基于网络药理学和分子对接探讨参枝苓口服液治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的:基于网络药理学和分子对接技术探讨参枝苓口服液治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)和中药分子机制的生物信息学分析工具数据库(BATMAN-TCM)查找与参枝苓口服液中中药相关的化学成分及其作用靶点;通过DisGeNET数据库获取与AD相关的靶标,并进一步筛选得到参枝苓口服液治疗AD的潜在作用靶点;利用Cytoscape软件构建成分-靶点相互作用网络,确认可能的关键靶点和关键通路;采用DAVID数据库对筛选出的潜在作用靶点进行基因本体(GO)功能分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路富集分析;通过分子对接预测活性成分与靶蛋白的结合能力。结果:在参枝苓口服液中,共筛选出34个与AD相关的潜在活性成分和56个潜在作用靶点;GO生物功能分析共包含541条富集结果,主要涉及基因表达的正向调节、同源蛋白结合等;KEGG富集得到214条代谢通路,主要包括AD及自噬信号通路等。分子对接结果表示β-谷甾醇、山柰酚、木犀草素与半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、前列腺素内过氧化物合酶(PTGS2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)均可较好结合,可能是参枝苓口服液抗AD最有效的活性成分。结论:网络药理学及分子对接研究结果揭示了参枝苓口服液治疗AD的多成分、多靶点、多途径的作用特点,并预测了其可能的活性成分、作用通路和关键靶点,为其药效物质基础和作用机制提供了理论基础。

参枝苓口服液治疗轻度认知功能损害的临床疗效观察

目的在中医"心主神明"理论指导下,研究以中医"调心"立方的参枝苓口服液对轻度认知功能损害(MCI)病人认知功能的临床疗效。方法以美国NIA-AA制订的"阿尔茨海默病诊断指南中AD所致MCI的核心临床诊断标准",采用随机、阳性西药对照组平行对照、盲法评分的研究方法,从MCI病人中选择给予双益平治疗者34例、参枝苓口服液治疗者35例进行疗程24周的临床观察。比较两组病人的治疗效果。结果从认知功能看,参枝苓口服液能够显著改善病人简易精神状态量表检查(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(Mo CA)和阿尔海默病评定量表-认知部分(ADAS-cog)分值(P<0.01),与双益平组疗效相当,且参枝苓组ADAScog治疗前后的差值较双益平组有统计学意义[(-2.47±0.88)分vs(0.80±0.85)分,P<0.05]。参枝苓组还能改善双手协调能力。结论参枝苓口服液具有补心气、温心阳、化痰开窍的功效,是治疗MCI的有效药物之一。

参枝苓口服液的HPLC指纹图谱构建及质量评价

目的以不同批次的参枝苓口服液为研究对象,建立参枝苓口服液的高效液相色谱指纹图谱方法,为科学评价和有效控制参枝苓口服液的质量提供科学依据。方法采用Waters Sunfire C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5!m);以乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),指纹图谱检测波长254 nm,柱温30℃,进样量10!L。采用相似度分析和聚类分析对各批次样品进行质量评价。结果 13批次的参枝苓口服液,以肉桂酸峰作为参考峰,确定了19个共有峰;相似度结果表明:未超期批次样品与共有模式之间的相似性良好,相似度的范围是0.964~0.988,而超期批次样品的相似度在0.814~0.933,超期样品与未超期样品存在差异;聚类分析将各批次样品分为三大类,超期批次样品为一类,未超期批次样品分为两类。相似度分析结果与聚类分析结果基本一致。结论本文基于高效液相色谱法构建了参枝苓口服液指纹图谱方法,该方法简便、可靠,可以作为参枝苓口服液质量控制及评价的有效方法。

