150μmol/L）作用于PC12细胞3 h诱导细胞氧化损伤,MTT法检测PC12细胞的存活率。按上述方法培养转染了报告基因质粒（p ARE-Luc）的PC12细胞24 h,采用荧光素酶（Luc）法检测各组细胞中抗氧化元件（ARE）的转录水平（以Luc活性反映）,以考察各组分抗损伤机制。结果：大枣多糖富集组分能显著提高氧化损伤PC12细胞的存活率,升高转染细胞内ARE转录水平。大枣所含的黄酮类成分中A（30μmol/L）、B（3～30μmol/L）和C（10～30μmol/L）均能显著高细胞存活率,且A（30μmol/L）、B（3～30μmol/L）、C（30μmol/L）、E（30μmol/L）和F（3～30μmol/L）能显著提高转染细胞内ARE转录水平。大枣中核苷类成分环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷则无明显提高氧化损伤PC12细胞存活率和和转染细胞内ARE转录水平的作用。结论：大枣多糖类成分和大枣黄酮类成分可能是大枣神经保护作用的活性组分,且其作用机制可能与激活ARE转录相关。

一种改良的CTAB法提取产多糖真菌DNA

真菌胞外多糖由于其高吸附高粘稠特点,是困扰从胞外多糖产生菌分离高纯度DNA的难点之一。本文以生产硬葡聚糖的齐整小核菌生产菌为代表,采用改良的CTAB法获得了高质量的基因组DNA。通过分层隔离等培养方法的优化降低硬葡聚糖的产生,并在传统CTAB法的基础上,用高浓度的醋酸钾和无水乙醇共同作用初步沉淀多糖,再用CTAB/NaCl溶液再次去除多糖。相比于商业的DNA提取试剂盒和传统的CTAB法,该方法得到的基因组DNA产率大幅提高,纯度较好,可充分排除胞外多糖的干扰,为各典型产胞外多糖的真菌DNA提取提供重要的参考。提取的基因组DNA可用于基因组文库构建、PCR等分子生物学实验。