基于nNOS/CAPON相互作用探讨参枝苓口服液对拟散发性AD小鼠海马突触的影响

目的探索参枝苓口服液对拟散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer’s disease,SAD)模型小鼠学习记忆能力的影响以及对神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)与神经元型一氧化氮合酶羧基末端PDZ配体(carboxy-terminal PDZ ligand of neuronal nitric oxide synthase,CAPON)相互作用及下游细胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)/环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)信号通路的调节。方法72只C57BL/6J雄性小鼠随机抽取12只作为对照组,其余60只隔日双侧侧脑室注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),制备拟SAD小鼠模型,对照组代以等体积人工脑脊液。造模组小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组和参枝苓高、中、低剂量组,各治疗组给予相应剂量的药物干预,而对照组及模型组给予等体积0.5%CMC,连续灌胃3个月。Morris水迷宫记录小鼠的逃避潜伏期和撤台后穿越平台次数;透射电镜观察小鼠海马CA1区突触数量;免疫共沉淀检测小鼠海马组织中nNOS与CAPON的相互作用;免疫组织化学染色观察小鼠海马CA1区ERK、CREB的分布及阳性表达细胞数;Western blot检测小鼠海马ERK、p-ERK、CREB、p-CREB的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数显著减少(P<0.01);海马CA1区突触数量显著减少(P<0.01);nNOS与CAPON的相互作用显著增加(P<0.01);ERK的表达无明显变化(P>0.05),p-ERK、CREB、p-CREB的表达显著下降(P<0.01),p-ERK/ERK、p-CREB/CREB水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,多奈哌齐组和参枝苓各干预组逃避潜伏期均明显下降(P<0.05或P<0.01),小鼠穿越平台次数均显著增加(P<0.01);海马CA1区突触数量均显著增多(P<0.01);nNOS与CAPON的相互作用均明显减少(P<0.05或P<0.01);ERK的表达无明显变化(P>0.05),p-ERK、CREB、p-CREB的表达均有不同程度的增加(P<0.05或P<0.01)),p-ERK/ERK、p-CREB/CREB水平显著增加(P<0.01)。结论参枝苓口服液可通过减少nNOS与CAPON的相互作用,增加ERK/CREB通路相关蛋白的表达及突触数量,改善拟SAD小鼠的学习记忆能力。

近红外光谱技术快速测定参枝苓口服液醇沉过程中的5种指标成分

建立一种运用近红外光谱技术快速测定参枝苓口服液醇沉工艺过程中芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷、肉桂酸、甘草酸5种指标成分含量的方法。以高效液相色谱法为参考方法,比较了不同光谱预处理方法和波段选择方法对定量分析模型结果的影响,运用偏最小二乘回归法建立了参枝苓口服液醇沉工艺过程中5种成分的定量分析模型。醇沉工艺过程中芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷、肉桂酸、甘草酸5种成分近红外定量分析模型评价参数Rcal2,Rpred2,RMSEC,RMSEP,RPD分别为:芍药苷0.993 3,0.997 6,0.084 9 g·L^(-1),0.073 3 g·L^(-1),14.7;芍药内酯苷0.991 4,0.992 7,0.028 1 g·L^(-1),0.030 5 g·L^(-1),10.2;甘草苷0.955 3,0.976 1,0.012 0 g·L^(-1),0.012 3 g·L^(-1),5.1;肉桂酸0.958 8,0.990 3,0.003 89 g·L^(-1),0.002 89 g·L^(-1),7.1;甘草酸0.982 0,0.986 3,0.053 8 g·L^(-1),0.059 0 g·L^(-1),7.2。该方法能够实现参枝苓口服液醇沉工艺过程中多组分含量快速检测,实时监控生产过程,保证生产质量。

基于“谱-效-代”关联的参枝苓口服液质量标志物的初步研究

目的建立基于“谱-效-代”关联的参枝苓口服液(SZL)质量标志物(Q-marker)研究策略。方法测定12批次SZL的HPLC指纹图谱和乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制活性,采用正交信号校正-偏最小二乘回归(OSC-PLSR)分析方法建立HPLC指纹图谱和AchE抑制作用之间的谱效关系,结合网络药理学,确定药效相关成分;通过血清药物化学鉴定入血成分,确定药效活性成分;关联整合药效相关成分和药效活性成分,综合分析,挖掘Q-marker。结果OSC-PLSR分析结果确定了3个药效相关成分与AchE抑制作用密切相关;网络药理学映射与阿尔茨海默病(AD)相关的疾病靶点确定了61个药效相关成分;通过UHPLC-Q Exactive高分辨液质联用技术鉴定了血浆中11个药效活性成分;关联整合综合分析初步确定SZL的Q-marker为芹糖甘草苷、芍药内酯苷和壬二酸。结论谱效关系、网络药理学和入血成分鉴定的结合是一种快速分析及发现SZL Q-marker的有效方法,对于完善中药质量控制和评价方法,保证中药的安全和有效具有重要意义。

参枝苓口服液对阿尔茨海默病患者精神行为症状的影响

目的:观察参枝苓口服液(SZL)对阿尔茨海默病(AD)患者精神行为症状(BPSD)的影响。方法:将106例伴有BPSD的AD患者随机双盲分为SZL组(n=53)和安慰剂组(n=53)。所有患者均采用西医常规药物治疗,SZL组患者加服SZL,安慰剂组患者加服安慰剂口服液,两种口服液治疗周期均为20周,停药后随访5周。分别于服药前1周及服药第10周、第20周、第25周(即停药后第5周)评价患者的AD病理行为量表(BEHAVE-AD)评分和神经精神问卷(NPI)评分,同时采用加速度记录仪去趋势波动分析(DFA)方法评价患者的昼间活动量(DA)、晚间活动量(EA)、夜间活动量(NA)的变化。结果:在服药后第20周及第25周时,安慰剂组患者的BEHAVE-AD的幻觉、行为紊乱、攻击行为、昼夜节律紊乱、情感障碍、焦虑和恐惧维度评分较服药前显著升高(P<0.05);且SZL组患者的幻觉、行为紊乱、攻击行为、焦虑和恐惧维度的评分显著低于安慰剂组(P<0.05)。在服药后第20周及第25周时,安慰剂组患者的NPI的妄想、幻觉、激越、异常运动行为、睡眠障碍维度评分较服药前显著升高(P<0.05);且SZL组患者的妄想、幻觉、激越、异常运动行为、睡眠障碍维度评分显著低于安慰剂组(P<0.05)。在服药后第20周及第25周时,安慰剂组患者的EA、NA参数值较服药前显著升高(P<0.05);且SZL组患者的EA、NA参数值显著低于安慰剂组(P<0.05)。结论:SZL能在一定程度上延缓AD患者BPSD的进展,且无毒副作用,适于长期服用。

参枝苓口服液对APP/PS1双转基因小鼠海马α7-nAChRs和mGluR5表达的影响

目的探讨参枝苓口服液对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元突触信号传递相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5表达的影响。方法将雄性3月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分成5组,模型组、多奈哌齐组[0.92 mg/(kg·d)],参枝苓大剂量组[50 g/(kg·d)]、参枝苓中剂量组[25 g/(kg·d)]、参枝苓小剂量组[12.5 g/(kg·d)]。正常组为同月龄同背景野生型C57BL/6J小鼠。连续灌胃3个月,进行行为学跳台实验。实验结束后取海马组织,运用蛋白印迹法(Western blot)和免疫组织化学方法检测小鼠海马CA1区突触相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5的表达。结果 Western blot检测显示,模型组小鼠海马α7-nAChRs的蛋白条带比正常组小鼠明显变窄,颜色变浅(P<0.01)、而mGluR5蛋白条带明显增宽,颜色变深(P<0.01);与模型组小鼠相比,各干预组α7-nAChRs蛋白条带增宽、颜色变深(P<0.05或P<0.01),mGluR5蛋白条带变窄、颜色变浅(P<0.05或P<0.01)。免疫组织化学染色检测小鼠海马α7-nAChRs和mGluR5的阳性细胞表达结果与Western blot检测结果一致。结论参枝苓口服液可能是通过调节小鼠海马CA1区突触中的关键蛋白,改善突触功能发挥减缓阿尔茨海默病(AD)大脑损伤,维持记忆获得能力,从而发挥抗痴呆作用。

近红外光谱分析技术在白芍水提过程中的在线控制研究

采用近红外光谱技术研究一种参枝苓口服液白芍单提过程的在线分析技术。方法在实验室模拟生产基础上,采用ANTARIS II近红外光谱仪采集白芍水提中间体的近红外光谱并采用高效液相色谱法测定样品中芍药苷含量,通过偏最小二乘法(PLS)拟合光谱数据与液相数据,建立了白芍水提过程中芍药苷定量分析模型。结果研究结果显示采用经OSC结合mean center预处理处理光谱在全光谱范围内所建模型最佳,模型评价参数RMSEC、R2cal、R2val、LVs分别为0.080 5、0.968 4、0.920 6、4,模型结果良好。结论本实验为参枝苓口服液白芍水提过程在线监控提供一种新的方法,有利于提高产品芍药苷含量为产品稳定生产及产品质量提供保障。